蝴蝶兰·文心兰遗传转化体系的初步研究

[目的]优化蝴蝶兰和文心兰的遗传转化条件。[方法]以培养3周的蝴蝶兰原球茎和文心兰愈伤组织为试材,以大肠杆菌为生长培养基,研究3种农杆菌菌株的侵染力,以及菌液浓度、侵染时间、酚类诱导物(AS)和共培养时间对转化的影响。[结果]以蝴蝶兰原球茎为农杆菌介导的外植体进行遗传转化的优化条件为:预培养时间3d,菌液侵染浓度OD600=0.3,菌液侵染时间10min,pH值5.4,菌液侵染后,与农杆菌共培养5d并添加100μmol/LAS,此条件下的瞬间表达率最高。将蝴蝶兰遗传转化的条件运用于文心兰,得到的转化率较低。3种农杆菌菌株中,EHA105菌株侵染力最强,其次是AGL1,LBA4404最弱。[结论]该研究为进一步研究蝴蝶兰和文心兰的遗传转化体系提供理论依据。     

影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素

从预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间及添加AS（乙酰丁香酮）5个方面,以卡那霉素抗性芽频率作为衡量指标,研究了各因素对河北杨遗传转化率的影响。优化筛选的最适转化系统为预培养2 d,农杆菌活化菌液1/2MS稀释10倍,侵染5 min,共培养4 d。按此方法河北杨叶盘转化率可达35%。西北林学院学报21卷第5期贾小明等影响农杆菌介导的河北杨遗传转化的因素     

农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系的优化

[目的]探讨魔芋愈伤组织培养基、不同转化条件(菌液浓度、侵染时间、预培养时间及共培养时间)及转化植株的筛选条件(抗生素浓度和乙酰丁香酮(AS)浓度)等因素对转化效率的影响。[方法]采用卡那霉素抗性基因为选择标记,对农杆菌介导的花魔芋遗传转化体系进行优化。[结果]在预培养2 d,用OD600为0.6的菌液侵染30 min、共培养3 d,卡那霉素100 mg/L,羧苄青霉素250 mg/L,AS浓度100μmol/L的条件下能有效提高转化效率。再生花魔芋植株经GUS染色及PCR检测,结果表明外源目的基因已经整合到花魔芋基因组中。[结论]为魔芋抗病品种的转基因培育,丰富其种质资源,寻找抗病新途径提供理论依据和试验基础。     

影响农杆菌介导朝仓花椒遗传转化因素研究

为建立农杆菌介导的朝仓花椒遗传转化体系,以朝仓花椒叶柄及茎段为转化受体,研究了预培养时间、侵染菌液浓度、侵染时间、共培养时间等因素对转化效率的影响。获得转化体系如下：外植体预培养3d,在OD600为0.5～0.8菌液侵染10min,共培养3d,延迟7d筛选,以30和50mg/L卡那霉素（Kan）进行梯度筛选。结果表明：...     

叶用莴苣LsHsp70-3701基因过表达载体的构建及遗传转化体系的优化

为研究叶用莴苣中Hsp70基因的功能,以提高其耐热性,构建LsHsp70-3701过表达载体,农杆菌介导法转化叶用莴苣。从叶用莴苣中克隆得到LsHsp70-3701,利用NcoⅠ和SpeⅠ双酶切LsHsp70-3701和植物表达载体pCAMBIA1304,回收目的片段并连接,经鉴定后获得过表达载体。以‘P-S11'叶用莴苣为转化材料,针对遗传转化关键因素:苗龄、植物激素浓度、预培养时间、侵染液OD值、侵染时间和共培养时间进行优化。试验结果表明最佳转化条件为:苗龄5d的子叶,6-BA 0.2mg/L+NAA 0.1mg/L,KT质量浓度为0.2mg/L,OD600为0.3,预培养2d,侵染10min,共培养2d。     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

农杆菌介导的莴笋遗传转化体系初步研究

为了研究农杆菌介导的莴笋遗传转化的影响因素,建立莴笋高效遗传转化体系,通过设置不同预培养、共培养时间,探讨其对外植体芽分化率的影响;设置不同农杆菌菌液浸染浓度及浸染时间,探讨其对外植体致死率的影响。试验结果表明,对莴笋外植体预培养2d,外植体芽分化率最高;共培养0、1、2d,外植体芽分化率差别不大;当农杆菌菌液OD600值为0.3、0.5,分别侵染1、3、5min,外植体致死率相差不大。因此,在莴笋遗传转化中,采用外植体预培养2d、共培养2d,农杆菌菌液OD600值为0.5、侵染时间5min的遗传转化体系能提高莴笋的遗传转化率。     

