构树叶提取物体外抗病毒活性研究

[目的]研究构树叶提取物的抗病毒活性。[方法]采用MTT法,观察构树叶的水、75%乙醇和50%丙酮提取物及不同给药方式对NDV、IBDV、ILTV和IBV等病毒感染的鸡胚成纤维细胞(CEF)活性的影响,探讨构树叶提取物体外抗病毒活性及其作用机制。[结果]乙醇和丙酮提取物能显著提高NDV感染的CEF细胞活性,丙酮提取物能显著提高ILTV和IBV感染的CEF细胞活性,但对IBDV诱导的CEF细胞病变无影响。经丙酮提取物预处理的CEF细胞对NDV或ILTV感染的抵抗力呈上升趋势。[结论]构树提取物中的有效成分可能通过阻断病毒对宿主细胞的识别和粘附发挥其抗病毒活性。     

可阻断IBDV感染的抗CEF膜蛋白单克隆抗体的筛选

 【目的】利用细胞融合技术及细胞免疫组化方法,筛选可特异性阻断鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）感染的抗鸡胚成纤维细胞（CEF）膜蛋白单克隆抗体,为进一步研究IBDV的CEF受体奠定基础。【方法】用CEF细胞免疫Balb/c小鼠,经细胞融合获得杂交瘤细胞上清。单层CEF用杂交瘤细胞上清孵育2 h后接种IBDV,病毒感染后固定细胞,先后与F22-EA6-Biotin及Streptavidin-HRP进行反应,最后用AEC染色,显微镜下计数,统计感染细胞减少的百分率以判定单抗上清阻断IBDV感染的效果。【结果】利用细胞组化的方法,共计检测了768株杂交瘤细胞上清,6株（1A5、1H11、2B12、3G1、4D10和4B8）显示有阻断IBDV感染的效果,其中4B8可完全阻断IBDV对CEF的感染,该单抗针对的CEF膜蛋白很有可能是IBDV的细胞受体。【结论】筛选到的抗CEF膜蛋白的单抗可以阻断IBDV感染CEF,表明所建立的方法具有较高的敏感性和特异性。这些单抗可以用于进一步研究IBDV的CEF细胞受体。     

中药复方抗鸡新城疫病毒作用研究

[目的]探讨中药复方抗鸡新城疫病毒（NDV）的作用机理,为临床合理使用抗病毒性药物提供科学的理论依据。[方法]以白花蛇舌草、金银花、黄芪和甘草组成中药复方,制备成中药复方流浸膏并配制成不同浓度梯度的药液;测定中药复方对鸡成纤维细胞（CEF）最大无毒浓度,并测定NDV在CEF上半数感染力（TCID50）;设中药复方不同浓度组,正常细胞和NDV感染细胞对照组,采用3种不同的作用方式作用于各组以检测中药复方抗NDV活性,采用四甲基偶氮唑蓝微量酶反应比色法（MTT法）测定OD值,以治疗指数为评价指标。[结果]中药复方对CEF的最大无毒浓度为2-6g/ml,NDV对CEF的TCID50为10-7.3;第①种作用方式中药复方的最小有效浓度是2-10g/ml,第②种作用方式为2-8g/ml,第③种作用方式为2-7g/ml。[结论]第①种作用方式对病毒的灭杀作用最强,第②种作用方式次之,第③种对病毒的灭杀作用最弱。表明中药复方不仅具有细胞外直接杀灭病毒作用,而且还具有抑制病毒吸附、穿入、复制和成熟的某一环节,为研究中药抗病毒的作用机理及临床应用提供了可靠的试验依据。     

复方酸制剂体外抗新城疫病毒试验

[目的]探讨复方酸制剂体外抗新城疫病毒（NDV）的活性,为研制新型抗NDV制剂提供理论依据。[方法]采用鸡胚成纤维细胞（CEF）培养法,观察细胞病变（CPE）,并用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活性,计算病毒抑制率,评价复方酸制剂的体外抗NDV作用。[结果]随着复方酸制剂浓度的增加,CPE逐渐减弱,病毒抑制率明显升高,当浓度为1.0mg/ml时,病毒抑制率可达70.04%。[结论]复方酸制剂在体外具有明显的抑制NDV增殖作用。     

肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响

[目的]探索肠炎沙门氏菌对感染鸡部分血液生化指标的影响。[方法]以肠炎沙门氏菌感染12日龄的健康三黄肉鸡为材料,在感染后不同时间采集其颈静脉血,分离血清用于生化指标检测。[结果]感染鸡血清AST、ALT、LDH和GLU活性呈先升高后降低的变化趋势。血清ALP活性、ALB和GLO含量总体呈先降低后升高的变化趋势。除TP无显著变化外,感染鸡血清其他7项生化指标都发生显著变化（P〉0．05）。其中ALT、AKP、LDH和GLO活性在感染后显著升高（P〈0．01）,ALB活性显著降低（P〈0．05）。[结论]该研究为揭示肠炎沙门氏茼感染病的发生、发展规律及制定综合防治措施提供了依据。     

