粗毛淫羊藿幼叶愈伤组织诱导及其总黄酮含量

为了对粗毛淫羊藿野生资源的保护及淫羊藿黄酮离体生产体系提供技术参考,以粗毛淫羊藿幼叶为外植体,研究粗毛淫羊藿愈伤组织诱导的灭菌剂、消毒条件、培养基、激素配比和光照条件,并测定愈伤组织中总黄酮的含量。结果表明:利用粗毛淫羊藿幼叶进行愈伤组织培养,用2%的NaClO消毒14min,接种于培养基MS+2,4-D 2.0mg/L+6-BA 0.5mg/L+IBA 0.5mg/L+NAA 1mg/L,在24℃光照强度为1 000lx条件下进行诱导效果最好,继代和保存应在适宜的黑暗条件下进行;诱导出的胚性愈伤组织总黄酮含量较高,达5.38%,与野生粗毛淫羊藿总黄酮含量想当,高于药典规定的标准。     

豌豆再生体系的建立

【目的】建立用于豌豆组织培养与转基因的再生体系.【方法】利用植物组织培养的外植体的消毒、接种、脱分化、再分化和生根等方法进行豌豆再生体系的建立.【结果】以‘陇豌1号’为试验材料,其胚轴为豌豆愈伤组织诱导最佳外植体;适宜诱导培养基为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L 6-BA;最佳增殖培养基为:MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA;胚轴在MS+0.2mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA培养基中分化率最高,达26.21%,MS+B5+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA条件下最适宜子叶的分化(14.80%);不定芽在1/2 MS+0.5mg/L NAA下生根率最高,达66%.【结论】‘陇豌1号’的这一再生体系可用于其转基因受体系统的建立和种苗的组培快繁.     

箭杆杨组织培养再生体系的建立

【目的】探讨常温下适宜箭杆杨试管苗腋芽增殖、生根的最佳培养条件。【方法】以MS培养为基本培养基,附加不同浓度的吲哚丁酸(IBA)、萘乙酸(NAA)以及6-氨苄基腺嘌呤(6-BA)组成试验培养基,对箭杆杨组织进行培养,观察其生根情况和愈伤组织诱导情况。【结果】箭杆杨脱分化最佳培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的愈伤组织诱导率为90%;不定芽分化诱导培养基为:1/2MS+0.1 mg/L IBA+0.5 mg/L6-BA,该条件下的诱导分化率为67.1%;芽增殖培养基为:MS+1.0 mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA,该条件下的增殖数为5.8;最佳生根培养基为:1/2MS+1.0 mg/L IBA,该条件下的生根率为81.3%。【结论】建立了箭杆杨组织培养再生体系,为其种质资源的试管保存奠定了基础。     

球根海棠"金正日"的离体培养研究

通过诱导胚状体建立组织培养再生系统,研究了球根海棠"金正日"的离体培养.结果表明,外植体经HgCl2溶液表面消毒后,接种到MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 1 mg/L培养基上诱导愈伤组织,15 d后转接到1/2 MS+6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L培养基上,诱导胚状体,诱导率90%以上.胚状体在MS+6-BA 0.3 mg/L +NAA 0.03 mg/L培养基上以丛生芽形式增殖,增殖系数达4～8倍.试管苗生根可采用MS+IBA 0.1 mg/L、蔗糖2%培养基.生根率100%.     

朝鲜淫羊藿组织培养关键技术研究

为建立朝鲜淫羊藿快繁体系提供依据,探讨朝鲜淫羊藿外植体消毒和芽诱导的影响因子,以朝鲜淫羊藿分蘖芽为外植体,按不同消毒时间(2、4、2+2、6 min)、不同基本培养基(MS、WPM、N6)、不同浓度的生长调节物质(6-BA、IBA、GA3),对芽的诱导与增殖条件进行了系统研究.结果表明,最好的消毒方法为75％乙醇消毒30 s,再用0.1％HgCl2消毒2+2 min,外植体存活率最高,达87.5％;芽诱导适宜的培养基为WPM+1.5 mg/L6-BA+0.5 mg/L IBA+0.5 mg/L GA3,诱导率为81.67％;芽增殖的适宜培养基为WPM+1.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/LIBA.试验筛选出分蘖芽适宜的消毒方法及不定芽诱导、增殖的培养基,为建立朝鲜淫羊藿分蘖芽的组培快繁体系奠定基础.     

