山葡萄C4H基因的克隆表达及遗传转化分析

通过生物学技术来研究C4H基因在山葡萄着色过程中的作用,进而揭示山葡萄果皮着色的分子机理;利用RT-PCR技术克隆了山葡萄C4H基因的全长cDNA序列,并对该蛋白进行生物信息学分析,预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测C4H基因在山葡萄8个不同转色时期的表达量,将克隆获得的山葡萄C4H基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli BL21(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达, SDS-PAGE检测表达产物.为了验证山葡萄C4H基因的功能,构建了表达载体pC C4H并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化,在含50 mg/L Kan的培养基上对T_0代种子进行筛选.克隆获得的山葡萄C4H cDNA全长1 735 bp,开放阅读框1 518 bp,编码505个氨基酸,该基因表达产物分子质量为57.70 KDa,等电点值9.06.C4H基因在山葡萄果皮转色各个时期均存在表达;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,拟南芥遗传转化先后得到3个阳性幼苗.对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性, 2株叶片颜色均变成紫红色;经花色素苷质量浓度的测定表明其质量浓度比对照组植株高出3倍.在拟南芥中花色素苷质量浓度虽然较低,但还是能少量合成,说明其花色素苷生物合成途径是开通的,只是积累的量较少.     

环境因素对肉牛生产性能的影响

在现代化肉牛养殖产业中,肉牛的生产性能主要受到遗传因素、饲养管理水平和环境管理因素的影响。肉牛养殖场是肉牛生活和生长的主要场所,养殖场的环境直接或间接影响到肉牛的生产性能。不良的饲养环境会导致肉牛的饲料转化率降低、生产力降低甚至还有疾病频发等问题。因此,该研究就环境因素中的光照、空气质量、温湿度、风速和噪音等因素进行阐述。     

民主革命时期中国共产党组织建设的历史启示

中国共产党诞生之后就开始了自己的"治党史",加强党的组织建设,使党从一个只有几十人的小党派发展成中国大陆的执政党。在这一过程中,中共不但善于借鉴别国党的建设经验,而且在组织建设上有很多新的创造,毛泽东思想的形成、重视基层党组织建设等都是我们应该总结的经验。     

虾夷扇贝家系群体遗传结构及其微卫星标记与经济性状相关性的分析研究

为了有效利用微卫星技术分析虾夷扇贝的群体遗传结构并筛选与虾夷扇贝生长相关的标记。采用19个多态性微卫星分子标记对虾夷扇贝一个家系群体进行了遗传多样性分析。结果显示：19个微卫星位点共获得60个等位基因,每个位点的等位基因数(Na)为2~4个,等位基因片段大小为113~312 bp,平均等位基因数为3.26个,平均有效等位基因数(Ne)为3.0175个,观测杂合度(Ho)平均值为0.2952,期望杂合度(He)的平均值为0.6352,平均多态信息含量(PIC)值为0.5671。经卡方Hardy-Weinberg检验(P<0.01)显示多于半数的位点都发生了偏离。运用SPSS 16.0对微卫星标记与虾夷扇贝生长性状的相关性进行分析,结果表明：DQ679223与壳宽显著相关,EF056526与体重、壳长、壳高、壳宽显著相关,DQ221720与体重、壳高、壳宽显著相关,FJ262409与体重显著相关。研究结果表明：虾夷扇贝的群体遗传多样性水平较高,有较高的遗传改良潜力,可以利用筛选的与虾夷扇贝生长相关的标记进行辅助育种,提高育种效率。     

药西瓜(Citrullus colocynthis)UDP-糖基转移酶基因表达分析

以药西瓜为试材,采用连接转化、双酶切等方法,在前期克隆得到的2个药西瓜UDP-糖基转移酶基因UDP-E1、UDP-E2的基础上,将目的基因UDP-E1、UDP-E2与pET28a连接,构建重组质粒pET28a-UDP-E1和pET28a-UDP-E2,将重组质粒转化至E.coli BL21中,经过不同浓度的IPTG诱导,期望出现目的蛋白条带,且上清中的目的蛋白条带较沉淀与对照组明显。结果表明:成功构建原核表达重组质粒,IPTG浓度为1.0 mmol·L~(-1)时,UDP-E1的融合蛋白分子量约为49 kDa,IPTG浓度为0.8 mmol·L~(-1)时,UDP-E2的融合蛋白分子量约为32 kDa,目的蛋白在大肠杆菌BL21中得到了高效表达。     

