禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究 (Ⅳ报)——疫苗的田间试验

[目的]评价禽霍乱-新城疫二联油乳剂灭活疫苗的临床应用效果,为联合防制禽霍乱和新城疫提供条件。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌1502强毒株与鸡新城疫病毒La Sota弱毒株混合,制备成5批合格的二联油乳剂灭活苗,用于鸡、鸭和鹅的田间安全性和免疫保护试验。[结果]田间安全性试验表明,免疫鸡、鸭和鹅均未出现不良反应;鸡的田间免疫效力试验表明,7～14日龄雏鸡和60～90日龄青年鸡免疫3周后新城疫血凝抑制（ND-HI）抗体效价均比对照组高2～3 log2,可持续4个月以上,禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率均达到75.0%以上,免疫效力可持续6个月;鸭和鹅的田间免疫效力试验表明,接种3周后免疫组ND-HI抗体效价均≥4.2 log2,对照组均≤2 log2;鸭、鹅的禽多杀性巴氏杆菌攻毒保护率分别在75.0%和62.5%以上。[结论]该二联苗免疫禽类安全可靠,具有良好的免疫效果。     

禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ报)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验

[目的]为禽霍乱、新城疫二联油乳剂灭活疫苗免疫鸭和鹅等水禽提供理论依据。[方法]将禽A型多杀性巴氏杆菌接种固体培养基收获的菌液与鸡新城疫病毒弱毒株La Sota接种易感鸡胚收获的感染鸡胚液混合,用甲醛溶液灭活后制备成5批二联油乳剂灭活苗,用于鸭和鹅的安全性及免疫效力试验。[结果]5批二联苗对鸭和鹅的安全性试验表明,免疫鸭和鹅均未出现任何不良反应;免疫效力试验表明,免疫后3周,鸭和鹅的新城疫血凝抑制抗体效价均≥4 log2,新城疫攻毒保护率均为100%,禽霍乱攻毒保护率为66.7%~83.3%。[结论]该二联苗用于免疫鸭和鹅安全可靠,免疫效果良好。     

兔病毒性出血症、巴氏杆菌病二联蜂胶灭活苗的研制

应用兔出血症病毒(RHDV)和巴氏杆菌(Pm)联合研制而成的蜂胶佐剂灭活苗,用 1 mL 免疫试验兔,免疫后第 5d,对 RHDV 保护率达 100%(5/5);免疫后第 14d,对巴氏杆菌的保护率达 100%(4/4),第 7d 即产生较强的免疫力。T 细胞总玫瑰花环形成率(Et率)、活性玫瑰花环形成率(Ea率)的测定结果表明:蜂胶具有提高机体细胞免疫功能的作用;通过 HI 法监测兔病毒性出血症抗体水平,结果表明:蜂胶苗产生抗体时间较早,第 7d 抗体效价可达到较高水平(26.8),第 21 d 达到高峰(28.8)。     

兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病(A型)三联浓缩灭活疫苗的研制

通过对抗原的浓缩 ,试制成功兔病毒性出血症、多杀性巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )三联氢氧化铝浓缩灭活疫苗。将该三联疫苗按每只 1ml的剂量免疫家兔 ,2 1d后效力试验结果表明 ,对兔病毒性出血症的保护率为 10 0 % ;对兔巴氏杆菌病、产气荚膜梭菌病 (A型 )的保护率均达 80 %以上 ,且对上述 3种病的免疫期为 180～2 10d(即 6～ 7个月 )。该疫苗 4～ 8℃保存 15 0d(5个月 )后保护力几乎没有下降     

湖南小鹅瘟防治研究 Ⅱ.小鹅瘟疫苗的研制及其应用效果

采用本地小鹅瘟强毒株C-85 F~2成功地研制了鹅胚化小鹅瘟(简称SEP)和鸭胚化小鹅瘟(简称SGD)疫苗,并对两苗进行了安全试验、无菌试验、效力测定试验和田间免疫试验。结果表明,用SEP或SGD原液2lm肌注成年母鹅均安全;经1次免疫(1:1OO SGD或1:100 SEP每只1ml)或2次免疫(1:100 SGD和1:50 SEP每只各1ml)的成年母鹅种蛋所孵的鹅胚或雏鹅,都具有抵抗小鹅瘟强毒的能力,其保护率达90%;在岳阳、怀化等地田间免疫母鹅的跟踪调查,其抵抗自然感染的保护率为95%。     