杜仲愈伤组织诱导和植株再生体系的建立

【目的】研究在BA、NAA、IBA、2,4-D等激素作用下,杜仲愈伤组织诱导、愈伤组织诱导丛生芽及丛生芽诱导生根各阶段的最佳培养基配方,建立杜仲植株再生体系,为杜仲转基因研究提供基础材料。【方法】以杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段为外植体,使用BA、NAA、IBA、2,4-D等激素,配制成不同质量浓度的培养基,进行杜仲愈伤组织诱导,同时分析愈伤组织诱导丛生芽和丛生芽诱导生根培养基的最佳配方,建立杜仲植株的再生体系。【结果】杜仲愈伤组织诱导的培养基分别为:成熟胚MS+BA 2.0mg/L+NAA 2.5mg/L,诱导率77.8%;幼嫩胚MS+BA 0.5mg/L+2,4-D 2.0mg/L,诱导率88.9%;叶片MS+BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L,诱导率100%;茎段MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,诱导率为100%。愈伤组织诱导不定芽形成的适宜培养基为MS+BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L,不定芽诱导率为88.9%,增殖系数为3±1;杜仲在1/4MS的基本培养基中生根最好,生根率达80%,激素的存在反而会抑制生根。【结论】杜仲成熟胚、幼嫩胚、叶片和茎段均可通过愈伤组织途径诱导不定芽的形成,并诱导生根,建立杜仲愈伤组织再生体系,但不定芽的增殖系数较低。     

微型月季组培快繁关键技术研究

以微型月季带腋芽的幼嫩茎段为试材,对微型月季组培快繁中外植体消毒、愈伤组织诱导、丛芽增殖培养以及植株生根等关键技术进行研究。结果表明,用75%酒精消毒2 min后,再用HgCl_2消毒10~15 min时,外植体存活率最高;培养基MS+2 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA的愈伤组织诱导率可达95%;愈伤组织增殖最适培养基为MS+1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L KT+0.2 mg/L NAA;丛芽分化增殖最适培养基为MS+3 mg/L 6-BA+0.2 mg/L KT+0.2 mg/L NAA;生根最适培养基为1/2 MS+0.1 mg/L NAA。     

木薯良种GR891组织培养与快速繁殖技术

【目的】探讨木薯良种GR891的组织培养与快速繁殖技术。【方法】以越冬木薯种茎及其新长嫩茎的腋芽或顶芽为外植体,探讨不同消毒时间、6-BA和NAA浓度对木薯不定芽诱导或增殖、生根的影响。【结果】以带顶芽或腋芽的木薯幼嫩茎段作外植体进行不定芽诱导培养比较适宜;接种前采用0.1% 升汞消毒10~15 min,不定芽和愈伤组织诱导率均最高,分别为57.1%和61.9%。不定芽诱导培养基以MS+0.5 mg/L 6-BA最佳,不定芽诱导率最高（72.2%）,芽生长较好;丛生芽增殖培养基以MS+0.5~1.0 mg/L 6-BA为宜,其增殖倍数达3.0倍,并形成健壮的丛生芽;生根培养基以MS+0.3~1.5 NAA mg/L最佳,生根率可达90.0%以上。将生根苗移栽至混合基质（60%塘泥+40%河沙）中,约1周后可萌生新根,移栽成活率达95.0%以上。【结论】在MS培养基中添加低浓度6-BA,有利于不定芽的诱导和增殖;6-BA和NAA配合使用均不利于不定芽的诱导和增殖;不定芽的诱导和生长无需添加外源NAA。0.9 mg/L NAA对木薯不定芽生根效果较好,而6-BA对不定芽生根有一定抑制作用。     

苜蓿胚性愈伤组织诱导及植株再生研究

以苜蓿5～7 d苗龄无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究培养基中不同激素和浓度配比对苜蓿愈伤组织诱导和分化的影响。结果表明,MS+2,4-D 2.0 mg/L+6-BA 1.0 mg/L愈伤组织诱导率达100%,且愈伤组织状态良好,增殖速度快。MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L为苜蓿胚性愈伤组织诱导的适宜培养基,诱导率为37.8%。胚性愈伤组织分化成苗培养基为MS+6-BA0.2 mg/L+NAA 0.01 mg/L,生根培养基为1/2MS+NAA 0.02 mg/L+蔗糖10.0 g/L。     

不同基因型甘蔗离体培养技术研究

为探讨甘蔗不同基因型的组织培养技术,以ROC22、03-75、02-6和B8品种(系)为试验材料,经过(52±0.2)℃水浴热处理及培养后,筛选出适宜的愈伤组织诱导培养基、愈伤组织分化培养基、芽增殖和苗生根培养基。结果表明:甘蔗在不同培养阶段对激素种类、质量浓度有差异,其中MS+3.0 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L NAA培养基对愈伤组织诱导培养较适宜,愈伤组织的分化培养基、增殖培养基分别为MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.05 mg/L TDZ、MS+2.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA+0.5 mg/L PP333,1/2MS改良+4.0 mg/L NAA+1.0 mg/L PP333培养基为最佳的生根培养基,各甘蔗品种(系)的生根率高,根系粗壮。     

