Dual RNA-seq技术及其在宿主-病原体相互作用中的研究进展

利用转录组测序技术(RNA-seq)进行转录组分析是了解病原体入侵宿主分子变化的重要工具,与RNA-seq相比,Dual RNA-seq技术无需分离两物种,只需构建一个转录组文库,便能同时对两个(或多个)研究对象进行测序和分析,能够直观的揭示病原体和宿主相互作用过程中转录组学动态变化。同时还可以通过互作模型图获得物种间基因的调控关系,预测两物种相互作用的机制,被广泛应用到人类疾病和生物感染模型的相互作用研究中。为了解Dual RNA-seq技术及其在宿主-病原体相互作用研究中的前景,本文对Dual RNA-seq在宿主-病原体相互作用研究进展进行综述。     

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白在ELISA中的应用

猪传染性胃肠炎(TGE)是引起猪腹泻的病毒性传染病,感染猪的主要临床症状是腹泻、呕吐和脱水,不同年龄的猪均易感,尤其两周龄以内的猪死亡率可达100%,给养猪业造成了巨大的经济损失.因此开展猪传染性胃肠炎诊断方法的研究对该病的防制具有重要意义.     

猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白的表达及在ELISA中的初步应用

重组质粒PET-N转化大肠杆菌（Escherichia coli） BL21菌株,在1.0 mmol/L IPTG和37℃条件下诱导,外源基因获得高效表达。Western blot检测证明,表达产物具有良好的反应原性。以纯化的蛋白为抗原建立了检测猪传染性胃肠炎抗体的间接ELISA方法,确定抗原最佳包被浓度为15 μg/mL,抗体稀释度1∶40,最适封闭液为5% FBS,血清反应时间为90 min,酶标二抗HRP SPA的工作浓度为1∶5 000,反应时间为60 min,底物在室温显色时间为10 min,待检血清阳性标准定为光密度OD450≥0.35。与 Svanova TGEV/PRCV 抗体诊断试剂盒比较,此方法的特异性、敏感性和符合率分别为93.8%、93.5%和93.5%。     

猪传染性胃肠炎病毒四川株M蛋白基因克隆分析及真核表达载体构建

猪传染性胃肠炎病毒(Porcine Transm issible Gas-troenteritis virus,TGEV)主要引起2周龄以内仔猪发生以严重急性腹泻、脱水及高死亡率为特征的猪传染性胃肠炎(TGE)。研究从猪传染性胃肠炎病毒四川株(SC-Y)中扩增克隆获得M蛋白基因,并成功构建了其真核表达载体,这为进一步深入     

养鸡场的饮水免疫工作

一、饮水免疫前的准备工作１．确定免疫时间我们要进行免疫的鸡群首先是健康无病的。对于有病的鸡群,如果再进行一次免疫,将加强鸡群的应激,促使鸡群症状加重。一般鸡场应根据当地兽医部门推荐的免疫程序对鸡群进行免疫;有条件的鸡场可对鸡群进行抗体水平监测后再确定...     

牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化检测法与血清ELISA检测法的比较

【目的】比较牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化法与血清ELISA法,验证免疫组化抗体符合率。【方法】用免疫组化法与血清ELISA法共检测牛血清和肝脏样品各87份,羊血清和肝脏样品各84份;比较牛羊肝脏中HEV抗原免疫组化法与血清ELISA法检测结果,"2检验。【结果】检测牛血清抗HEV-IgG抗体检测结果显示,阳性率达21.84%。制作免疫组化染色切片检测结果显示,阳性率达19.54%。羊血清抗HEV-IgG抗体检测结果显示,阳性率达14.29%。制作免疫组化染色切片检测结果显示,阳性率达11.90%。两种检测方法比较统计学分析表明,牛组"2=0.50,P>0.05,羊组"2=0.50,P>0.05,牛羊各组结果均不显著。【结论】免疫组化染色方法可以替代复杂的血清ELISA法,用于屠宰牛羊肝脏中HEV抗原的检测。     

猪呼肠孤病毒SC-A株的分离鉴定及σ2基因的克隆与序列分析

通过在病毒培养液中添加胰酶的方法,从仔猪腹泻粪样中分离并鉴定了1株能在Vero细胞上稳定产生CPE,并以细胞颗粒增多、肿胀、漂落为特征的猪呼肠孤病毒SC-A株。在感染细胞中,病毒胞浆包涵体及特征性微管样结构明显,病毒粒子多呈典型的晶格状排列,大小约70 nm。S2基因的克隆测序结果表明,SC-A S2全基因(DQ396805)大小为1 331 bp,其开放阅读框编码一个由418个氨基酸组成,相对分子量约为47 140的σ2蛋白;与标准株T1L、T2J、T3D的核苷酸序列和推导氨基酸序列的同源性分别为86.9%、76.7%、85.4%及94.6%、93.3%、98.3%。以σ2氨基酸序列构建的进化树分析显示,标准株及野外分离株可被划分为A(T3)、B(T2)、C(T1)3个群;除T3C31外,其余3型野外分离株及SC-A株和所有血清1型均位于C群中。     

猪传染性胃肠炎病毒 M 基因酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

筛选与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)M蛋白相互作用的宿主蛋白,构建M蛋白的诱饵载体pGBKT7-M.首先利用PCR技术从重组表达载体pFastBacTM-M中扩增得到M基因,定向克隆至载体pMD19-T simple,验证正确后克隆至酵母双杂交系统诱饵表达载体pGBKT7,经双酶切、PCR反应及测序验证其正确插入后,利用PEG/LiAc法将构建好的重组诱饵载体pGBKT7-M及空载体pGBKT7分别转化到酵母Y2HGold感受态细胞中,检测其对酵母菌株是否有毒性作用和自激活活性及诱饵蛋白在酵母细胞内的表达情况.结果表明:扩增得到M基因738bp,成功构建了诱饵表达载体pGBKT7-M,此诱饵载体对酵母细胞无细胞毒性和自激活活性.Western blot检测到5×104左右的蛋白条带,显示诱饵蛋白在酵母细胞内稳定表达.     

猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白的生物信息学分析

利用生物软件对猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白所含的生物学信息进行了分析。结果显示,SC-Y株与TGEV其他参考毒株(Miller M60、Miller M6、Purdue、Purdue P115、PUR46-MAD、TS)5′UTR的二级结构差异显著,预测结构蛋白特性显示,N蛋白没有跨膜区域、糖基化位点及信号肽序列,属于非分泌性蛋白。在4种结构蛋白中,N蛋白的氨基酸变异率最低,为2.14‰。与MillerM60株、Miller M6株和TS株相比,SC-Y株S基因第1 123~1 128位核苷酸缺失6个碱基(AATGAT),在sM基因核苷酸第163~165位,SC-Y株比TFI株和FS772/70株多出3个碱基(ATT)。     

伪狂犬病基因缺失疫苗SA215抗强毒潜伏感染能力

通过建立能鉴别野毒和疫苗毒的多重PCR,确定试制的伪狂犬病基因缺失疫苗SA215对强毒潜伏感染的建立及随后被激活的影响。同时模拟了田间条件下对野毒潜伏感染猪接种的安全性和接种对已建立的潜伏感染的影响。结果表明,接种伪狂犬病基因缺失疫苗SA215在一定程度上能阻止强毒潜伏感染的建立和随后的激活。试制的疫苗对潜伏感染猪接种安全,对潜伏感染的消除有一定的作用,但不明显。