高效凝胶渗透色谱法测定凝血酶冻干粉的分子量及其分布

建立凝血酶冻干粉分子量分布测定方法。色谱柱为蛋白专用柱TSK GEL G2000 SW(7.5mm×300mm,10μm),以p H6.86磷酸盐缓冲液为流动相,流速0.5m L/min,紫外检测器,波长280nm。凝血酶冻干粉重均分子量为80ku~95ku。所建立的凝血酶冻干粉分子量测定方法具有快速、简便和重复性好的特点,为提高和完善制剂的质量标准提供了依据,同时可作为特征图谱从蛋白分子量角度来控制该产品的内在质量。     

鲜人参及其加工品中腺苷和L-焦谷氨酸含量比较研究

以六年生鲜人参、生晒参、红参为试验材料,建立腺苷和L-焦谷氨酸的含量测定方法:RP-HPLC法分析样品中腺苷含量,依利特Hypersil ODS2(4.6 mm× 250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇—水(10∶90),流速0.8mL/min,检测波长260 nm,柱温40℃;RP-HPLC法分析样品中L-焦谷氨酸含量,COSMOSIL 5C18-PAQ(4.6 mm× 250 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇—5 mmol/L醋酸钠水溶液(8∶92),流速0.5 mL/min,检测波长210 nm,柱温40℃.测得鲜人参及其加工品中腺苷含量为0.332 ～ 0.457 mg/g,L-焦谷氨酸含量为0.315 ～1.056 mg/g.结果表明:腺苷和L焦谷氨酸含量在鲜人参及其加工品中呈规律性变化,鲜人参中腺苷和L-焦谷氨酸含量最高,加工品次之.因此在抗糖尿病活性方面,鲜人参较其加工品应更具研究价值.     

RP-HPLC法测定鲜人参、生晒参、红参中6种低分子量有机酸

采用反相高效液相色谱法分别对鲜人参、生晒参、红参中6种低分子量有机酸(乙酸、丙二酸、乳酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸)进行分析。色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温30℃,5%甲醇-0.01 mol/L KH2PO4(p H 2.5)为流动相,流速1 m L/min,进样量20μL,检测波长210 nm。各有机酸在0.001 6~1.000 0 mg/m L内线性关系良好,6种有机酸的平均加样回收率为97.54%~102.53%。该方法准确、高效地测定了人参中的低分子量有机酸含量。     

HPLC法测定人参强力胶囊中红景天苷的含量

建立测定人参强力胶囊中红景天苷含量的HPLC方法。色谱柱为Alltima C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相甲醇/水(15/85,V/V),流速1.0mL/min;检测波长275nm;红景天苷在10～500μg/mL(r=0.999 7)范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)98.9%(RSD=1.76%)。本方法操作简便、快速灵敏,可作为人参强力胶囊中红景天苷含量的测定方法。     

HPLC法测定新型兽用蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量

为建立新型兽用蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的高效液相色谱测定方法,采用Hypersil ODS C18色谱柱(5μm,4.6 mm×150 mm),流动相为乙腈-水-四氢呋喃(体积比为62∶37∶1),柱温30℃,流速1.0 m L/min,检测波长216 nm。测定结果显示,蒿甲醚在该色谱条件下系统适应性好,在质量浓度为100~800μg/m L时线性关系良好,回归方程为y=302.36x-682.02,R2=0.999 8;总平均回收率为97.58%,RSD为1.58%;对3批样品的蒿甲醚含量进行测定,RSD为1.42%。表明建立的方法可用于新型蒿甲醚注射液中蒿甲醚含量的测定。     

高效液相色谱法测定复方清开灵注射液中栀子苷的含量

采用色谱柱Kromasil-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm)、流动相为乙腈-水(体积比13∶87)、检测波长为239nm、流速为1.0 mL.min-1、柱温为室温的检测条件建立了复方清开灵注射液中有效成分栀子苷的含量测定方法.结果表明,栀子苷进样量在0.5~25.0μg范围内线性关系良好,相关系数(r)=0.999 9,加样平均回收率为100.3%,相对标准偏差(RSD)为0.73%(n=6).     

