斗鸡新城疫病毒DQ株融合蛋白基因序列分析

从越南斗鸡暴发的病例中分离出1株新城疫病毒（NDV），命名为贵州分离株（DQ）。采用RT—PCR方法扩增分离株（DQ）的整个F基因片段，并将其克隆到pMD-18T载体中。序列分析结果表明，DQ株F基因分子长为1662bp，编码553个氨基酸。该毒株与国内2株分离株（CH2000、TW2000）之间的亲缘关系较近，其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95．7％-96．6％和96．6％-96．8％；但与LaSota、B1及1748E9等常见毒株的核苷酸和氨基酸同源性仅为84．0％-86．5％和87．2％-89．9％。DQ分离株在F蛋白裂解住点的氨基酸顺序为^112R—R—Q—K—R—F^117，与NDV强毒株特征相符，且具有101处的K（赖氨酸）和121处V（缬氨酸）2个特征性氨基酸，与NDV基因Ⅶ型的特性完全相符。利用MegAlign软件绘制NDV的系统发育进化树表明该分离株为基因Ⅶd亚型。     

新城疫病毒山东分离株F和HN基因克隆与进化分析

选取山东2007 ～ 2008年的5株NDV流行株,克隆融合蛋白(F)和血凝素-神经氨酸酶(HN)基因全长并测序.结果表明,5个分离株F基因长度为1662 bp,编码553个氨基酸.F蛋白裂解位点的氨基酸序列均为112 R-R-Q-K-R-F117,符合强毒株F基因裂解位点的氨基酸序列特征.对F基因47 ～420 nt序列进行比对,发现4株鸡源毒株基因型为Ⅶd,另一鸽源毒株基因型为Ⅵ.5个分离株间F基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为88.8％～99.7％和94％～99.3％,与LaSota、Clone30、F48E9的氨基酸同源性分别为88.4％～89.5％、87.7％～88.8％、90.8％～92.4％.HN基因长度为1801bp,编码571个氨基酸,5个毒株均含13个半胱氨酸残基且位置保守.与LaSota的氨基酸同源性为87.2％～88.8％,与8个山东NDV流行株的同源性为89.8％～98.6 ％.     

新城疫病毒长春株5种结构蛋白基因序列分析

根据已发表的新城疫病毒 (NDV)的核苷酸序列设计了 5对引物 ,采用RT PCR技术 ,分别扩增新城疫病毒长春株基因组中的F、HN、M、P及NP基因 ,并克隆和测定序列。与新城疫弱毒LaSota株和V4株进行同源性比较 ,并对NDV长春株、LaSota株及F48E9株F蛋白分子结构的疏水性及抗原表位分析 ,表明NDV长春株具有新城疫病毒弱毒株的特性。     

鹅副粘病毒GX1株的HN和F蛋白基因的克隆和序列分析

[目的]克隆鹅副粘病毒GX1株HN基因与F基因,并进行序列分析。[方法]根据Genbank已发表的鹅副粘病毒GPV-SF02株基因组核苷酸序列设计2对引物,对从广西发病鹅分离到的鹅副粘病毒毒GX1株的HN和F基因进行PCR扩增,将扩增产物与pMD18-T载体连接并测序。[结果]该株副粘病毒株的HN基因和F基因核苷酸序列全长分别为1 716和1 662 bp,与GPV-SF02株的同源性均在97.3%左右,与LaSota株、F48E9株、JS株的同源性为80.3%~97.5%,与M iyadera株的同源性仅84.8%。[结论]分离株GX1株与禽Ⅰ型副粘病毒(A PMV-1)强毒株特征相符,属于A PMV-1基因Ⅶ型。     