禽多杀性巴氏杆菌、H9亚型禽流感二联灭活疫苗研制及免疫效力试验

采用鸡胚共同增殖禽多杀性巴氏杆菌和H9亚型禽流感病毒的方法制备的抗原中含巴氏杆菌数≥4×1010CFU/mL、H9亚型禽流感病毒含量≥109.38EID50/mL,经灭活后制备3批二联灭活疫苗并进行了相关检验。结果表明,所研制的3批二联疫苗的物理性状、无菌检验以及安全检验均符合相关质量标准;用3批疫苗分别免疫试验鸡和试验鸭,21 d后对禽多杀性巴氏杆菌免疫保护率均为90%以上,对H9亚型禽流感免疫保护率均为85%以上。     

鸭巴氏杆菌病油佐剂灭活苗的研制

为研究利用当地分离菌株制备鸭巴氏杆菌病疫苗的方法,本试验从泰州地区疑似巴氏杆菌病的病死鸭中分离出巴氏杆菌,经鉴定合格后作为菌种。用马丁肉汤培养后获得菌液,甲醛灭活,加油佐剂制成鸭巴氏杆菌油佐剂灭活苗。无菌检验,安全检验合格;效力检验中,免疫接种剂量为1 m L时,免疫保护率为100%,表明本次所制备疫苗安全有效。     

湖南小鹅瘟防治的研究——Ⅴ.不同毒力疫苗和不同免疫程序与雏鹅保护率的关系

1990～1992年,在湖南省武冈、岳阳、芷江和湖北省公安等县,用不同毒力的小鹅瘟疫苗,采用不同的免疫程序免疫母鹅.同时,采用免疫后175～188 d 内的母鹅产蛋所孵化的雏鹅进行攻毒试验.田间试验结果表明:用小鹅瘟鸭胚苗或鹅胚苗采用一次免疫法,母鹅免疫后175～182 d内,其后代的保护率为81.7%～87.0%;两次免疫法,首次用鸭胚苗或鹅胚苗,第2次用毒力较强的鹅胚苗,其后代的保护率为89.3%～94%.在攻毒试验中前一种方法对雏鹅的保护率只有60%～81.8%,而后一种方法则达到了86.6%～90.4%.     

兔巴氏杆菌大肠杆菌油乳灭活苗的制备及效果测定

以多杀性巴氏杆菌(C-481)、致病性大肠杆菌O85、O119、O18等菌株制备的兔巴氏杆菌 大肠杆菌油乳灭活菌苗，经实验室免疫实验和中间实验表明，该菌苗在免疫后第14天即可产生坚强的免疫力；攻毒实验表明。该菌苗的保护率为93％，免疫期为9个月。免疫效果普遍反应良好。该菌苗在4℃可保存18个月以上。室温阴暗处可保存10个月以上。临床证明该菌苗能有效地控制巴氏杆菌与大肠杆菌在兔群中的流行。可进行推广应用。     

兔病毒性出血症和巴氏杆菌病灭活二联苗的研究与应用

用感染ＲＶＨＤ病兔的肝，脾，肾以及从鸡，兔混养暴发氏杆菌病兔体分离的细菌研制的甲醛灭活二联苗，免疫健康易感兔，于免疫后对ＲＶＨＤ强毒攻击第３天保护率达５０％，第５天达１００％，持续保护６个月以上，抗体动态测定与玫毒结果一致 ，对巴氏杆菌攻击第７、１５天的保护率分别达７５％、９１．７％，６个月保护率仍达７２．２％。     

