波尔山羊羔羊超数排卵及体外受精的研究

本试验探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精效果。应用4种不同的促性腺组合,对16只7周龄的波尔山羊进行超排,并对采集的卵子实施体外受精。共获得卵母细胞918枚,其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49,87,429,293枚,各组间差异显著（0．01〈P〈0．05）。卵母细胞进行体外培养24h后与上游法获能的精子体外受精,48h后各组的卵裂率分别为27％,21％,60．2％,69％,其中CIDR＋PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）;6d到10d各组囊胚率分别为7％,6．5％,18％,13％,PMSG＋FSH处理组、GnRH＋FSH处理组、CIDR＋PMSG＋FSH处理组差异极显著（P〈0．01）。结果表明,CIDR＋FSH处理组和CIDR＋PMSG＋FSH处理组能显著提高超排效果,两组获得的卵子受精后的卵裂率和囊胚率高于其他组。     

波尔山羊早期胚胎玻璃化冷冻保存和移植的研究

在25℃室温下，采用不同浓度的乙二醇作为玻璃化冷冻液的主要成分，对波尔山羊早期胚进行一步法冷冻（-196℃），同时采用常规冷冻保存作为对照组。结果显示，一步法冷冻囊胚发育率为68．75％（11／16），移植受体妊娠率为54．55％（6／11），产羔率为36．36％（4／11）。说明了此实验所采用的冷冻保护剂及玻璃化冷冻方法，能有效地对山羊早期胚胎进行冷冻保存。     

奶牛胚胎一步冷冻保存的研究

用ＦＳＨ－ＰＧＦ＿（２α）超排黑白花奶牛２２头，以非手术方法采得７～８日龄胚胎６８枚，其中４５枚胚胎用于一步冷冻试验。水浴解冻后共回收４０枚胚胎。用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖一步除去保护剂，胚胎形态完好率为９０％（３６／４０）；荧光染色阳性率为８７．５％（７／８）；体外培养发育率为７５％（６／８）；冻胚移植受体妊娠率为４３．５％（１０／２３）。     

波尔山羊胚胎回收和移植器械研制与应用

采用自己研制开发的波尔山羊胚胎手术回收和移植的关键器械，共进行122只供体的胚胎回收，回收供体卵巢上正常黄体总计2751枚，回收卵总数2504枚，回收率达到92．3％。采用这种自行研制的胚胎移植器械进行胚胎的子官移植，将2127枚波尔山羊胚胎移植给1182只受体，受体妊娠率达到63．0％（745／1182），证明该胚胎移植器械和制定的应用程序是可行的。     

牛胚胎移植试验研究

本研究应用国产激素和器械对奶牛进行超数排卵，采用胚胎移植技术使黄牛繁殖奶牛。５ａ共超排供体牛１８５头，成功１５９头，成功率为８１．９５％；共获卵１２０１枚，头均７．５５±６．３７枚，其中可用胚胎８８０枚，头均５．６８±４．９６枚。同期发情处理受体牛２３６头，发情１３９头，发情率５８．９０％；鲜胚移植受体牛１７８头，受胎７８头，受胎率为４３，８２％，其中移植受体黄牛１４５头，受胎６１头，受胎率４２．０７％，移植受体奶牛３３头，受胎１７头，受胎率为５１．５２％；冷冻胚胎移植受体牛６１头，受胎２７头，受胎率为３７．７０％；５３胚胎移植产犊８５头。确立了应用国产激素垂体促卵泡素（ＦＳＨ）和前列腺素（ＰＧＧ＿（２２））诱发牛超数排卵和发情同期化处理的最佳程序和剂量，并总结出了采卵方法、胚胎鉴定、胚胎冷冻保存和移植等相应环节的技术规程。     