肉鸽新城疫病毒山东分离株的分离鉴定及其F基因的分子特性分析

从山东某发病肉鸽的体内分离到一株新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV),命名为Pigeon-Shandong-JN-08(简写JN08),对其融合蛋白(fusion,F)进行序列和分子特性的分析,以了解肉鸽NDV的遗传起源和分子特性。JN08经病毒蚀斑克隆纯化后动物回归试验可产生典型的NDV病变。研究结果发现,F蛋白多肽裂解位点的序列为112RRQKRF117,符合鸽源NDV强毒氨基酸基序。F基因分型及同源性比较显示:JN08与绝大多数鸽源毒株同属于基因Ⅵ型;其F基因与基因Ⅱ型毒株LaSota,B1,Bingham,TEX-48氨基酸同源性为89.9%,89.7%,90.4%,89.7%,与基因Ⅰ型毒株Ulster67的氨基酸同源性为91.3%,与基因Ⅲ型传统强毒F48E9的氨基酸同源性为92.8%;与国内鸽分离株P1-03,CH98-98,JS1-06,PB01-96和GZ-07的氨基酸同源性分别为91.3%,94.6%,94.8%,95.1%,94.0%;与国外鸽分离株Capital3-97,Tigre6-99,1166-02,IT227-97,2736-00,NY-84,TX3503-04,248VB-98的同源性分别为96.2%,93.8%,98.0%,96.8%,97.1%,96.8%,96.8%,98.4%。从F基因遗传进化树上发现:JN08与国外分离株的遗传距离较近,处于同一基因亚型上,而与国内分离株的遗传距离较远。     

鸡新城疫病毒F48E9强毒株NP基因的序列分析

根据GenBank登录的鸡新城疫病毒NP基因序列设计引物,利用RT—PCR对F48E9强毒株NP基因进行扩增,将扩增产物经纯化后连入pMD18-T载体,通过PCR和酶切鉴定出阳性重组质粒,经测序后获得F48E9 NP基因序列。经分析发现该基因的ORF总长为1470bp,编码489aa,NP蛋白有4个高度保守的Cys位点,分别位于第55、78、139、213位,且在401～440位和461～481位区域变异较大。将F48E9株与19株参考毒株的相应序列进行比较得到核苷酸序列同源性为87．9％～92．3％,氨基酸序列同源性较高,为92．2％～98．0％,遗传进化分析表明F48E9株相对独立,与参考毒株的遗传距离较远。     

新城疫La Sota疫苗对不同基因型流行株的免疫保护

选取国内2001—2003年发生的5株NDV毒株,经CEF蚀斑纯化和SPF鸡胚增殖,克隆其融合蛋白（F）和血凝素—神经氨酸酶（HN）基因。利用F基因为Ⅱ型的疫苗La Sota活疫苗在隔离器中免疫SPF鸡,每7 d 采血监测NDV抗体,免疫后2周,利用经过鉴定的新城疫病毒（NDV）基因Ⅶ流行株潍坊毒SGM01,昌乐毒SCL03,东营毒SKY和莘县毒SSX03;基因为Ⅱ型日照毒SRZ03和基因为Ⅲ型经典强毒F48E9分别进行攻毒试验,同时设SPF 鸡对照。每天观察,及时剖检发病鸡,检查鸡群病变,观查疫苗的保护性,便于对常规生产中的免疫失败原因进行分析。     

鹅副粘病毒QY分离株的蚀斑纯化及F基因的克隆与序列分析

将鹅副粘病毒QY分离株蚀斑纯化后,根据已发表的鹅副粘病毒SF02株全基因序列,分别设计合成3对引物,设计合成F基因引物,经RT-PCR方法扩增,克隆入PMD18-T载体,鉴定、测序。测序后拼接得出F基因的全序列长度为1662kb,编码553个氨基酸残基,与GenBank下载的几株参考毒株比较F基因编码区的核苷酸序列,发现所测QY株F基因核苷酸序列同源性与参考毒株SF02为98．3％,与LaSota分别为82．4％,同源性分析表明分离株QY与国内的强毒株参考毒株的同源性较高。     

一株鸡新城疫病毒的分离与鉴定

从广东某发病鸡场分离鉴定出1株鸡新城疫病毒,采用RT-PCR法扩增出包括裂解位点在内的部分F基因,对其进行序列测定后与GenBank中的毒株进行比较。结果表明：所克隆片断长度为463bp;F基因的裂解位点序列为112R-R-Q-K-R-F117,并且第101位为K（赖氨酸）,121位为V（缬氨酸）,具有基因Ⅶ型副粘病毒强毒株的特征序列;分离株与Lasota株同源性为81.2%,与我国标准强毒F48E9的同源性只有82.4%,表明该基因已经发生了变化。     