中性红染色法检测人参皂苷及其衍生物对CEF增殖的影响

[目的]为体外研制人参皂苷及其衍生物的抗MDV作用机制提供理论依据。[方法]采用中性红染料吸收法,检测了人参皂苷及其衍生物对鸡胚成纤维细胞（CEF）体外培养中增殖活性的影响。[结果]各药物的促增殖作用不完全相同,低毒性的药物促增殖作用更明显。从药物对CEF细胞的不同作用时间点来看,以72h的OD值和正常对照的差异最大,在24h和正常对照组差异不显著。[结论]人参皂苷及其衍生物在中、低浓度能够促进CEF细胞的增殖,且药物作用具有时间依赖性。     

叶下珠抗新城疫病毒活性成分的筛选

[目的]筛选中草药叶下珠中的抗病毒活性成分,为开发治疗禽类病毒性疾病的新药提供条件。[方法]分别用75％乙醇（E）和纯净水（PF）煎煮叶下珠全草,再分别以石油醚（PE）、乙酸乙酯（EA）、正丁醇（BU）萃取其活性成分。将萃取物分别接种鸡胚成纤维细胞（CEF）,观察其对NDV病变的抑制作用;分别接种鸡胚,观察其对NDV血凝效价的影响;分别接种鸡,统计鸡群的死亡率,评价其免疫保护效果。[结果]E-PE、E-BU组萃取物均能明显抑制NDV在CEF细胞上的病变和显著抑制NDV在鸡胚内的增殖（P〈0.05）,以E-BU较好;E-PE、E-BU组的鸡只存活率均极显著高于利巴韦林对照组和生理盐水对照组（P〈0.01）,以E-PE组保护率较高。[结论]叶下珠水提取物效果较差;醇提取物E-PE组和E-BU组能有效抑制NDV病毒病变及其在鸡胚内增殖,对NDV的免疫保护效果较好。     

硫酸化黄芪多糖对CEF生长及抵抗IBDV感染的影响

采取一步醇沉和分步醇沉法提取4种黄芪多糖APS,、APS10、APS50和APS50,用氯磺酸-吡啶法进行硫酸化修饰,得到4种硫酸化黄芪多糖(sAPS) sAPSt、sAPS40、sAPS50和sAPS60,用MTT法比较了4种硫酸化黄芪多糖对鸩胚成纤维细胞(CEF) 的生长及抵抗鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) 感染的影响,以末修饰的APSt为对照.结果显示,APS1显著促进CEF生长,细胞毒性较低,但抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染细胞的作用较弱;sAPS抵抗鸡传染性法氏囊病毒感染的作用显著增强,显效浓度降低,但安全浓度也降低.表明通过硫酸化修饰可以提高黄芪多糖的抗病毒活性,但高浓度sAPS的细胞毒性增强.     

免疫组织化学检测传染性法氏囊病毒感染鸡胚成纤维细胞的条件优化

本实验首先利用IBDV快速检测试纸条，对在CEF上培养的IBDV纯化浓缩的程序予以改进，然后就影响免疫组织化学实验的接毒量和感染时间等关键环节予以优化；采用biotin标记的抗IBDV的单克隆抗体F22EA6和HRP标记的streptavidin．对IBDV感染的CEF进行免疫染色．在适当的条件下不产生非特异性染色，可以对感染阳性细胞进行计数来测定病毒的相对含量，在一定程度上可以代替传统的TCID50的测定，也可以对IBDV感染的CEF进行检测。     

表达马立克氏病病毒gI基因重组鸡痘病毒的免疫原性

以鸡痘病毒为载体，构建含马立克氏病病毒（MDV）gI基因的重组鸡痘病毒（rFPV)，并在鸡胚成纤维细胞（CEF）中表达gI基因，用重组FPV（命名为rFPV-MDV648gI）感染CEF，结果显示：rFPV-MDV648gI能在CEF中稳定复制。进一步用rFPV-MDV648gI接种无特定病原（SPF）鸡皮下组织，结果表明：鸡对rFPV-MDV648gI具有抗体反应性。     

高山红景天RAPD反应体系的优化研究

[目的]筛选适合高山红景天的RAPD-PCR反应体系。[方法]以药用植物高山红景天雌株的叶片为材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,并对影响RAPD扩增反应的各因素进行优化。[结果]结果表明,适合高山红景天的RAPD反应体系为:25μl总体积中含DNA模板20 ng,Mg2+1.5 mmol/L,引物10 pmol,dNTP 100μmol/L,Taq DNA聚合酶1.0 U。[结论]CTAB法在高山红景天可获得质量较好的基因组DNA。     

