山羊同步发情和超排后取卵时间的研究

间隔９～１４ｄ分２次进行ＰＧＦ＿（２α）处理，以调整母羊的性周期。处理后的同步率分别为４７．６４％和６５．８８％。用ＰＭＳＧ或ＦＳＨ对４１９只母羊进行超排，总有效率７５．８１％，有效羊平均每只获卵７．６４枚。超排母羊发情后２０～３０ｈ回收的卵母细胞，可用率８５．９３％。用于山羊细胞核移植中的受体卵母细胞，适宜的回收时间为超排母羊发情后（２７±１）ｈ。在进行山羊原代细胞核移植时，以８～１６细胞期、桑椹期至囊胚期的分裂球或内细胞团细胞作供核的胚胎，适宜的获取时间为超排母羊发情交配后９６～１４４ｈ。     

超排山羊卵巢卵母细胞体外成熟的初步研究

对超排山羊卵巢卵母细胞进行体外成熟培养的初步研究:试验一,分别用6、7、9、16号针头抽吸2～6mm卵泡,获有用卵母细胞百分率:分别为61.67％(37/60)、65.92％(178/270)、56.73％,(59/104)、31.43％(22/70);试验二,以TCM 199+10mol/L MHEPES+青霉素(6μg/m1)+链霉索(5μg/ml)为基础培养液(BM),再分别加入不同成分,配成5种卵母细胞成熟液:(A)BM+10％EGS(发情羊血清),(B)BM+10％EGS+HCG(2.5μg/ml,),(C)BM+10％EGS+HCG+E,(1μg/ml),(D)BM+10％FCS+HCG十E_2; (E)BM+10％EGS+HCG+E_2+颗粒细胞(1.5×10~6～3.0×10~6个/ml)。在38.5℃,5％CO_2培养26h,排卵后第1天卵巢母细胞体外成熟率分别为67.67％(20/30),60.42％(29/48),83.67％(41/49),67.79％(40/59),80.82％(59/73),排卵后第5天卵巢卵母细胞,在培液D中体外成熟率为71.43％(45/63)。研究表明,超排山羊卵巢卵母细胞经体外成熟可获得大量廉价的成熟母细胞。     

猪的胚胎嵌合试验中若干技术环节的研究(初报)

用二花脸猪和大白猪后备母猪做供、受体,对猪的胚胎嵌合试验中若干技术环节进行研究,结果表明,两猪种适宜获取囊胚的时间为配种后的5天20h左右,获得可用囊胚的比例较高.经微注射的囊胚移植后约40％获得妊娠,但其中只有1头母猪维持到妊娠结束,产出2头仔猪(公、母各1头).     

供体细胞核对山羊重构胚发育能力的影响

选择不同品种的山羊交配所获的８细胞期至桑椹胚期的胚胎或重构胚发育至相同胚期的卵裂球，以ＬＲＨ注射后２６～２８ｈ回收的白山羊去核成熟卵作受体组建重构胚或再重构胚，经琼脂糖包埋，移入山羊输卵管内，培养５～６ｄ后观察发育状态。实验结果表明，杂种胚供核组建的重构胚和再重构胚发育能力明显优于纯种胚供核组建的重构胚和再重构胚，因此从细胞水平证明了杂种优势；母型ｍＲＮＡ对重构胚和再重构胚的发育起一定的调控作用。     

牛MARK2、CREB5基因的克隆和生物信息学分析

试验旨在对牛MARK2、CREB5基因进行克隆和生物信息学分析.首先在GenBank数据库中利用人MARK2和CREB5基因序列比对获得牛的表达序列标签(ESTs)的序列,进行引物设计并利用RT-PCR方法从牛肩胛骨肌肉中克隆出MARK2和CREB5基因的cDNA序列,补足空缺部分,最终获得牛MARK2和CREB5基因.通过对牛MARK2和CREB5基因的生物学特性进行分析可知:牛MARK2基因的编码区长为2 076 bp,编码691个氨基酸,CREB5基因的编码区长1 527 bp,编码508个氨基酸;经蛋白质理化性质预测MARK2和CREB5蛋白均为亲水性蛋白;MARK2和CREB5蛋白的磷酸化位点均分布于苏氨酸(Thr)、丝氨酸(Ser)和酪氨酸(Tyr)残基上;MARK2蛋白与CREB5蛋白的二级结构预测以无规则卷曲为主;亚细胞定位预测MARK2蛋白主要分布在细胞质中,CREB5蛋白主要分布在细胞核中,两者均不属于分泌型蛋白;MARK2蛋白保守结构域预测含1个S_TKc和1个UBA功能结构域,CREB5蛋白保守结构域预测含有1个ZnF_C2H2、1个BRLZ功能结构域和5个低复杂度区域且二者均不具有跨膜结构.     