商品肉鹅新城疫母源抗体的消长规律及其最佳首免日龄

[目的]探讨商品肉鹅新城疫母源抗体消长规律及最佳首免日龄。[方法]通过血凝(HA)试验和血凝抑制(HI)试验,对商品肉雏鹅在不同时间首次接种鹅源新城疫油乳剂灭活疫苗后的免疫效果进行监测,以确定最佳首免日龄,并对ND母源抗体进行动态分析。[结果]霍尔多巴吉肉鹅的母源抗体由1日龄的10 log2下降到25日龄的0.6 log2。母源抗体水平4 log2作为免疫接种的临界点。7日龄免疫组HI抗体水平20日龄后一直维持在临界点以下,不能达到疫苗保护水平;11日龄免疫组HI抗体水平在免疫后16 d达到临界点,到出栏前仍维持较高水平;14日龄免疫组HI抗体水平在免疫后约22 d达到临界点。[结论]霍尔多巴吉肉鹅母源抗体半衰期约为2.7d,11日龄为霍尔多巴吉商品肉鹅新城疫的最佳首免日龄。     

禽霍乱·新城疫二联油乳剂灭活疫苗研究(Ⅲ)——疫苗对鸭和鹅的安全性及免疫效力试验(英文)

[Objective] The aim of this study is to provide theoretical basis for immunizing waterfowls(duck and goose)with the inactivated oil emulsion binary vaccine against Newcastle Disease(ND)and Fowl Cholera(FC).[Method]Bacterial liquid from solid culture media inoculated avian Pasteurella multocida(APM)type A and allantoic fluid from embryonic eggs infected with Newcastle Disease Virus(NDV)attenuated strain La Sota were mixed and inactivated by formalin to prepare 5 batches of inactivated oil emulsion binary vaccine,which were then used for the safety and immune efficacy test on duck and goose.[Result]Immunized ducks and geese didn’t performed any adverse reactions in the safety test of the 5 batches of vaccine;the immune efficacy test showed that ND-HI antibody titers of ducks and geese were no less than 4 log2 three weeks after inoculation,and the protection rates against NDV and APM were 100% and 66.7%-83.3%,respectively.[Conclusion]The binary vaccine against ND and FC is safe and reliable for duck and goose,and can provide them with sufficient immunity protection against ND and FC.     

小鹅瘟病毒VP3真核表达质粒与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的比较

 【目的】比较小鹅瘟病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）和弱毒疫苗免疫鹅体内的免疫应答,以期为进一步研究和阐明pcDNA-GPV-VP3免疫发生机理、免疫持续期等提供基础数据。【方法】将pcDNA-GPV-VP3和小鹅瘟弱毒疫苗分别免疫30日龄四川白鹅,用免疫组织化学方法检测免疫鹅体内GPV抗原的分布,用淋巴细胞增殖实验和间接ELISA分别检测免疫鹅的细胞免疫水平和血清抗体滴度,比较GPV基因疫苗与弱毒疫苗诱导鹅体免疫应答的能力。【结果】①弱毒疫苗组于免疫鹅的心、肝、脾、肺、肾、法氏囊、胸腺、哈氏腺、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠、胰腺、大脑及注射部位肌肉均中检测到GPV抗原;基因疫苗组于免疫鹅的心、十二指肠、空肠、回肠、直肠、盲肠及注射部位肌肉中检测到GPV抗原。②弱毒疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞14 d后对ConA的反应开始增强,35 d达到最高值后下降;基因疫苗免疫雏鹅外周血T淋巴细胞OD值先下降,14 d后开始上升并高于空白质粒对照鹅和PBS对照鹅,35 d时达最大值,以后又逐渐下降,第21-63天极显著（P＜0.01）高于PBS对照鹅和空白质粒对照鹅,第21-63 天时极显著（P＜0.01）高于弱毒疫苗免疫鹅。③弱毒疫苗免疫鹅血清抗体第3天开始高于PBS对照鹅,第28天达到最大值后逐渐下降;基因疫苗免疫鹅血清体从第14天开始高于PBS对照组,第28天达最大值,第21-217天显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于PBS和空白质粒对照鹅;基因疫苗免疫鹅血清抗体除第28天极显著(P＜0.01)高于GPV弱毒疫苗免疫鹅外,其余时间与弱毒疫苗免疫鹅差异不显著。【结论】pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后能在免疫部位皮肤、心肌和各肠段中表达并能够诱导鹅体产生良好的细胞免疫和体液免疫,基因疫苗诱导鹅体产生免疫应答的能力优于弱毒疫苗,结果为阐述pcDNA-GPV-VP3的免疫机制和临床应用提供了数据资料。     

猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎和猪轮状病毒三联苗免疫试验

本研究采用猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒细胞培养物制备了三联灭活疫苗，实验室免疫结果表明，肉猪和妊娠母猪免疫后15d达到较高的免疫水平，免疫有效期超过6个月。妊娠母猪所产仔猪可获得高水平的被动免疫保护。试验场应用结果表明母猪保护率达98％，仔猪被动免疫保护达93％。     

棘胸蛙虹彩病毒免疫方法研究

[目的]研究棘胸蛙虹彩病毒疫苗体表喷雾和肌肉注射的免疫效果,为其免疫方法提供理论依据。[方法]用不同浓度棘胸蛙虹彩病毒灭活疫苗进行体表喷雾免疫和肌肉注射免疫,并进行血清抗体效价检测和相对免疫保护率测定。[结果]注射0.2 m L 1×108TCID50/m L疫苗组21 d血清中和抗体效价最高达到380.2,相对免疫保护率达到80%;体表喷雾1×107TCID50/m L疫苗组,28 d最高抗体效价为320.0,相对免疫保护率为60%。[结论]肌肉注射疫苗和体表喷雾疫苗对棘胸蛙都有较好的免疫效果,肌肉注射疫苗组的免疫效果最佳,但喷雾免疫可作为棘胸蛙快速无损伤免疫的一种有效途径。     

兔病毒性出血症4种灭活疫苗的研制及效果比较

[目的]研制兔病毒性出血症新型疫苗.[方法]分别以黄芪多糖、蜂胶、铝胶、生理盐水为佐剂,研制兔病毒性出血症黄芪多糖佐剂、蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗,并从安全、免疫效果等方面对这4种疫苗进行比较.[结果]4种疫苗均有良好的安全性.免疫后7d4种疫苗产生的特异性抗体效价均逐步升高,攻毒保护率均达到100％.免疫后14 d黄芪多糖佐剂抗体效价显著高于蜂胶佐剂、铝胶佐剂以及常规灭活疫苗.免疫后180 d黄芪多糖佐剂疫苗的保护率达75％,蜂胶佐剂与铝胶佐剂可达到50％,常规灭活疫苗的保护率达25％.[结论]这4种疫苗均具有良好的安全性和免疫原性,其中黄芪多糖灭活苗的免疫效果最好.     

猪瘟疫苗免疫后IFN-γ水平的检测

［目的］通过检测猪瘟疫苗免疫后的IFNγ水平探讨仔猪细胞免疫情况。［方法］采用超前免疫和普通免疫2种方法对仔猪进行猪瘟免疫,用流式细胞仪对猪瘟疫苗免疫后仔猪外周血单核细胞（PBMC）中分泌IFNγ细胞数量进行检测。［结果］无论采取哪一种方法进行免疫,仔猪PBMC中分泌IFNγ细胞的比例均显著增多,且一直维持在较高的水平。当在60日龄仔猪进行第2次免疫后分泌时,IFNγ细胞的比例增加更为明显,而对照组仔猪分泌IFNγ细胞的比例在试验过程中则一直维持较低的水平,这说明猪瘟疫苗能够诱导仔猪体内IFNγ水平升高,间接表明猪瘟疫苗注射后激发了机体的细胞免疫应答。［结论］与普通免疫方法相比,采用超前免疫方法能够使仔猪及早地产生针对猪瘟的细胞免疫反应。     

鹅脾脏非特异性转移因子的粗提取与活性鉴定

[目的]从鹅脾脏中提取非特异性转移因子并对其进行活性鉴定。[方法]采用透析法,从鹅脾脏中粗提取转移因子,研究其对机体的免疫力的影响。[结果]获得的鹅非特异性转移因子粗提物澄清透明、微黄色、无毒,不含大分子蛋白质,pH 6.72,小分子多肽含量为23.78μg/ml。雏鸭免疫抗体水平检测试验结果显示:用鸭传染性浆膜炎灭活苗与TF粗提液同时免疫的鸭群抗体滴度显著高于注射生理盐水的对照组。仅注射灭活苗的鸭群抗体滴度与对照组鸭群差异显著。这说明鹅脾脏转移因子粗提液对增强机体的免疫力具有一定作用。[结论]该试验为进一步研究鹅脾脏非特异性转移因子的生物学活性与应用提供理论依据和技术参考。