广西山雉新城疫病毒分离株生物学特性测定

对1株从广西某山雉养殖场发病山雉中分离得到的新城疫病毒进行生物学特性测定.结果显示,分离株的鸡胚平均死亡时间(MDT)为50.4h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数(ICPI)为1.58,F蛋白核苷酸序列与新城疫标准强毒株F48E9株的核苷酸同源性为84.5%,与Lasota的核苷酸同源性为81.8%,推导氨基酸在裂解位点的序列是112G-R-R-Q-K-R-F117.通过MDT、ICPI和推导氨基酸裂解位点分析,确定分离株是一株毒力较强的新城疫病毒强毒株.     

玉米丝黑穗病的抗源鉴定及抗性遗传研究

为了鉴定玉米自交系对丝黑穗病的抗性,研究抗病力遗传效应,采用人工接种鉴定法,研究评价了72份玉米自交系对丝黑穗病的抗性。其中高抗系18个,占25%,抗病系15个,占20.8%,中抗系12个,占16.7%。玉米对丝黑穗病的抗性遗传属细胞核遗传,无正反交差异。F1和F2的发病率介于双亲之间,无超亲优势,F1与抗病亲本回交的后代基本表现为抗病,与感病亲本回交后代表现为感病。要选育中抗以上类型杂交种,其双亲之一必须为抗病系,其杂交方式有:高抗×高抗、高抗×抗病、高抗×中抗、抗病×抗病、抗病×中抗。     

饲养水平和遗传特性对XX;mas-1/mas-+鲤鱼(Cyprinus carpio L.)性别决定的影响

饲养水平对E4×E5 (XX ;mas- +/mas- +×XX ;mas- 1/mas - 1)鲤鱼 (CyprinuscarpioL )F1代的性别决定有显著影响 ,高饲养水平和低饲养水平处理组中雌性比率分别为 5 1 5 %和 4 1%。遗传特性对E4 5×E5 (XX ;mas- 1/mas - +×XX ;mas- 1/mas- 1)F1代的影响比饲养水平的影响显著 ,在 2个处理组中只发现 1～ 2尾雌性。 2个饲养水平对E4×E4 5 (XX ;mas- +/mas- +×XX ;mas- 1/mas - +)F1代的影响差异显著 ,高饲养水平 2个处理组中雌性比率分别为 86 2 %和 76 8% ,而低饲养水平 2个处理组中雌性比率分别为 76 8%和 5 7 9% ,高饲养水平处理组的雌性比率与低饲养水平处理 1组 (雌性比率 5 7 9% )相比差异显著。 2个饲养水平条件下E4×E5和E4×E4 5后代的XX ;mas - 1/mas - +鲤鱼性别转化率之间没有显著差异。     

铬对产蛋鸡生殖激素分泌的影响

为探讨铬元素对产蛋鸡生殖激素分泌的影响及其机制，在基础日粮（含Cr5.09mg/kg)中分别添加铬0，5和50mg/kg饲养4个月，观察其产蛋性能，检测血浆雌二醇（F2），孕酮（P），促黄体生成素（LH）水平，并于试验结束时进行卵泡细胞的离体培养，结果表明，添加5mg/kg铬有利于产蛋率的提高及产蛋高峰期（＞90％）的持久，不同铬日粮对血浆中上述激素水平无显著影响，但在组间产蛋率出现显著差异时，试验P，LH水平也相应地比对照组高，离体试验表明，铬可以通过直接对卵泡发生作用促进E2的合成与分泌（P＜0．01），对P分泌也有促进趋势。     

番茄大花萼突变体MC基因的AFLP分子标记及种质资源筛选

采用AFLP分子标记方法,在DNA水平上研究番茄大花萼基因.以番茄大花萼突变体品种08085和正常番茄品种08086为亲本材料,分析鉴定了08086×08085以及其有性杂交F1、F2代分离群体的田间表现.结果表明,番茄花萼突变体MC基因所控制的性状是单显性遗传性状.研究用488对引物筛选出3个与番茄MC基因紧密连锁的...     

