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草地早熟禾农杆菌介导法基因转化条件 总被引:11,自引:3,他引:8
以大青山草地早熟禾(Poapratensis L. cv.Daqingshn)和超级伊克利草地早熟禾(Poa pratensis L. cv.Total eclipse)成熟种子诱导产生的胚性愈伤组织为材料,比较抗生素及筛选剂对愈伤组织生长和绿苗分化的影响.结果表明:500 mg/L的羧苄青霉素或头孢霉素对愈伤组织的生长与对照间差异不显著;羧苄青霉素可提高愈伤组织绿苗分化率,而头孢霉素则有抑制作用;2个供试品种G-418的筛选浓度分别为50和70 mg/L时,愈伤组织的褐化率达100%;在幼苗分化期,G-418浓度为20 mg/L时,2个供试品种的试管苗均为白化苗;在观察到愈伤组织周围的培养基上显现菌落时,立即转移到筛选培养基上为宜.用农杆菌介导法获得了转苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白(B.t)基因植株. 相似文献
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以苏丹草幼穗诱导产生的胚性愈伤组织为材料,比较了抗生素羧苄青霉素、头孢霉素及筛选剂卡那霉素对愈伤组织生长、绿芽分化和绿苗生长的影响.结果表明:500 mg/L的羧苄青霉素对愈伤组织生长的影响与对照差异不明显,可提高愈伤组织绿苗分化率;500 mg/L的头孢霉素明显抑制愈伤组织的生长,对分化影响不大;愈伤组织生长期筛选剂卡那霉素浓度为75 mg/L时,愈伤组织的褐化率达到100%;愈伤组织分化期,卡那霉素浓度为10 mg/L时,绿芽能分化成幼苗,所有幼苗的心叶白化、生长速度与对照无差异.培养基中添加500 mg/L的羧苄青霉素、经农杆菌侵染和15 mg/L卡那霉素筛选获得再生植株,经PCR检测,初步证明NPTⅡ选择标记基因已整合到部分转化植株的基因组中. 相似文献
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三角叶滨藜甜菜碱醛脱氢酶基因克隆及植物表达载体的构建 总被引:2,自引:1,他引:2
通过RT PCR技术从盐生植物三角叶滨藜总RNA中,扩增并克隆了BADH68基因。该基因全序列显示,核苷酸序列长1520bp,12~1515bp为1个开放阅读框架,推测的氨基酸序列全长为500个氨基酸残基,其核苷酸序列与菠菜和山菠菜同源性分别为89%和95%。利用BamHI和SacI酶切位点将BADH68基因连接到pCAMBI A2301的多克隆位点,并把35S启动子和nos终止子分别连接到BADH基因的上游和下游的多克隆位点上,获重组植物表达质粒pCAMATBADH682,并转入根癌农杆菌LBA4404中,获LBA4404(pCBAMATBADH682)菌种。 相似文献
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农杆菌介导法获得草地早熟禾转Bt基因植株 总被引:8,自引:3,他引:8
以草地早熟禾品种超级伊克利成熟种子为外植体材料,当愈伤组织诱导培养基中琼脂的用量增加至16g/L时,诱导产生的颗粒状胚性愈伤组织占愈伤组织总数的40%以上。愈伤组织经携带pGBI4AB农杆菌LBA4404的感染和共培养后,在继代培养基上添加50mg/L筛选剂G418,可较好地筛选出具有卡那霉素抗性的愈伤组织,进而获得具有卡那霉素抗性的再生植株。PCR分子检测结果表明,Bt基因已导入转化植株。生物学抗虫性鉴定结果显示,转Bt基因当代植株对1~2龄棉铃虫具有不同程度的抗性。 相似文献
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拟南芥的APETALA1(AP1)是花分生组织的决定基因,同时也是萼片和花瓣正常发育的控制因子.本研究构建了含有AP1基因的植物表达载体PCAP,启动子为CaMV 35S,通过农杆菌侵染法转化油菜.用PCR方法对转基因植株进行了DNA和RNA水平上的分子检测,证明AP1基因已经整合到转基因植株的基因组中,并且得到了有效的表达.获得的转基因植株也表现出提前开花的特性.试验结果表明,AP1基因在促进成花方面的关键作用不具有种属特异性,利用基因工程可以快速高效地进行油菜早熟性的遗传改良. 相似文献