AP70抗病基因转化番茄的研究

[目的]通过基因工程提高番茄抗病性。[方法]通过冻融法将含萝卜抗真菌蛋白基因的质粒AP70转入农杆菌LBA4404中,再用农杆菌介导法将AP70抗病基因对番茄进行遗传转化,研究预培养、侵染时间等因素对AP70转化番茄的影响。[结果]带柄子叶诱导番茄产生不定芽的效率比子叶块效率高。农杆菌浸染番茄子叶前预培养1 d,不仅能提高子叶存活率,而且可降低共培养时外植体的污染率。农杆菌对番茄子叶的侵染时间最好不超过5 min。外植体筛选培养基中Kam的浓度不宜太高或太低,可获得少量转AP70基因的抗性芽。[结论]农杆菌对番茄子叶侵染前要进行稀释,且侵染时间不宜超过5 min,共培养1 d时转化率较高。     

应用正交试验优选茎瘤芥子叶组培诱导培养基

[目的]建立茎瘤芥体细胞培养再生植株体系,为芸薹属植物茎瘤芥及芥菜的遗传转化体系及生物技术育种奠定基础。[方法]以茎瘤芥6 d苗龄子叶为材料,应用正交试验法研究不同浓度生长激素6-BA、NAA、2,4-D对外植体分化和愈伤组织成苗率的影响。[结果]最适合茎瘤芥外植体分化成苗的培养基为MS加6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.10 mg/L＋2,4-D 0 mg/L＋3 g/L琼脂粉;1/2MS＋0.10mg/LNAA利于组培苗生根。[结论]优选培养基的再生频率具有较大提高。     

保加利亚尖椒遗传转化体系的建立

以保加利亚尖椒子叶为外植体,通过农杆菌介导法将抗真菌三价载体（GCR）遗传转化至辣椒,建立了适合辣椒转化的高效再生体系,结果表明：在侵染液pH：值5．2、预培养2d、侵染时间7～8min、无AS、共培养2d的条件下,抗性不定芽的诱导分化率达到89％,转基因植株经PCR、Dot blotting检测证明外源基因已整合至辣椒基因组DNA中。     

Autotoxicity of Water Extracts and Decomposition Liquids of Tumorous Stem Mustard(Brassica juncea var.tumida Tsen et Lee) Residues on Seed Germination and Seedling Growth of Tumorous Stem Mustard

[Objective] This study aimed to explore whether there is autotoxicity in tumorous stem mustard through studying the allelopathic effects of water extracts and decomposition liquids of tumorous stem mustard residues on seed germination and seedling growth of tumorous stem mustard.[Method] With Fuza No.2 as the experimental material,the effects of different concentrations of leaf extract,root extract,7-d decomposition liquid,15-d decomposition liquid of tumorous stem mustard on seed germination and seedling growth of tumorous stem mustard were investigated.[Result] Compared with those in the control,the four kinds of 100% treatment solutions all significantly reduced the seed germination rate,seed germination vigor,root length,plant height and fresh weight of tumorous stem mustard(P<0.05),and significantly increased the malondialdehyde(MDA) content,catalase(CAT) activity,peroxidase(POD) activity and superoxide dismutase(SOD) activity of young seedlings of tumorous stem mustard;the allelopathic effects of the four kinds of water extracts and decomposition liquids on seed germination and root length of tumorous stem mustard were weakened with the decreased concentration;for the four kinds of water extracts and decomposition liquids,low-concentration treatment solutions promoted the increase of plant height and fresh weight,while high-concentration treatment solutions inhibited the increase of plant height and fresh weight of young seedlings of tumorous stem mustard;the allelopathic effect of leaf extract on seed germination of tumorous stem mustard was stronger than those of root extract and decomposition liquids,the allelopathic effects of decomposition liquids on seedling growth of tumorous stem mustard were stronger than those of water extracts,the inhibitory effect of leaf extract on seed germination and seedling growth of tumorous stem mustard were stronger than that of root extract,and the inhibitory effect of 15-d decomposition liquid on seed germination and seedling growth of tumorous stem mustard was stronger than that of 7-d decomposition liquid.[Conclusion] The water extracts and decomposition liquids of tumorous stem mustard residues had certain autotoxicity on seed germination and seedling growth of tumorous stem mustard,and their allelopathic effects had a concentration-dependent manner.It could be presumed that the autotoxicity of tumorous stem mustard is the main cause of continuous cropping obstacle.     