日粮不同钙锌水平对雏鸡组织中矿物质含量及体重的影响

采用72只6周龄京白雏鸡,随机分 A、B、C、D、E、F 六组,每组12只,公母各半。A组喂玉米-豆饼型基础日粮(含锌21.5ppm,含钙0.95%),其余各组分别补加1%钙、2%钙、27.5ppm 锌、27.5ppmp 锌+1% 钙、27.5ppm 锌+2% 钙,试期30天。试验结束,用原子吸收光度计测定了全血、羽毛、胫骨、肝、肾等组织中的钙、锌、铁、铜、锰等元素含量。结果表明,B、C、E、F 各试组鸡组织中锌含量明显低于 D、人组,全血和肝 Cu/zn 比值明显升高,羽毛中铁、铜、锰和骨中铜明显升高,而肾中铜和锰明显降低.体增重 D 组效果显著,饲料报酬高,其余各试组随日粮中钙含量的增加体增重缓慢。     

雏鸡新城疫母源抗体水平与首免日龄关系的再探讨

对初生雏鸡的ND母源抗体进行了动态观察 ,并在HI抗体效价为 6log2 、4log2 时 ,分别应用ND强毒流行株和F48E9标准株进行了攻毒。结果显示 ,对于流行株的攻击 ,母源抗体HI效价为 6log2 和 4log2 时的雏鸡 ,均 1 0 0 %不能被保护而发病死亡 ;对F48E9毒株 ,虽然在HI效价为 6log2 时可完全保护 ,但在HI效价为 4log2 时无任何保护力。说明传统的能使鸡只获得保护的临界值 ( 4log2 )已受到了严重的挑战 ,尤其是对于ND强毒流行株 ,其HI临界值更是远远地高于传统的临界值 ( >6log2 )。雏鸡首免日龄的确定已不能再按传统的公式来推算 ,必须提前免疫 ,且要活苗、死苗同时应用 ,才有可能避免ND野毒的侵袭     

干酪乳杆菌对断奶仔猪十二指肠发育的组织学影响

为研究干酪乳杆菌对断奶仔猪十二指肠黏膜组织结构和功能及发育的影响,采用组织化学和免疫组织化学方法,以168头14日龄断奶仔猪为试验对象,随机分成7组,每组4个重复。研究结果显示:1)干酪乳杆菌预防组(E组)、预防治疗组(F组)的肠绒毛高度分别比大肠杆菌K88攻毒组(D组)明显增高了11.6%(P0.01)和11.2%(P0.01)。2)E组、F组的绒毛高度与肠隐窝深度的比值(V/C)分别比D组显著增加了21.3%(P0.01)和20.5%(P0.01)。3)E组、F组的肌层厚度分别比D组增加了11.8%(P0.05)和10.2%(P0.05)。4)D组、E组、F组和直接治疗组(G组)各组间增殖细胞核抗原(PCNA)含量在统计学上差异不显著,但使用干酪乳杆菌预防和治疗的E组和F组的增殖细胞核抗原(PCNA)含量均高于K88攻毒的D组。以上结果表明,饲用干酪乳杆菌进行预防能够显著提高断奶仔猪小肠绒毛高度,明显增加V/C值、肌层厚度及PCNA含量,提示干酪乳杆菌能有效维护断奶仔猪肠道健康,减轻大肠杆菌对肠黏膜结构的损害,促进肠道的发育。     