黄精多糖的柱前衍生化HPLC指纹图谱研究

为了建立黄精多糖组成糖的指纹图谱,采用柱前衍生化HPLC法测定黄精多糖的组成,并建立其组成糖的指纹图谱。色谱柱为Agilent ZORBAX XDB C_(18)色谱柱(5μm,250 mm×4.6 mm),以0.025 mol/L磷酸盐缓冲液(KH_2PO_4-Na OH,p H 6.8)-乙腈为流动相进行梯度洗脱,流速为0.8 m L/min,柱温为40℃,检测波长为250 nm。结果显示,黄精多糖有4个共有峰,分别为甘露糖、葡萄糖、半乳糖和木糖,对10批样品进行相似度分析,其相似度大于0.98。采用HPLC法建立多糖的指纹图谱操作简便、选择性高、分析速度快,可有效检测黄精多糖。     

HPLC-MS/MS法检测三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1的含量

利用HPLC-MS/MS法,建立测定三七茎叶总皂苷中人参皂苷Rb1含量的分析方法.方法:色谱柱为BDS HYPERSUL C18(150 mm×2.1 mm,5 μm)柱;流动相:乙腈-水(梯度洗脱);柱温:30 ℃;质谱条件:采用负离子多反应监测方法(MRM)测试;用于定量分析的对照品离子对为:人参皂苷Rb1 m/z 1107.9→783.7,内标物紫杉醇m/z 852.5→525.3.结果:人参皂苷Rb1标准曲线的线性范围为0.159～16.0 μg/mL,精密度和准确度等均符合样品分析的要求.结论:该法准确、灵敏、特异性强,适用于三七茎叶总皂苷及其制剂中人参皂苷Rb1浓度的检测.     

新型复方氟苯尼考注射液中氟尼辛葡甲胺含量测定方法研究

为了建立新型复方氟苯尼考注射液中氟尼辛葡甲胺含量的高效液相色谱测定方法,选用Hypersil ODS2(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.1%磷酸水(体积比为80∶20),检测波长为254nm,柱温30℃,流速1mL/min进行测定。结果显示,氟尼辛葡甲胺在该色谱条件下,系统适应性良好;在27~889μg/mL的质量浓度范围内线性关系良好,回归方程为Y=9 596.7X+32 979,R2=0.999 9;总平均回收率为(97.16±2.05)%,RSD为2.11%;对5批样品中的氟尼辛葡甲胺进行含量测定,RSD为1.14%。表明该方法可用于新型复方氟苯尼考注射液中氟尼辛葡甲胺含量的测定。     

人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶活性测定体系的建立

[目的]建立人参细胞中尿苷二磷酸葡萄糖（UDPG）：人参皂苷Rh2葡萄糖基转移酶（UGRh2GT）活性测定体系。[方法]以人参皂苷Rh2为底物,以UDPG为葡萄糖供体,选取合适的温度和pH值,用提取的人参细胞酶液催化Rh2生成Rg3,采用高效液相色谱法（HPLC）测定Rg3的生成量,色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm）,流动相为乙腈和水,梯度洗脱。[结果]人参细胞中UGRh2GT活性测定体系的最优pH值是9.3,最优温度是34.1℃。[结论]建立的酶活测定体系能够较好较方便地测定UGRh2GT的比活。     

大球盖菇多糖的分子质量分布及其单糖的组成

 【目的】从大球盖菇(Stropharia rugoso-annulata)中提取多糖,并对其分子质量及组成糖进行研究。【方法】采用水提法提取大球盖菇多糖,利用高效液相色谱法研究大球盖菇多糖分子质量分布及提取过程中多糖分子质量的变化,并采用红外光谱、核磁共振法对其组成糖进行研究。【结果】大球盖菇多糖水溶性多糖类物质的分子质量分布于22 kD附近;大球盖菇多糖同时存在α和β糖苷键,以吡喃糖为主,由5种单糖构成,其中有D-果糖、D-葡萄糖和D-木糖。【结论】以稀盐溶液为流动相的检测手段更能真实地反映大球盖菇多糖的分子质量分布情况,大球盖菇多糖是由5种单糖组成的杂多糖。     