不同来源FSH对波尔山羊超数排卵效果的影响

为提高优秀渡尔山羊个体繁殖效率,本研究采用三种不同处理方法,分别为加拿大进口促卵泡素（FSH）处理、中科院的国产FSH处理和前两种混合激素处理,分别对优秀波尔山羊雌性个体进行超数排卵诱导。结果显示,进口激素处理组,国产激素处理组和混合处理组,其促发情有效率分别为100％、80％和100％,羊均可用胚数分别为12．OO±7．97枚、12．43±6．75枚和9．73±6．65枚,可用胚率分别为91．43％、83．56％和82．66％。生物学统计显示,三组处理组间可用胚数量差异不显著（P〉0．05）。结果表明,国产FSH同样可以得到较好的母羊超排反应和理想的胚胎产量。     

波尔山羊胚胎冷冻和移植试验

用含1．5M乙二醇,0．1M蔗糖、20％NCS(V／V)的PBS液,或含1．5M乙二醇,20％NCS的PBS为冷冻保护液,将42枚A级胚胎(致密桑葚胚16枚,早期囊胚26枚)一并移入冷冻保护液,并进行快速冷冻,在降温至-36℃时将胚胎投入液氮保存。解冻时,胚胎细管先在室温(20～22℃)空气中停留15s后进入水浴快速解冻,解冻后一步除去保护剂,移入含20％NCS的PBS液中保存,手术移植入受体子宫角内。结果表明,解冻后形态质量完好的A级冻胚达88,1％(37／42),移植受体妊娠率达42,9％,说明本试验采用的胚胎冷冻-解冻程序,能有效地进行波尔山羊致密桑葚胚和囊胚的冷冻保存。     

体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20 的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3% (35/112)极显著高于EPS10组的12.2% (13/107)（P＜0.01）,选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛"康康"和"双双"进行了超排试验,分别获得6枚（4枚可用胚）和10枚（9枚可用胚）胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛"双双"的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素（FSH）具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。     

鲁西黄牛超数排卵与冻胚移植

1990～1991年按鲁西黄牛超排技术程序,用 FSH+PGF_(2α)对11头鲁西黄牛进行超排处理,有效率为100%。共获卵119枚,其中可用胚92枚,胚胎可用率为77.3%。按鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序,以甘油作冷冻保护剂,对 A、B 级胚胎进行常规冷冻。解冻33枚,27枚可用,解冻恢复率为81.8%。将23枚可用胚移植23头受体,90天妊检,13头妊娠,妊娠率为56.5%。     

波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究

1999～2000年,在成都波尔山羊种羊场进行了波尔山羊胚胎移植奶山羊应用技术研究.对12只供体用FSH减量法进行超排处理,回收胚胎257枚,平均21.4±11.1枚,其中可用胚206枚,平均17.2±8.33枚.将170枚可用胚移植给同期发情的78只雅安奶山羊受体,其中2只在妊娠2个月后流产,49只受体羊妊娠到期产下纯种波尔山羊羔88只,移植受体妊娠率65.4%(51/78),产羔受体比率62.8%(49/78),胚胎成羔率51.8%(88/170).平均每只波尔山羊供体通过胚胎移植增加纯种后代7.33只.其中RB52号波尔山羊获16枚胚胎,移植给8只奶山羊(双胚),全部妊娠,产下13只纯种波尔山羊,胚胎成羔率达81.3%.结果表明,波尔山羊胚胎移植奶山羊能获得较高的妊娠率和胚胎成羔率,已可从研究阶段发展到产业化应用.     