加拿大披碱草与老芒麦种间杂种F1的染色体遗传分析

对加拿大披碱草与老芒麦种间杂种F1的形态学和细胞学特征进行研究。形态学观察结果表明,杂种F1的穗形介于双亲之间,呈半弯曲形,其母本加拿大披碱草植株浅绿色,茎粗糙,穗粗大而弯曲,每节2～3小穗,颖和外稃粗糙具短毛。父本老芒麦全株粉绿色,穗状花序疏松下垂,每节2小穗,每小穗3～5小花。杂种F1植株灰绿色,粗糙,外稃和颖具柔毛,偏向母本加拿大披碱草。加拿大披碱草染色体都是由中部着丝粒染色体组成,染色体相对长度范嗣在10～4．65,最长染色体与最短染色体之比为2．2：1,臂比介于1．14～1．35。染色体核型公式为2n=4x=28m,属于1A类型。老芒麦染色体核型公式为2n=4x=22m＋6sin,属于1B型;F1的染色体数为2n=4x=28,染色体相对长度的变异范围在8．83～4．42,臂比疽变化在1．00～3．33。其中,第1、5、7、9、11、12、13、14对染色体为正中着丝粒（M）染色体,第3对为近端着丝粒染色体,剩下的染色体为中部着丝粒染色体,其中,正中着丝粒（M）染色体的数目增加,近中着丝粒染色体（sm）已不存在。L／S恰好为2：1,核型类型为2B。核型公式为2i=4x=16M＋lOre＋2st。通过形态学和染色体的核型分析可以初步确定,F1是真杂种;但杂种F1不结实。加拿大披碱草和老芒麦含有落后染色体细胞的频率较低,分别为0．96％和2．76％;F1减数分裂后期染色体的分配出现了异常行为,染色体有落后现象,落后的染色体细胞频率较高,达87．37％,F1在减数分裂中期一部分染色体也能配对形成二价体,但染色体配对杂乱无章,棒状二价体占多数,环状二价体较少,且出现多价体。     

加拿大披碱草与老芒麦种间杂种F_1的染色体遗传分析

对加拿大披碱草与老芒麦种间杂种F1的形态学和细胞学特征进行研究。结果表明,F1生长势明显超过双亲,穗型呈双亲中间型;杂种F1的体细胞染色体核型公式为2n=22m＋6sm;F1为真杂种;F1花粉母细胞后期I有落后染色体出现,落后染色体细胞频率达87．37％,减数分裂中期染色体配对紊乱,形成较多的棒状二价体。     

In Vitro Antifungal Activity of the Extract and Compound from Acorus tatarinowii Against Seven Plant Pathogenic Fungi

Acorus tatarinowii Schott is a traditional Chinese medicine plant and has multiple bioactivities in medicine and pesticide field. In this study, the antifungal compound 1,2-dimethoxy-4（2-propenyl） benzene was isolated from A. tatarinowii Schott by activity-directed isolation method, and the inhibitory activity of the extract and 1,2-dimethoxy-4（2-propenyl） benzene against seven plant pathogenic fungi was evaluated. The results showed that the extract and 1,2-dimethoxy-4（2- propenyl） benzene had high inhibitory activity against hyphal growth of Thielaviopsis paradoxa （de Seynes） V. Hohnel, Pestalotia mangiferae P. Henn., Fusarium oxysporum f. sp. niveum （E. F. Smith） Syn. et Hans., Alternaria alternate Tanaka, Colletotrichum musae （Berk et Curt） V. Arx, Sphaceloma fawcettii Jenk., and Mycosphaerella sentina （Fr.） Schroter. The EC50 values of extract were 1.6162, 1.6811, 1.1253, 3.5771, 1.7024, 2.2284, and 2.2221 g L^-1, respectively, and the EC50 values of 1,2-dimethoxy-4（2-propenyl） benzene were 0.1021, 0.0997, 0.0805, 0.1742, 0.1503, 0.1853, and 0.1924 g L^-1, respectively. 1,2-Dimethoxy-4（2-propenyl） benzene also inhibited spores germination of T. paradoxa （de Seynes） V. Hohnel and F. oxysporum f. sp. niveum （E. F. Smith） Syn. et Hans., with the inhibitory rates of 98.81 and 100% at a concentration of 0.4 g L^-1 after 8 h, respectively. 1,2-Dimethoxy-4（2-propenyl） benzene is a potential botanical antifungal agent for controling of plant fungal diseases.