富含多糖的强旱生植物半日花基因组DNA提取方法

半日花(Helianthemum soongoricum)属强旱生植物,其组织富含多糖和多酚等次生代谢物质,采用常规CTAB和SDS等方法提取的半日花基因组DNA由于含有多糖等杂质,无法进行PCR扩增和限制性酶切等试验,为此,在CTAB法的基础上进行了改进。第1步通过向植物组织CTAB提取液中添加高盐和乙醇来沉淀部分多糖,第2步将获得的DNA粗提液,经过CTAB分离溶液沉淀、NaCl溶解、乙醇沉淀等方法,可有效去除半日花组织中的残余多糖等杂质,提取DNA的质量和纯度经凝胶电泳条带清晰、无降解、无多糖等杂质。PCR扩增和限制性内切酶的结果表明,通过改进的方法所获得的DNA,可以进行PCR扩增试验,扩增条带清晰,基因组DNA能被限制性内切酶完全酶切,该方法为后续半日花分子生物学研究奠定了重要基础。     

川产道地药材三叶黄连HPLC指纹图谱研究

[目的]建立川产道地药材三叶黄连的指纹图谱检测标准。[方法]以盐酸小檗碱为参照物,采用依利特SinoChrom ODS-BP(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-浓度0.1%乙酸和10 mmol乙酸铵溶液为流动相梯度洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为345nm。[结果]药材有14个共有峰,共有峰的参数符合"中药注射剂指纹图谱技术要求"的有关规定。[结论]该方法准确、重复性好,建立的指纹图谱检测标准,可作为川产道地药材三叶黄连质量评价与品种鉴别的重要依据之一。     

3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫机能的影响

[目的]研究酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼非特异性免疫功能的影响,为其在水产养殖中的推广和应用提供参考。[方法]制备含有不同剂量酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散药饵连续投喂42天,并在试验的0、7、14、28天检测黄颡鱼血清的非特异性免疫指标,分析其对黄颡鱼免疫功能的影响。[结果]酵母细胞壁、黄芪多糖、芪参散这3种免疫增强剂对黄颡鱼血清补体C3、SOD、溶菌酶、血清白蛋白均有不同程度提高。免疫攻毒试验表明3种免疫增强剂均有一定的免疫保护作用,其大小次序为:酵母细胞壁组黄芪多糖组芪参散组,其中2和4 g/kg的黄芪多糖和酵母细胞壁组保护率最高,为50%。[结论]饲料中添加酵母细胞壁、黄芪多糖和芪参散均对黄颡鱼的非特异性免疫功能具有一定的促进作用。     

人参种子饱满度测定方法及不同规格人参种子的饱满度

本文报道一种人参种子饱满度的测定方法及其应用。在现行人参种子国家标准的基础上,采用图像分析软件对人参种子剖面分别进行种仁和种壳空腔面积进行测定,计算单粒人参种子的充实度,从而对人参种子的饱满度进行估算。采用此方法对人参种子截面积、种子空腔和种仁大小进行了测定,计算了不同等级的人参种子的饱满度。结果表明,不同人参种子充实度在0．5-1．0范围内,呈gauss分布,相关系数（R^2）达到0．99,总体平均值为0．825。其中,充实度不大于0．70的种子约占4％,充实度不大于0．75的种子约占12％,充实度不大于0．8的种子约占30％。宽度≤3．5mm、3．5～4．0mm、4．0～4．5mm、4．5～5．0mm、≥5．0mm等不同等级的人参种子的平均饱满度分别为92．0、84．0、97．0、86．0和79．4。种壳空腔与种子大小呈正相关,人参种子越大种壳空腔越大。当人参种子达到一定宽度后,种仁不再增大;因此,等级高的种子饱满度较低。     

温氏WS501猪配套系培育与应用

本研究的目的是培育具有高效、高产以及大体重上市特点的配套系肉猪,以满足华南、华东、华中等地区的生猪市场需求。以数量遗传学和分子遗传学理论为指导,按照专门化品系和配套系的育种理念,采用来自国内外的瘦肉型猪种质资源,结合常规育种和分子育种方法,培育出由5个专门化品系组成、以高繁殖力和适合大体重上市为主要特点的温氏WS501猪配套系。三系配套母本W352繁殖性能好,母猪头胎和经产总产仔数分别为12.86和13.10头,产活仔数分别为11.71和12.00头,初生窝重分别为14.59和15.96 kg。五系配套生产的WS501肉猪校正100 kg背膘厚11.0 mm,达100 kg体重日龄147 d,30~100 kg日增重1 004 g,饲料转化率2.12,100 kg体重胴体瘦肉率65.8%,变异系数小于10%。WS501配套系肉猪肌肉发达、生长快、饲料转化率高、瘦肉率高、肉质优良,适合大体重上市,综合经济效益好。该配套系种猪可以在我国规模化养猪生产中广泛应用。     

