| 山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析 |
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| 引用本文： | 陈蒙,刘海峰.山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析[J].西南农业大学学报,2019,41(10):11-21. |
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| 作者姓名： | 陈蒙 刘海峰 |
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| 作者单位： | 延边大学农学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31260067）；吉林省教育厅“十三五”科学技术研究规划项目（吉教科合字[2016]第255号）. |
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| 摘 要： | 通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达, SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T_0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4H cDNA全长1 735 bp,开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性, 2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.
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| 关 键 词： | 山葡萄 克隆 C4H基因 原核表达 遗传转化 |
| 收稿时间： | 2018/10/17 0:00:00 |
Cloning Expression and Genetic Transformation Analysis of Vitis amurensis C4H Gene |
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| CHEN Meng,LIU Hai-feng.Cloning Expression and Genetic Transformation Analysis of Vitis amurensis C4H Gene[J].Journal of Southwest Agricultural University,2019,41(10):11-21. |
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| Authors: | CHEN Meng LIU Hai-feng |
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| Institution: | Agricultural College of Yanbian University, Yanji Jilin 133002, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vitis amurensis cloning C4H prokaryotic expression genetic transformation |
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