野生蒲公英联合高山红景天对糖尿病模型小鼠的降血糖作用研究

[目的]探讨长白山野生蒲公英（Taraxacum mongolicum）联合高山红景天（Rhodiola sachalinensis）对糖尿病小鼠的降血糖影响。[方法]选取30只昆明种小鼠,其中24只造成糖尿病模型,分为5组,分别为正常对照组、四氧嘧啶模型组、高山红景天组、长白山野生蒲公英组和联合剂量组。采用自制的水煎液进行灌胃给药,1次/d,连续5 d,测定糖尿病模型小鼠的血糖值。[结果]给药5 d后,各试验组小鼠血糖浓度均明显降低,与四氧嘧啶模型组相比存在极显著差异（P〈0.01）。[结论]高山红景天、长白山野生蒲公英、高山红景天与蒲公英联合对糖尿病小鼠都有明显的降血糖作用。     

高山红景天不同器官氨基酸含量的分析

[目的]为更好地利用高山红景天提供科学依据。[方法]测定了高山红景天不同器官的氨基酸含量。[结果]高山红景天地上部分和地下部分的氨基酸含量和组成不同,地上部分的氨基酸含量高于地下部分,人体必需氨基酸的含量以叶片中最多,为55.75～87.21mg/g;其次是茎,为36.13～37.39mg/g;根中最少,仅13.17～14.30mg/g。半必需氨基酸以根中最多,叶次之,茎中最少。不同器官的氨基酸含量因发育时期而变化,茎、叶中的氨基酸含量从营养生长期到果熟期呈由高变低的趋势,根中的氨基酸含量变化不大。[结论]高山红景天不同器官中的氨基酸含量与组成不同。     

高山红景天不同性别植株形态的比较研究

[目的]进一步了解高山红景天不同性别间的形态特点。[方法]以栽培高山红景天和野生高山红景天为材料,进行高山红景天不同性别植株形态的比较研究。[结果]结果表明,高山红景天不同性别间形态有一定的差异,株高雌株略高于雄株,主茎叶片数雄株多于雌株．叶片形态雄株比雌株狭长且薄、两性植株叶片较宽,茎粗雄株比雌株细,茎数雄株明显多于雌株,地下部根茎粗、根茎长和根茎数等性状雄株均大于雌株。[结论]该研究为高山红景天的性别分化机理、组织培养和遗传育种研究提供基础理论依据。     

高山红景天不同性别植株花器形态的比较

[目的]进一步了解栽培高山红景天花器的形态结构。[方法]对高山红景天不同性别植株的花器结构进行较为详细的比较研究。[结果]结果表明,高山红景天是多型的性别类型,有雌株、雄株、雌雄同株。雌雄同株是雄花、两性花同株类型,即一个植株的不同茎上着生雄花和两性花两种花序,两性花的花序中也有不同比例的雄花和两性花;高山红景天雌蕊心皮数目4为基本型,雄蕊花药数目8为基本型,两性花的雌蕊心皮和雄蕊花药数目都比单性花少的变异类型多。[结论]该研究为今后进一步进行高山红景天性别分化机理、性别利用、生殖生物学等方面的研究提供了可靠的理论依据。     

碱提红景天中的多糖及抗氧化性研究

[目的]进一步开发利用大花红景天中的多糖。[方法]大花红景天经乙醇脱脂、水提、碱提后,用盐酸中和,乙醇沉淀得粗多糖,经柱色谱纯化得白色红景天多糖,对其进行抗氧化性试验和羟自由基、超氧阴离子自由基的清除试验。[结果]经验证,提取到的多糖不含单糖,为均一多糖。该多糖对猪油有一定的抗氧化作用,对其他油脂也应有一定的抗氧化性作用。羟自由基清除率为50%时,多糖、苯甲酸、甘露醇的浓度分别为208、1751、48μg/ml。超氧阴离子自由基清除率为50%时,多糖和抗坏血酸的浓度分别为1801、18μg/ml。[结论]碱提大花红景天获得的多糖具有较好的抗氧化能力,对超氧阴离子自由基和羟自由基均具有一定的消除作用。     

长枣多糖中抗肿瘤多糖的筛选研究

[目的]筛选出长枣多糖中的抗肿瘤多糖,为长枣新产品的开发提供依据。[方法]对长枣中提取的6种多糖运用Sepharose CL-6B及高效液相色谱法分析检测,同时运用MTT法,对6种长枣多糖对人肝癌细胞株Bel7402、人胃癌细胞株BGC823、人鼻咽癌细胞株KB的增殖抑制率进行了测定,并进行了比较分析。[结果]检测结果表明,制得的6种长枣多糖均为单一组分多糖。当浓度为400 mg/L时,LJU-3对3种肿瘤细胞的抑制率分别为61.29%、68.77%、72.16%,均高于其他多糖,且高于50%,说明它对3种肿瘤的抑制作用为中度敏感或高敏感。运用IC50软件计算得它对Bel7402、BGC823、KB抑制的IC50值分别为198、178、167 mg/L,因此认为长枣多糖中抗肿瘤多糖为LJU-3。[结论]该研究为进一步深入研究枣多糖抗肿瘤作用机制奠定了良好的基础。