药西瓜UDP-糖基转移酶基因的克隆与表达分析

为明确药西瓜UDP-糖基转移酶催化葫芦素形成葫芦素配糖体的表达规律,以药西瓜品种"WM9"叶片为供试材料,采用RT-PCR技术克隆药西瓜UDP-糖基转移酶基因,并对编码蛋白进行分析。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR),以ACTIN为内参基因,分析获得的2个药西瓜UDP-糖基转移酶基因在不同组织器官中的表达规律。结果表明:克隆得到2个UDP-糖基转移酶基因,分别为1 546 bp和1 559 bp的cDNA全长序列,命名为UDP-E1和UDP-E2。对扩增获得的序列进行生物学信息分析,确定UDP-E1基因的完整开放阅读框(ORF)为1 314 bp,可编码氨基酸437个,理论分子量为49.02 ku,等电点为5.99,属稳定蛋白,Genbank登录号MK576125。UDP-E2基因的ORF为846 bp,可编码氨基酸281个,理论分子量为32.78 ku,等电点为5.23,属不稳定蛋白,Genbank登录号MK576126。这2个基因属于糖基转移酶超家族。UDP-E1和UDP-E2均与香瓜、黄瓜的UDP-糖基转移酶基因序列相似性最高。在各组织器官中,UDP-糖基转移酶均有表达,且在茎中表达水平最低,叶中表达水平最高。     

山葡萄类黄酮-5-O-葡萄糖基转移酶基因(5GT)的克隆表达及遗传转化分析

为探究5GT基因在山葡萄花色苷合成过程中的表达规律及作用,以山葡萄(Vitis amurensis)为材料,利用RT-PCR技术克隆山葡萄5GT基因的全长cDNA序列(GenBank登录号为GU237133),将该基因命名为Vam5GT并对该蛋白进行生物信息学分析预测其功能;利用实时荧光定量PCR检测Vam5GT基因在山葡萄8个不同转色时期的表达规律,将克隆获得的Vam5GT基因完整的ORF连接到原核表达载体pET28a上,转化到大肠杆菌E.coli Bl2(DE3),并通过不同浓度的IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测表达产物。并构建表达载体pC5GT并转化农杆菌GV3101.用菌液浸泡花序法对拟南芥进行遗传转化。结果显示:克隆获得的Vam5GT cDNA全长1 497 bp,开放阅读框1 347 bp,编码448个氨基酸,该基因表达产物相对分子质量为49.84 ku,等电点为5.23,是不稳定蛋白。该基因属于UDPGT超基因家族,不包含信号肽。Vam5GT在山葡萄花后4周的果皮中表达丰度最高,其他时期表达逐渐下降;该基因原核表达产物与预期大小一致,表明原核表达成功,在含50 mg/L Kanomycin的培养基上对拟南芥T_0代种子进行筛选,先后得到2个阳性幼苗,转化率为0.05%。对移栽成活的2株抗性植株进行PCR检测为阳性。     

山葡萄PAL基因原核表达载体的构建及表达蛋白纯化

山葡萄苯丙胺酸解氨酶（PAL）是苯丙烷途径的关键酶,在果皮着色中能够调控花色苷合成途径。构建PAL基因原核表达重组质粒pET28a-PAL,并对重组蛋白表达条件进行优化,以山葡萄DNA扩增PAL并连接到pMD18-T,筛选得到阳性克隆后连接到pET28a原核表达载体上,重组质粒转化至E.coli BL21后经不同浓度的IPTG、不同诱导温度、不同诱导时间处理,通过DPS设计正交试验优化重组蛋白的表达条件,并将重组蛋白纯化。结果显示,正交试验不同处理下的蛋白表达差异显著（P<0.05）,诱导因素的影响程度从强到弱分别为IPTG浓度、温度和时间。IPTG诱导浓度对其影响最显著（P=0.015<0.05）,且IPTG浓度为0.6 mmol·L^-1,诱导温度为22℃,诱导时间为5 h时,诱导重组蛋白PAL的效果最佳。成功构建其原核表达载体并使其在大肠杆菌中得到高效表达,为探究PAL蛋白的表达提供参考。     

精准扶贫中农村基层组织执行阻力研究

贫困问题一直以来都是中国乃至世界转型发展面临的主要社会问题,目前扶贫脱贫工作已成为当前我党增强执政能力、巩固执政地位的重要任务。作为扶贫脱贫工作的第一环节,农村基层组织的重要性也日渐凸显,当前农村基层组织在推进精准扶贫工作遇到的执行阻力包括选择性执行、机械性执行、形式性执行、威望性执行。针对这些执行阻力,切实加强农村基层组织转型和精英干部培养,打赢精准扶贫工作的路径转变为自下而上的决策和回应与自上而下的引导与规范并行。     

果冻生产有了新行标

由全国食品发酵标准化中心主办深圳市质量技术监督局承办的行业标准QB1432果冻日前通过专家审定果冻是一种用海藻胶为原料制成的胶冻休闲食品我国早在1992年就发布实施了强制性行业标准QB143292水果冻但随着科技的发展和产品的推陈出新果冻行业近10年来发展迅速据不完全统计目前生产果冻的企业已有数百家年产量达二三十万吨果冻产品的花色品种也在日益增加在原料风味和包装方面都有很大改进且趋向于向高品质高营养的方向发展如添加果汁果肉乳粉钙等而原来的行业标准包含的产品品种单一标准的某些内容已不符合当今的市场需求有此指标甚至和…