沙门菌、巴氏杆菌和大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立

旨在建立一种可以应用于临床样本同时检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌感染的多重PCR方法。根据NCBI上已收录的沙门菌hut基因、多杀性巴氏杆菌 kmt1基因和大肠埃希菌23SrRNA基因的全基因序列,设计并合成3对特异性引物,通过优化多重PCR反应条件,建立能够同时检测3种细菌混合感染的多重PCR诊断方法。特异性分析表明,应用该方法可以从沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌以及3种细菌的混合物中扩增出3条大小分别为286 bp、457 bp和652 bp的特异性条带,其他对照组检测结果均为阴性;敏感性分析表明,该方法对沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的最低检出量分别为1.77×10　、1.99×10　、2.01×10　 CFU/mL;人工模拟感染样本检测表明,该方法能从混合感染的病料中检测出3种病原菌。可见：所建立的多重PCR方法具有特异性强,敏感度高,稳定性好的特点,可以有效检测沙门菌、多杀性巴氏杆菌和大肠埃希菌的混合感染。     

二色胡枝子黄酮体外抗氧化活性

通过二色胡枝子黄酮(Lespedeza bicolor flavonoids ,LBF)清除羟自由基、超氧阴离子的效果及抑制猪油、菜油和亚油酸的自氧化来研究其体外抗氧化作用.结果表明:二色胡枝子黄酮对清除自由基有显著作用,且清除率随黄酮浓度的增加而增大;能够明显地抑制猪油、菜油、亚油酸的自氧化,抑制作用随浓度的增大而增强.作为天然的抗氧化剂,二色胡枝子黄酮具有一定开发利用价值.     

兰州百合和有斑百合的核型研究

【目的】研究兰州百合及有斑百合的染色体核型。【方法】利用染色体常规压片的方法,对兰州百合和有斑百合的染色体数目及核型进行了研究和分析。【结果】兰州百合的核型公式为2n=2x=24=2m+2sm+6st+14t,相对长度为6.35%～12.07%,核型不对称系数为83.25%,染色体相对差异较大。有斑百合的核型公式为2n=2x=24=4m+12st+8t,相对长度为6.11%～12.90%,核型不对称系数为80.11%。【结论】兰州百合的核型类型属于3A型,有斑百合的核型类型为3B型,以有斑百合核型的进化较高,可见不同居群的百合间核型存在差异。     

美洲棘蓟马体内共生菌Wolbachia的wsp基因分子检测及系统发育分析

【目的】对美洲棘蓟马体内共生菌Wolbachia进行分子生物学鉴定,确定该蓟马体内Wolbachia的进化位置,为进一步探讨Wolbachia对其生殖作用的调控机制提供理论依据。【方法】以wsp基因为目的基因,对美洲棘蓟马体内的共生菌Wolbachia进行特异性扩增和测序,使用Clustal X 1.83软件对所得DNA序列进行比对;在MEGA 4.0软件中采用邻接法对Wolbachia的系统发育关系进行分析。【结果】利用wsp基因的特异性引物从美洲棘蓟马体内扩增出了632 bp的Wolbachia的wsp基因片段(GenBank登录号为JN315668),580 bp的Wolbachia A群的wsp基因片段和405 bp的Mel亚群的wsp基因片段。系统发育分析结果表明,美洲棘蓟马体内的Wolbachia与黑腹果蝇亲缘关系较近。【结论】美洲棘蓟马体内感染的Wolbachia属于A群Mel亚群。     

山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析

通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达, SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T_0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4H cDNA全长1 735 bp,开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性, 2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.     

甘蓝型油菜与黑芥双倍体减数分裂的原位杂交分析

【目的】探明植物杂种后代减数分裂异常与花粉败育之间的关系。【方法】通过甘蓝型油菜与黑芥种间杂交和基因组加倍,获得芸薹属三基因组双倍体,采用基因组原位杂交方法,观察三基因组双倍体花粉母细胞的减数分裂规律。【结果】与单倍体相比,双倍体花粉育性得到一定恢复,但可育花粉的比例较低,只有10%~20%。基因组原位杂交结果显示,双倍体花粉母细胞减数分裂终变期染色体以形成同源二价体为主,但也有部分染色体形成四价体或六价体。四价体有3种形式:B基因组染色体形成的四价体、AC基因组染色体形成的四价体及B与AC基因组之间形成的异配四价体。减数分裂后期Ⅰ染色体均等分离的细胞占总数的70%左右,在第2次减数分裂期也观察到非正常分裂如非四分孢子、微核等现象。【结论】减数分裂过程中的染色体异常行为可能是导致花粉育性不高的重要原因;虽然不正常的减数分裂导致花粉育性下降,但双亲染色体的异源联会可为双亲遗传物质的交换提供条件。     