山羊同步发情和超排后取卵时间的研究

间隔９～１４ｄ分２次进行ＰＧＦ＿（２α）处理，以调整母羊的性周期。处理后的同步率分别为４７．６４％和６５．８８％。用ＰＭＳＧ或ＦＳＨ对４１９只母羊进行超排，总有效率７５．８１％，有效羊平均每只获卵７．６４枚。超排母羊发情后２０～３０ｈ回收的卵母细胞，可用率８５．９３％。用于山羊细胞核移植中的受体卵母细胞，适宜的回收时间为超排母羊发情后（２７±１）ｈ。在进行山羊原代细胞核移植时，以８～１６细胞期、桑椹期至囊胚期的分裂球或内细胞团细胞作供核的胚胎，适宜的获取时间为超排母羊发情交配后９６～１４４ｈ。     

波尔山羊的超数排卵和胚胎移植

以波尔山羊为胚胎供体、当地淮山羊为受体,以孕酮阴道栓作同期发情处理。采用促卵泡激素和促黄体激光对供体母羊作超数排卵处理。供体母羊与波尔种公羊首次交配后的３．５ｄ和５．５ｄ分别于输卵管和子宫角回收胚胎。从３头供体母羊共获６５枚胚胎,经鉴定分级,其中５３枚为可移植胚胎,分别移植至相应同期发情的２７头受体母羊的输卵管或子宫内,每头受体移１～２枚胚胎。经过３个情期以上,其中２０头受体母羊未出现返情,受体妊     

兔胚胎玻璃化冷冻的研究

探讨用玻璃化冷冻法保存兔胚胎的效果．结果表明,兔早期囊胚在0．5M海藻糖（93．8％）溶液中的存活率显著高于0．5M蔗糖组（70．0％,P〈0．05）．对照组与不同浓度甘油处理间兔胚胎存活率均差异不显著（P〉0．05）．分别用不同浓度乙二醇玻璃化冷冻兔胚胎,解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率,对照组与10％,20%EG组之间均差异不显著（P〉0．05）,但对照组,10％,20％EG组均显著高于30％EG组（P〈0．05）．解冻回收后正常胚胎数体内胚胎组（79．4％）显著高于体外胚胎（54．1％,P〈0．05）,囊胚孵化率2组之间差异不显著（P〉0．05）．缓慢冷冻法与玻璃化冷冻法之间胚胎解冻回收后正常胚胎数和囊胚孵化率均差异不显著（P〉0．05）．     

提高牛冷冻胚胎成活率和移植受胎率的研究

本文从冻前胚胎质量（等级）、胚胎的发育阶段、脱除冷冻保护剂的方法等对冷冻胚胎成活率的影响进行了比较系统的研究；从冻后胚胎质量（等级）、受体牛子宫及卵巢黄体生理状况，移植者技术水平对冷冻胚胎移植受胎率的影响进行了比较详细的研究。冻胚解冻成活率和移植受胎率分别达到７６．２％（１２８／１６８）和４６．６％（５７／１２２），其中１９９５年的同项研究结果分别为８４．４％（３８／４５）和５５．６％（２０／３６），不仅达到实际应用水平，而且与国际先进水平相当。     

供体母羊及与配公羊个体对波尔山羊胚胎移植效率的影响

对135只波尔山羊供体母羊进行超排处理,回收卵总数2504枚,平均18.55±7.63枚,其中可用胚2182枚,平均16.16±7.46枚.将2127枚鲜胚移植给1182只受体,妊娠率为63.03%(745/1182),移植胚胎成羔率为52.1%(1108/2127).试验结果表明,供体各个体之间所获得的胚胎移植成羔率存在着显著差异(P＜0.05),胚胎成羔率大于80%的供体平均每只获胚胎移植羔羊14.8±4.27只,胚胎成羔率小于20%的供体平均每只获胚胎移植羔羊1.83±1.17只,其中个体获得羔羊最多的为21只(21/26).有9.63%的供体胚胎移植成羔率大于80%,有4.44%的供体胚胎移植成羔率小于20%.14只公羊配种的135只供体获得的胚胎可用率同样存在着显著差异(P＜0.05).     

