山羊ESC培养上清液对PBMC和PBL转化及分泌活性的影响

【目的】探索山羊子宫内膜基质细胞(ESC)培养上清,对山羊外周血单核细胞(PBMC)和外周血淋巴细胞(PBL)的转化与分泌活性的影响。【方法】分离山羊PBMC和PBL,制备原代ESC(ESC0)及永生化传至30代的ESC(ESC30)培养上清,将不同培养上清与PHA组合刺激PBMC与PBL转化,应用MTT法检测ESC0及ESC30培养上清对PBMC和PBL转化的作用,ELISA检测PBMC和PBL分泌IL-2I、L-4的相对含量。【结果】ESC0及ESC30上清可刺激PBMC/PBL转化并分泌IL-2和IL-4,抑制PHA-P诱导的PBMC/PBL增殖及IL-2的分泌,但对PHA-P引起的PBMC/PBL分泌IL-4有促进或协同作用。【结论】ESC能通过旁分泌作用影响PBMC和PBL的转化与分泌活性,优势活化Th2型淋巴细胞,在子宫局部免疫调节中发挥重要作用。     

孕早期山羊胎儿IL-4水平与PBMC增殖活性的关系

探讨了妊娠早期山羊胎儿IL-4水平与外周血单核细胞(PBMC)增殖活性的关系。用MTT法,检测孕早期山羊胎儿匀浆上清液(FHS)在不同浓度下对PBMC转化增殖活性的影响,设立孕130 d胎儿血清(FS)及FHS PHA-P对照组;检测蛋白质浓度在1×10-4mg/mL时IL-4的含量,并与转化后的含量进行比较。结果:妊娠早期,FHS对PBMC转化活性的影响随着妊娠的发展而逐渐降低,但均低于妊娠后期对照组,FHS蛋白质浓度在1×10-4~1×10-5mg/mL时,对PBMC的转化增殖效果均较好(P<0.05),且与PHA-P具有协同作用;妊娠早期FHS的IL-4水平随着妊娠的发展呈现上升的趋势,且均高于FS对照组,FHS的IL-4水平与转化后无显著差异(P>0.05)。妊娠早期FHS IL-4水平的上升与PBMC转化活性下降之间呈负相关关系,正常妊娠早期主要是Th2型细胞因子在起作用,因此可以说明,PBMC转化活性的下降可能是IL-4发挥免疫抑制作用的结果,进而说明,妊娠早期胎儿可能通过自身分泌一些Th2型细胞因子,在母体子宫局部免疫中发挥免疫抑制作用,使其自身不被母体排斥,使妊娠能够顺利进行。     

苦马豆素对小鼠细胞免疫功能的影响

【目的】探索苦马豆素(SW)对小鼠免疫器官发育、外周血液中细胞数及淋巴细胞增殖功能的影响,为SW免疫研究提供新的试验依据。【方法】将80只昆白系小鼠随机分为8组,其中5个试验组按0.05,0.2,0.8,3.2和6.4 mg/kg剂量每天灌服不同质量浓度的SW生理盐水溶液,连续21 d;其他3组均为对照组(分别为生理盐水组、环磷酰胺组和空白对照组)。检测小鼠胸腺和脾脏指数,用细胞分析仪检测外周血液中白细胞、红细胞及淋巴细胞数;用MTT法检测脾脏淋巴细胞的增殖活化。【结果】在SW剂量为0.2~0.8 mg/kg,小鼠脏器(胸腺和脾脏)指数及外周血液中的细胞数均增加;SW单独作用或其协同刀豆蛋白A(ConA)和植物血凝素P(PHA-P)刺激时,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性增强,SW协同脂多糖(LPS)刺激时,小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性降低。SW剂量为6.4mg/kg时,小鼠的脏器指数和外周血液中的细胞数均减少;无论小鼠脾脏淋巴细胞受丝裂原刺激与否,小鼠脾脏淋巴细胞的增殖活性均降低。【结论】SW可以通过提高小鼠脏器指数及外周血液中细胞数提高淋巴细胞的增殖活性,增强小鼠的细胞免疫功能;SW剂量为6.4 mg/kg对小鼠细胞免疫功能有抑制作用,提示SW对小鼠细胞免疫功能的影响具有选择性和双向调节作用。     