神经毒素基因RjAa17f在Sf9细胞中的表达及活性分析

【目的】在昆虫草地贪夜蛾细胞(Sf9)中表达一种能专一阻断昆虫钠、钾离子通道的神经毒素基因RjAa17f。【方法】运用杆状病毒真核表达系统表达RjAa17f毒蛋白,并用蛋白质印迹对其进行检测;测定RjAa17f毒蛋白引起健康棉铃虫中肠膜电位的变化,并对其毒力进行测定。【结果】通过重组杆状病毒质粒的转染和Western blot检测验证,神经毒素基因RjAa17f的重组Bacmid已经成功转染到Sf9细胞中,且在Sf9中表达出与预测大小一致的RjAa17f目的蛋白;此毒蛋白作用于棉铃虫中肠3~12h后,中肠膜电位与CK相比差异显著,且随着作用时间的延长,棉铃虫中肠膜电位呈逐步升高的趋势,作用9h以后,升高的幅度逐渐降低,趋于平缓。RjAa17f毒蛋白对棉铃虫的LD50为108.12μg/g。【结论】在Sf9细胞内表达出了有活性的RjAa17f毒蛋白,且该毒蛋白对棉铃虫中肠膜电位有显著改变。     

细粒棘球蚴重组St-Eg 95-Eg.ferritin疫苗构建及生物学特性检测

构建表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的重组口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株并评价其生物学特性。将细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合基因插入到表达载体pYA3341中,构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,将重组质粒分别电转入减毒鼠伤寒沙门菌X3770和X4550,获得重组疫苗菌株St-Eg95-Eg.ferritin,对重组菌的稳定性、生长状态及安全性进行分析。结果表明,经PCR和酶切鉴定成功构建重组质粒pYA3341-Eg95-Eg.ferritin,Western blot检测Eg95-Eg.ferritin蛋白在重组菌中获得表达;生物学特性研究结果表明,重组质粒可稳定存在,且不影响重组菌的生长状态,小鼠口服试验证实,重组菌安全无毒性。成功构建能稳定表达细粒棘球蚴Eg95-Eg.ferritin融合蛋白的口服减毒鼠伤寒沙门菌活载体疫苗株,将为研究包虫病口服基因工程疫苗奠定基础。     

加州新小绥螨对截形叶螨的捕食作用

为明确加州新小绥螨Neoseiulus californicus(McGregor)对截形叶螨Tetranychus truncate(Ehara)的捕食潜力,采用捕食者功能反应方程及参数研究加州新小绥螨对截形叶螨各螨态捕食作用。结果表明,加州新小绥螨对雌成螨、若螨、卵的选择性捕食系数分别为0.365、1.276和1.390。在不同温度条件下,加州新小绥螨对截形叶螨的功能反应均属于HollingⅡ型;对猎物卵和幼若螨的控制能力最强。在试验温度范围内,加州新小绥螨的捕食能力随温度升高呈先增后减趋势,28℃时最强,对截形叶螨雌成螨、若螨和卵的攻击系数(a)最大,分别为0.639、0.730和0.842;处理时间最短,分别为0.126、0.075和0.039d;最大日捕食量分别为7.943头、13.405头和25.575粒。加州新小绥螨的捕食作用存在较强的种内干扰反应,随着捕食者密度的增大,平均捕食量逐渐减少,捕食作用率也相应降低,捕食作用率与其自身密度的关系为E=0.423P-0.747。     

不同木霉菌株对黄瓜枯萎病菌的拮抗作用

比较不同木霉菌株对黄瓜枯萎病菌的竞争作用、重寄生作用、抗生作用和防病作用的差异,筛选出高效菌株,为利用木霉菌防治土传病害提供理论依据。通过与致病菌对峙培养,研究竞争作用。结果表明:供试木霉菌能限制黄瓜枯萎病菌的菌丝扩展,哈茨木霉(Trichoderma harzianum)TH菌株竞争作用最强,菌丝扩展抑制率为67.70%。试验发现木霉菌株能够通过紧贴、缠绕、穿透等方式寄生于黄瓜枯萎病菌的菌丝上,最后引起菌丝断裂,细胞内容物外泄。通过无菌滤膜过滤获得的不同木霉菌代谢产物抗生作用明显,TH菌株代谢产物的抑菌圈直径达到3.9cm,对黄瓜枯萎病菌的菌丝生长和孢子萌发的抑制率分别为57.19%和68.35%。盆栽试验结果显示,育苗时施加木霉菌株不同程度控制苗期黄瓜枯萎病的发生,TH菌株防病作用最强,防效为64.34%,绿色木霉(Trichoderma viride)TV菌株促进黄瓜生长作用最强,地上部分和地下部分鲜质量分别增加42.81%和86.92%。