刺五加叶多糖的分离纯化及免疫活性研究

研究刺五加叶水溶性多糖结构信息和免疫活性。采用热水提取、乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白后得到刺五加粗多糖,粗多糖经EDAE-SepharoseFastFlow离子交换柱和SephadexG-75凝胶过滤柱2次纯化,得到均-多糖组分ASP-2—1;ASP-2—1经三氟乙酸水解、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）衍生化、毛细管区带电泳法（CZE）测定其单糖组成;高效凝胶渗透色谱法测定其纯度和分子量;体外脾淋巴细胞增值试验测定其免疫活性。从刺五加叶中分离纯化得到的均-多糖组分SPA-2—1主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、果糖、鼠李糖、木糖等6种单糖组成,摩尔比为27．33：8．92：3．03：1：7．59：20．51,其分子量为13．6KD;小鼠脾淋巴细胞增殖试验表明,SPA-2—1可显著促进脾淋巴细胞的增殖,刺五加叶多糖SPA-2—1具有较强的体外免疫活性。     

维药阿育魏实总多糖的提取工艺研究

[目的]通过正交试验探讨提取维药阿育魏实总多糖的最佳提取工艺,为资源的合理开发利用提供科学依据.[方法]以水为溶剂回流提取,采用苯酚-浓硫酸法显色,采用紫外分光光度法（UV）测定阿育魏实中总多糖的含量,并进行方法学验证.[结果]维药阿育魏实总多糖的最佳提取工艺为提取温度90℃、提取时间3h、料液比1∶50、提取次数1次;标准品溶液和供试品溶液均在488 nm处有最大吸收,总多糖溶液浓度在0.002 5 ～0.012 5 mg/ml线性关系良好（r=0.999 3）;精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验的RSD值分别为0.6％、0.5％、0.069％和0.9％,同时得到阿育魏实多糖平均提取率可达3.41 mg/g.[结论]该方法具有操作简单、重复性好、灵敏度高,适用于阿育魏实中总多糖含量测定.     

桔梗多糖复合涂膜剂在秋葵中的保鲜效果研究

为延长秋葵货架期，以商洛桔梗为对象，研究桔梗多糖的抑菌效果，复配防腐涂膜剂并用于秋葵贮藏保鲜。采用超声辅助浸提桔梗多糖的得率为27.28%，并利用AB-8型大孔树脂对其初步纯化。桔梗多糖对供试菌种的抑菌效果顺序为大肠杆菌>金黄色葡萄球菌>沙门氏菌。以桔梗多糖、海藻酸钠、氯化钙、柠檬酸为复配物，以失重率、叶绿素含量为检测指标进行秋葵保藏实验;基于单因素实验结果，用响应面法分析各因素的交互作用，确定最优配方为2.98%桔梗多糖溶液+1.07%海藻酸钠+1.42%氯化钙+3.00%柠檬酸。制备复合涂膜剂，在25℃、RH65%下，将其应用于秋葵保藏10天后，其叶绿素含量为18.62 mg/100 g，失重率为7.65%，该复合涂膜剂对秋葵的保鲜效果良好。研究结果可作为桔梗多糖在果蔬贮藏保鲜应用中的技术参考。     

红色新月蕨与乌毛蕨多糖的抗菌活性

[目的]从红色新月蕨和乌毛蕨中提取多糖物质,并检测多糖含量及其对5种菌类的抑菌活性。[方法]采用水提醇沉法对红色新月蕨和乌毛蕨多糖进行提取,并采用苯酚-硫酸比色法和圆形纸片法测定多糖含量以及测量不同浓度不同菌种的抑菌圈直径。[结果]红色新月蕨的多糖比乌毛蕨的多糖在含量上多0.3%,红色新月蕨和乌毛蕨的多糖对藤黄八叠球菌的抑菌圈直径分别可达33.0和21.3 mm,红色新月蕨多糖对酵母菌的抑菌圈直径为15.0 mm,乌毛蕨多糖对青霉菌的抑菌圈直径为22.0 mm,红色新月蕨和乌毛蕨多糖的最小抑菌浓度均集中在5~15 mg/m L。[结论]红色新月蕨和乌毛蕨多糖可作为功能性多糖加以开发。