硒对山羊细胞免疫功能的影响

【目的】探讨硒对山羊细胞免疫功能的影响。【方法】12只试验羊随机分为4组,分别灌服0.3,0.5和0.7 mg/kg的硒以及1 mL/kg的蒸馏水,每周1次,连续3周,检测硒对山羊外周血单个核细胞(Peripheral bloodmononuclear cell,PBMC)的活化作用。无菌分离未服硒山羊PBMC,分别加入4,8,12和16μg/mL亚硒酸钠进行体外培养,检测硒在体外对PBMC的活化作用及其分泌IL-2的影响。【结果】山羊灌服0.7 mg/kg硒2周后及灌服0.5mg/kg硒3周后,其PBMC对PHA刺激的反应性显著提高。8~16μg/mL亚硒酸钠在体外培养中可显著促进山羊PBMC的活化,且呈剂量依赖关系,4μg/mL亚硒酸钠对PBMC的活化作用较弱,与对照组间差异不显著;山羊PB-MC体外培养时,加入8~12μg/mL亚硒酸钠可显著促进山羊PBMC的IL-2分泌,4和16μg/mL亚硒酸钠虽能诱导PBMC分泌IL-2,但与对照组差异不显著。【结论】山羊灌服一定量的硒,可显著提高其免疫细胞对抗原刺激的反应性。亚硒酸钠在一定质量浓度范围内可显著促进山羊PBMC的活化,且能促进其IL-2分泌。     

CD58及雌酮对妊娠早期山羊EML分泌IL—2及IL—4的影响

将妊娠17d山羊子宫内膜淋巴细胞(EML)放入含不同剂量PHA-P,CD58和雌酮的介质中进行体外培养,并分别用生物学方法和双抗体夹心ELISA法测定培养上清液中IL-2和IL-4的水平。结果表明,CD58和雌酮处理组EML分泌的IL-2水平低,与细胞对照组差异不显著,并显著低于PHA-P处理组。3个浓度CD58处理组IL-4分泌水平高达5.40～6.36ng/mL,高浓度雌酮处理组IL-4分泌量也达到4.77ng/mL,与细胞对照组差异均极显著,而且CD58能以剂量依赖方式促进EML对IL-4的分泌。     

山羊白细胞介素-18成熟蛋白的表达

 【目的】为了阐明重组蛋白的活性，置备具有生物学活性的重组白细胞介素18，应用于畜牧业生产。【方法】将含有山羊白细胞介素（gIL）-18基因的重组质粒pET-32a（+）在大肠杆菌BL21（DE3）中以1mmol•L-1 IPTG诱导4h或者更长时间进行表达。【结果】经SDS-PAGE试验检测到了gIL-18与pET载体融合表达的重组蛋白。以该重组蛋白与佐剂混合后，免疫小鼠制备多克隆血清。经Western-blotting 试验证实该重组蛋白具有免疫原性。经过包涵体变性、层析柱纯化和复性，证实该蛋白具有诱导MDBK细胞分泌IFN-γ和刺激PBMC增殖的生物学活性。这表明重组蛋白保留了天然蛋白大部分的生物学活性。另外，该重组蛋白还可以保护小鼠抵御PRV强毒的攻击。【结论】这为gIL-18作为免疫佐剂和免疫治疗剂的实际应用奠定了基础。     

桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响。【方法】无菌分离小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞，制备淋巴细胞和巨噬细胞悬液。分别培养这2类细胞，并分为空白对照组、阳性对照组（左旋咪唑处理细胞）及25，50，75 和100 μg/mL桔梗皂苷D组，采用MTT法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬功能的影响，采用ELISA法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌的影响。【结果】桔梗皂苷D能够促进淋巴细胞增殖，增强巨噬细胞的吞噬功能，并可刺激淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12的分泌，其中以50 μg/mL组效果最佳。【结论】桔梗皂苷D能增强小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的免疫调节活性。     

桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响

【目的】探讨桔梗皂苷D对小鼠淋巴细胞和巨噬细胞免疫功能的影响。【方法】无菌分离小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞,制备淋巴细胞和巨噬细胞悬液。分别培养这2类细胞,并分为空白对照组、阳性对照组(左旋咪唑处理细胞)及25,50,75和100μg/mL桔梗皂苷D组,采用MTT法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞增殖和巨噬细胞吞噬功能的影响,采用ELISA法检测桔梗皂苷D对淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12分泌的影响。【结果】桔梗皂苷D能够促进淋巴细胞增殖,增强巨噬细胞的吞噬功能,并可刺激淋巴细胞IL-2、IL-4和巨噬细胞TNF-α、IL-12的分泌,其中以50μg/mL组效果最佳。【结论】桔梗皂苷D能增强小鼠淋巴细胞和巨噬细胞的免疫调节活性。     

猪白细胞介素-2基因在大肠杆菌中的表达及其生物学活性测定

【目的】在大肠杆菌中表达猪白细胞介素-2(pIL2),并鉴定其生物学活性。【方法】以含猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增IL-2基因。将猪IL-2基因定向克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)感受态细胞,在IPTG诱导下表达融合蛋白GST-pIL2,并应用甲基噻唑基四唑(MTT)试验测定融合蛋白的生物学活性。【结果】以含有猪IL-2基因的重组质粒pGEM-pIL2为模板,PCR扩增出1条约420bp的带。所获重组质粒pGEX-pIL2经酶切、测序鉴定,证实含有目的片段,且连接、构建正确。SDS-PAGE电泳结果显示,可检测到相对分子质量约为42ku的GST-pIL2,Western-blot证实GST-pIL2能与兔抗猪IL-2单克隆抗体发生特异性反应。表达蛋白经薄层层析扫描分析,表达量约占菌体总蛋白的40%。MTT试验证实,表达产物经变性、复性后能极显著促进猪脾淋巴细胞增殖。【结论】猪IL-2基因在大肠杆菌中得到表达,表达的蛋白具有一定的生物学活性。     

健脾益气汤对免疫抑制型小鼠免疫功能的影响

【目的】探讨健脾益气汤对免疫抑制小鼠免疫功能的影响。【方法】给小鼠皮下注射环磷酰胺(CTX)30mg/(kg·d),制备免疫抑制模型;阴性对照组小鼠灌胃生理盐水,阳性对照组灌胃0.1g/(kg·d)左旋咪唑,健脾益气汤低剂量给药组(16g/(kg·d))和高剂量给药组(44g/(kg·d))分别灌胃健脾益气汤,研究健脾益气汤对小鼠体质量、脾脏指数以及血清中IgG、IL-2、TNF-α质量浓度和T淋巴细胞亚群中CD4+、CD8+数量的影响。【结果】健脾益气汤低剂量给药组和高剂量给药组均能拮抗由环磷酰胺所导致的体质量下降,健脾益气汤高剂量组显著降低了免疫抑制小鼠的脾脏指数。健脾益气汤可以明显提高免疫抑制小鼠血清中的IgG、IL-2和TNF-α质量浓度,增加免疫抑制小鼠外周血中T淋巴细胞CD4+数量,降低CD8+数量,使CD4+/CD8+提高。【结论】健脾益气汤能增强免疫抑制小鼠的免疫功能。     

荣昌猪白细胞介素-8基因cDNA的克隆及序列分析

从体外ConA刺激20 h的荣昌猪外周血淋巴细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术扩增,pMD18-T载体连接,常规转化后,进行酶切及序列测定,并进行鉴定。结果显示:猪IL-8基因与人、猕猴、牛、绵羊和家犬基因序列的同源性分别为81.3%、80.4%、88.9%、88.2%和85.3%。     