冷冻奶牛胚胎移植黄牛研究

采用国产试剂、器械超数排卵22头黑白花奶牛,超排成功率72.7％(16/22)。采集胚胎143枚,其中可用胚占70％(100/143),超排母牛采集胚数和可用胚数头均6.5枚和4.5枚,按采得胚母牛计算采集胚数和可用胚数头均8.9枚和6.3枚。胚胎移植经冷冻—解冻后68.2％(30/44)可用,胚胎移植18头同期发情黄牛受体,3头妊娠。其中两头受体双胎6个月时流产,1头受体黄牛产下1头黑白花公犊。     

安徽白山羊超数排卵技术

为了探索安徽白山羊超数排卵方法,比较不同超数排卵（简称超排）方案和促卵泡素（ FSH）给药方案对安徽白山羊超数排卵效果的影响。结果表明：以8次递减法注射FSH超排安徽白山羊,在撤栓时注射PG,平均回收卵（12．36±6.67）枚／只;而在撤栓时、撤栓后12 h注射PMSG,分别平均回收卵（14．83±5．88）、（16．13±6．24）枚／只,可见撤栓后12 h注射PMSG的超排效果优于撤栓时注射PG（P＜0．05）;用200 IU FSH分别按8次递减注射、8次等量注射、6次递减注射法使安徽白山羊超排,平均回收卵数分别为（22．3±10．74）、（24．0±4．16）、（16．0±2．65）枚／只,且各组间差异不显著;用Day0方案、传统方案超排,平均排卵数分别为（16．50±0．96）、（13．33±3．32）枚／只,胚胎回收数分别为（13．83±2．54）、（12．00±2．89）枚／只,2组间差异不显著。     

波尔山羊胚胎徒手分割试验

在体视显微镜下，用含20％NCS的PBS液作为操作液，用显微玻璃针徒手分割波尔山羊早期囊胚。将13枚A级囊胚用于分割，其中11枚对称分割为两半胚，2枚为不对称分割。将13对半胚手术移植于13只同期发情的受体羊黄体侧子宫角．有5只受体妊娠，半胚移植受体妊娠率38．5％（5／13）。其中有2只妊娠受体发生流产，观察到3只流产胎儿，其余3只受体妊娠到期，获得3只正常半胚后代。     

奶山羊冻胚长期保存长途运输和移植试验

用ＲＰＥ简易冷冻器快速冷冻６－７日龄萨能奶山羊胚胎。将在液氮中冻存１２－８１９ｄ的胚胎用液氮罐经汽车或火车运至外地，并把解冻后的７３枚胚胎移植给３８只当地山羊。受体妊娠率为６０．５％，移植胚产羔率为３９．７％，胚胎冻存１２－２１，１９８－２６５，３２０－４８０和６８７－８１９ｄ时，移植产羔率分别为３８．５％，４５．８％，４１．７％和２５．０％。各冻存期间差异不显著（Ｐ＞０．０５）。     

中国荷斯坦牛冷冻胚胎分割移植试验研究

牛胚胎冷冻的成功，使胚胎移植技术不受时间、地域的限制，并且可以做到对受体进行选择，从而可提高移植妊娠率；牛胚胎分割的成功，是增加胚胎数目和生产同卵双犊或多犊、获得更多牛犊的一个有效方法。如果将胚胎冷冻和胚胎分割技术结合起来，那未就可以达到既增加胚胎数目，降低胚胎移植成本，又利于胚胎移植技术在生产中推广应用的双重目的，为此开展此项研究。将用１０％甘油为冷冻剂，８枚７日龄中国荷斯坦奶牛的冷冻胚胎，在３５℃水浴解冻，用１．０ｍｏｌ／Ｌ蔗糖液脱除抗冻剂，７枚可用胚胎用简单方法分割成１４枚半胚，将裸半胚成对移植于与胚胎日龄同步的７头受体牛。结果３头妊娠，移植妊娠率为４２．９％（３／７），共产５头牛犊，其中２头产同卵双犊，半胚产犊率为３５．７％（５／１４），按整胚计算产犊率为７１．４％（５／７），较同期未分割的冷冻胚胎的产犊率３７．８％（１７／４５）提高３３．６个百分点。