超重处理对茎瘤芥种子萌发及幼苗生长的影响

[目的]研究超重处理对茎瘤芥(Brassica juncea var.tumida Tsen et Lee)种子萌发及幼苗生长的影响,探讨超重处理对茎瘤芥种子生长发育的影响机理。[方法]以0、2 000、3 000和4 000 r/min的超重力分别处理茎瘤芥种子1.5、3.0和4.5 h后,进行培养,观察其出苗时间、出苗率、性状表现,并测定幼苗叶绿素含量、可溶性蛋白含量和过氧化物酶活性。[结果]与对照相比,超重处理后,茎瘤芥发芽率、发芽势和发芽指数随处理条件变化有不同程度的降低。超重处理后,苗期茎瘤芥植株变矮,根系变短且发达,叶长变短,鲜重和干重都有不同程度的降低,而茎粗则不同程度增加。超重处理后,茎瘤芥幼苗叶绿素含量和过氧化物酶活性都有不同程度的增加,而可溶性蛋白含量有不同程度的降低。超重处理可以影响茎瘤芥幼苗的生长,处理时间以及重力加速度是影响其生长的重要因素,适当的超重处理可以促进植物生长。同时,超重处理可增强茎瘤芥幼苗的抗倒伏能力、抗有害物的能力和合成有机物的能力。[结论]该研究可为超重技术在茎瘤芥生产中的应用提供参考依据。     

PEG浸老化种子对茎瘤芥幼苗株高的影响

[目的]分析聚乙二醇（PEG）浸老化种子对茎瘤芥幼苗株高的影响。[方法]使用不同浓度PEG 6000（5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%）,以不同处理时间（4、8、12、16、20、24 h）浸茎瘤芥老化种子后,测量其幼苗株高。[结果]与对照相比,5%、10%、15%、20%、25%、30%PEG 6000以不同处理时间,浸茎瘤芥老化种子后,其幼苗株高均显著增加（P〈0.05）。[结论]25%PEG 6000浸茎瘤芥老化种子12 h,其幼苗株高最高。     

茎瘤芥种子萌发期过氧化物酶的研究

[目的]较为系统地研究茎瘤芥种子萌发期过氧化物酶（POD）的有关酶学特性。[方法]以3个品种的茎瘤芥种子为试材,测试其7d内种子的发芽情况,探讨了种子发芽韭、发芽势与其过氧化物酶的相关性。[结果]以愈创木酚为底物,产物的最大吸收波长为470mm。永安小叶POD的最适pH值为5．6,最适温度为20℃,动力学参数Km=0．093mol／L,Vmax=0．14OD／min;优榨1号POD的最适pH值为4.8,最适温度为30℃,动力学参数Km=0．046mol／L,Vmax=0．088 OD／min;乾兴榨菜POD的最适pH值为5．2,最适温度为30℃,动力学参数Km=0．063mol／L,Vmax=0．108 OD／min。动力学分析表明,POD与愈创木酚结合力最强,POD热稳定性较好,在70℃保温30min仍有50％以上的活力,维生素C和亚硫酸钠对POD活力抑制效果好。[结论]茎瘤芥种子的发芽力与其过氧化物酶活力的增减具有同步性。     

Ca2+对酸雨胁迫下茎瘤芥种子萌发和幼苗生长效应的影响

[目的]探讨Ca2+对酸雨胁迫下茎瘤芥种子萌发和幼苗生长效应的影响。[方法]以茎瘤芥种子为材料,研究了外源Ca2+对酸雨胁迫(pH 2.5、pH 3.0)下茎瘤芥种子萌发及幼苗生长效应的影响。[结果]低浓度Ca2+对酸雨胁迫下茎瘤芥种子的萌发有促进作用;向酸雨胁迫下的幼苗喷洒低浓度的Ca2+,能够使茎瘤芥幼苗叶子中的叶绿素含量增加以及丙二醛含量减少,对植物起到保护作用。[结论]为提高茎瘤芥的产量和品质提供了理论依据。     

PEG6000渗调处理对茎瘤芥老化种子膜透性的影响

[目的]分析PEG6000渗调处理对茎瘤芥老化种子膜透性的影响。[方法]使用不同浓度PEG6000（5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％）,以不同的时间（4．8、12、16、20、24h）处理茎瘤芥老化种子后,测定种子浸泡液相对电导率。[结果]与对照相比,不同浓度PEG6000以不同时间处理茎瘤芥老化种子后,种子的膜透性均显著下降。[结论]25％的PEG6000处理12h,种子膜透性降幅最大,效果最佳。     

尿素缓释剂对茎瘤芥产量和硝酸盐的影响

[目的]探明尿素缓释剂配方的最佳浓度。[方法]选用混合尿素缓释剂2％、3％、4％3个浓度,与肥料混合一次性施入,以常规性2次施肥和1次施肥而不加缓释剂为时照,研究3种浓度的混合尿素缓释剂对茎瘤芥产量和硝酸盐的影响。[结果]混合尿素缓释剂能明显减缓尿素分解,延长供氮期。[结论]一次性施3％混合尿素缓释剂,能明显提高产量,降低硝酸盐含量,增加经济效益。