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析

白细胞介素-18（IL-18）又称γ干扰素诱导因子（IGIF）,研究表明IL-18是一种重要的新型免疫佐剂分子。为探讨猪IL-18的免疫佐剂作用,该研究根据已发表的猪IL-18基因序列,设计并合成1对特异性引物,从猪脾脏中直接扩增得到猪IL-18全基因,并进行克隆和序列测定、分析。     

vMDV感染肉仔鸡IL-2体外诱生活性及淋巴细胞增殖反应的变化

本研究以1日龄AA肉用仔鸡为实验动物,以马立克氏病强毒(vMDV)人工感染后,白细胞介素 2(IL 2)和淋巴细胞增殖的变化。结果表明,同健康雏鸡相比,脾T淋巴细胞IL 2诱生活性和T淋巴细胞增殖反应降低(P>0 05)和显著降低(P<0 05)。MD发病率35 0%,死亡率12 5%。     

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析(英文)

[Objective] To clone the porcine interleukin-18(IL-18) cDNA and explore the immunological effectiveness of porcine IL-18 as an adjuvant of genetic vaccine. [Method] The spleen lymphocytes were isolated from Henan three-way cross-breeding pigs. According to the porcine IL-18 gene in GenBank, a pair of specific primers was designed. The full length cDNA of porcine IL-18 was amplified by RT-PCR. Subsequently, porcine IL-18 cDNA was cloned into pGEM-T vector and sequenced and analyzed. [Result] The porcine IL-18 gene demonstrated an open reading frame of 579 bp encoding an inactive precursor protein with 192 amino acids. The precursor protein had no typical hydrophobic signal peptide and cleaved by interleukin-1 beta (IL-1β) converting enzyme (ICE) in caspase-1 splice site; the porcine mature protein had biological activity. After comparing with other porcine IL-18 genes, the nucleotide sequence homology was over 96% and the deduced amino acid homology was more than 98%. [Conclusion] A full length procine IL-18 gene was gained. It lays the foundation for porcine IL-18 as an adjuvant of genetic vaccine.     

三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析

[目的]为进一步研发新型抗病毒制剂和疫苗佐剂、有效控制猪重大传染病奠定基础。[方法]根据GenBank中猪白细胞介素-18基因（IL-18）序列,设计1对特异性引物,应用RT-PCR方法从河南三元杂交猪脾脏淋巴细胞中扩增猪IL-18基因,并进行克隆、序列测定和分析。[结果]猪IL-18基因全长为579 bp,编码192个氨基酸的无活性前体蛋白,但前体蛋白并不含典型的疏水信号肽,在第35位氨基酸残基处有1个潜在的白细胞介素1β转换酶（ICE）剪切位点,剪切后变为具有生物活性的猪IL-18成熟蛋白。序列分析结果表明,该试验获得的猪IL-18基因与已知猪IL-18基因序列同源性很高,均为96%以上,其推导的氨基酸同源性在98%以上。[结论]该研究成功构建了猪IL-18基因的重组真核表达载体并得到了具有生物活性的瞬时表达产物。     

慢性持续期支气管哮喘患者痰液中IL-4水平与其临床基线评估相关性分析

目的:探讨慢性持续期支气管哮喘患者痰液中白细胞介素-4(IL-4)水平与其临床基线评估的相关性。方法:分别对慢性持续期支气管哮喘患者轻度16例、中度14例、重度18例进行临床基线评估,主要是肺功能检测及哮喘症状控制评分;并同时采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测其诱导痰液中IL-4水平。结果:慢性持续期支气管哮喘患者痰液中IL-4水平与肺通气功能指标FEV1%呈负相关,与哮喘发作程度临床症状评分相一致。结论:慢性持续期支气管哮喘患者痰液中IL-4水平与其发作程度有关,能作为哮喘评估的一项指标。     