睾丸支持细胞对体外精子活力的影响

通过建立小鼠睾丸支持细胞与精子共培养的方法,达到体外提高精子活力的目的.利用睾丸组织切片技术,观察并分析支持细胞对生精细胞的作用.从6~7日龄小鼠睾丸中分离睾丸支持细胞,体外培养两天后,形成细胞单层作为滋养层.取小鼠附睾尾内精子,转移到以支持细胞为滋养层的培养液中培养,同时设立对照组.通过精子分析仪观察各组精子的活力,结果显示,以支持细胞为滋养层的精子前向运动百分比为56.1±5.81%,显著高于对照组40.7±2.96% (P<0.05).利用激光共聚焦显微镜观察精子结构,结果显示两组精子形态结构差异不显著,表明支持细胞能够提高体外精子的活力,但不改变精子的形态结构.     

子宫蓄脓对犬子宫内膜组织中IGF-2及IGF-1R蛋白表达的影响

探讨IGF-2及IGF-1R蛋白质在子宫蓄脓的表达及与子宫蓄脓发病的相关性。采用免疫组织化学PV法与Western blotting检测5例正常子宫内膜(对照组)、19例子宫蓄脓(试验组)子宫内膜组织中IGF-2及IGF-1R的表达情况。结果表明,免疫组化与Western blotting检测结果一致,IGF-2和IGF-1R在蓄脓子宫组中的表达量极显著高于正常子宫(P<0.01)。对子宫蓄脓组中IGF-1R与IGF-2进行相关性分析,免疫组化结果表明IGF-1R与IGF-2之间低度相关(ｒ=0.423),Western blotting结果显示IGF-1R与IGF-2之间高度相关(ｒ=0.927)。结果提示,IGF-2阳性表达上调及IGF-1R的异常高表达,在子宫蓄脓的发生和发展过程中可能具有重要作用。     

子宫蓄脓犬与健康犬子宫内膜基质细胞的分离比较

通过分离子宫蓄脓犬与健康犬子宫内膜基质细胞,观察其生长特性并对其进行细胞免疫荧光鉴定,分析比较该细胞在病犬中是否异常。结果显示,轻度子宫蓄脓犬和健康犬的子宫内膜基质细胞形态和特性基本一致,前者的细胞活性更强,增殖速度较快,可在接种后4 d融合成片,细胞多数呈梭形,少数呈多角状。经细胞免疫荧光鉴定,该细胞表达波形蛋白,阳性率98%以上。结果表明本试验所分离的细胞为犬子宫内膜基质细胞,该细胞在轻度子宫蓄脓犬和健康犬中无明显变化。     

山羊胚胎克隆的研究

应用细胞核移植技术，把未分化或处于不同发育阶段的胚胎分裂球或细胞移入成熟的去核卵母细胞，并使之融合，成为Ｇ＿０代克隆卵。将Ｇ＿０代克隆卵移入同期发情的山羊输卵管中培养５ｄ，回收得到克隆胚，选择其中正常发育至８～１６细胞的克隆胚，将其胚胎细胞再移入成熟的去核卵母细胞，并进行电融合，构成Ｇ＿１代再克隆卵。１２９枚Ｇ＿０代克隆卵和１４３枚Ｇ＿１代再克隆卵移入同期发情的山羊输卵管，获得Ｇ＿０代克隆羊２只和Ｇ＿１代再克隆羊４只。介绍了产生克隆动物的各个技术环节以及这些环节与克隆动物出生率的关系。     

家兔交巢穴埋线对血细胞数量和白细胞吞噬能力的影响

为了研究家兔交巢穴埋线后对机体免疫力的影响,试验选取8只家兔,采用自身对照,在交巢穴埋线前5天和埋线当天以及埋线后5天、10天、15天共5次检测血细胞数量及白细胞吞噬细菌的能力。结果表明:交巢穴埋线后机体白细胞数量显著增加,白细胞的吞噬能力显著提高,说明交巢穴埋线可以提高家兔的白细胞数量和吞噬能力。