犬IL-2基因克隆及原核表达

[目的]研究犬IL-2基因的克隆和表达,为开发新型免疫增强剂和基因工程疫苗提供理论支持。[方法]从犬全血中分离出白细胞,经刀豆素刺激培养20 h后,提取总RNA;根据GenBank中犬IL-2基因序列,设计1对引物,进行PCR扩增,并构建原核表达载体pET-28a,将其转化到宿主菌BL21中,经IPTG诱导表达,表达产物用SDS-PAGE进行分析。[结果]RT-PCR扩增出一条约500 bp的条带,与预期结果相符;重组质粒pMD18-T-IL2经双酶切后,产生一个约500 bp基因片段,说明目的基因被成功克隆;表达载体pET-28a-IL2经双酶切和PCR鉴定后,分别产生一个约500 bp目的片段,表明表达载体构建成功;表达产物经SDS-PAGE分析,分子量约为20 kDa,与预期蛋白大小基本相同。[结论]犬IL-2基因被成功克隆和表达。     

黑白花奶牛白细胞介素-2基因的克隆和表达

[目的]克隆牛白细胞介素-2基因(IL-2),并观察其在原核细胞中的表达。[方法]应用RT-PCR技术从黑白花奶牛外周血淋巴细胞总RNA中扩增编码牛IL-2基因,并将其克隆到pGEX-2T原核表达质粒中,转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE分析。[结果]通过RT-PCR扩增获得500 bp的目的片段,所克隆的IL-2基因在原核细胞中成功表达,表达产物为分子量约43 kD的融合蛋白。[结论]该研究为IL-2基因的进一步研究提供了理论依据和物质基础。     

黑白花奶牛白细胞介素-2基因的克隆和表达(英文)

[Objective] The aim of this study is to clone bovine interleukin-2 gene(IL-2)and observe its expression in prokaryotic cells.[Method]Bovine IL-2 gene was amplified from total RNA of peripheral blood lymphocytes of holstein-friesian cows by RT-PCR.Subsequently,the gene was cloned into pGEX-2T prokaryotic expression plasmid to construct recombinant,which was then transformed into Escherichia Coli BL21.After IPTG induction,SDS-PAGE analysis was conducted.[Result]A 500 bp target fragment corresponding with expectation was obtained by RT-PCR.The cloned gene successfully expressed fusion protein of about 43 kD in prokaryotic cells.[Conclusion]This study provided a theoretical and material basis for further researches on IL-2 gene.     

四川白鹅白细胞介素-2基因的克隆及生物信息学分析(英文)

[Objective] The study aimed to clone interleukin-2(IL-2) gene from Sichuan white goose. [Method] Based on the IL-2 gene of duck accessed in GenBank, a pair of primers was designed for cloning IL-2 gene from total RNA of peripheral blood lymphocytes of Sichuan white goose stimulated by ConA via RT-PCR technology. The yielded fragment was sequenced for bioinformatics analysis. [Result] The full length of IL-2 gene of Sichuan white goose is 468 bp that contains a 441 bp open reading frame(ORF), encoding 146 amino acid residues. Bioinformatics analysis shows that the amino acid sequence of IL-2 gene of Sichuan white goose contains four phosphorylation sites, a glycosylation site and a signal peptide with 21 amino acid residues. Homologies of IL-2 nucleotide sequence and amino acid sequence between Sichuan white goose and duck, chicken, turkey are 92.7%, 77.5%, 78.2% and 85.8%, 65.5%, 64.1%, respectively. By contrast IL-2 nucleotide sequence and amino acid sequence between Sichuan white goose and mammalian and rodents such as human, monkey, rat, bovine, horse, pig, cat, mouse, rabbit and deer, are all less than 45% and 28%, respectively. [Conclusion] The IL-2 gene of Sichuan white goose has closer genetic relationship with those of chicken and duck.