1株耐药性大肠杆菌烈性嗜菌体的分离与生物学特性分析（英文）

该试验从鸡粪样品中分离到一株耐药性大肠杆菌的烈性噬菌体,用单层琼脂微量点板法测定其嗜菌谱范围,用双层琼脂平板法对其裂解效价、最佳感染复数以及对温度、酸碱度的耐受性进行了测试。结果显示,该噬菌体嗜菌谱范围较广,对另外2株大肠杆菌呈现完全裂解,对1株大肠杆菌呈现弱裂解;对宿主菌的裂解效价为1.20×108PFU/ml,最佳感染复数为1;最适温度为40℃,噬菌体效价能够达到8.90×10~9PFU/ml,在80℃时即失去感染活性;p H值为5~11,噬菌体效价在106~10~9PFU/ml,p H值等于4,12,噬菌体则失去感染活性。     

1株耐药性大肠杆菌烈性嗜菌体的分离与生物学特性分析

该试验从鸡粪样品中分离到一株耐药性大肠杆菌的烈性噬菌体,用单层琼脂微量点板法测定其嗜菌谱范围,用双层琼脂平板法对其裂解效价、最佳感染复数以及对温度、酸碱度的耐受性进行了测试。结果显示,该噬菌体嗜菌谱范围较广,对另外2株大肠杆菌呈现完全裂解,对1株大肠杆菌呈现弱裂解;对宿主菌的裂解效价为1.20×108 PFU/ml,最佳感染复数为1;最适温度为40℃,噬菌体效价能够达到8.90×109 PFU/ml,在80℃时即失去感染活性;pH 值为5～11,噬菌体效价在106～109 PFU/ml,pH值等于4,12,噬菌体则失去感染活性。     

NDM-5阳性大肠杆菌裂解性噬菌体的生物学特性

NDM-5基因是在动物源细菌尤其是鸡源大肠杆菌中主要流行的碳青霉烯类耐药基因,携带该基因的菌株呈现多重耐药性,传播能力强,被称为"超级细菌"。本研究以携带NDM-5基因的鸡源大肠杆菌SQ-C-E5为宿主菌,从污水中分离了对该细菌具有裂解作用的噬菌体,命名为vB_EcoM_Bp5。通过透射电镜观察,最佳感染复数测定,一步生长曲线绘制,杀菌试验,热稳定性及酸碱稳定性测定等试验分析该噬菌体的生物学特性。结果表明,该噬菌体为肌尾病毒科,其噬菌斑透亮,无晕圈,最佳感染复数为10,潜伏期为5 min,爆发期为65 min,该噬菌体在温度为30~60℃和pH为5~10时较稳定,并且噬菌体vB_EcoM_Bp5的裂解谱较广,对多株NDM-5阳性和阴性大肠杆菌都具有裂解作用。因此,噬菌体vB_EcoM_Bp5在防治携带NDM-5基因的大肠杆菌方面具有潜在应用价值。     

一株可裂解耐黏菌素大肠杆菌噬菌体的分离鉴定及全基因组分析

为研究耐黏菌素大肠杆菌的噬菌体治疗方法,本研究以耐黏菌素大肠杆菌为宿主菌,采用双层琼脂平板法从山东烟台某养鸡场污水样中分离纯化得到裂解性噬菌体SDYTW1-F1-2-2。通过透射电镜观察,最佳感染复数,一步生长曲线,温度稳定性,酸碱度稳定性等生物学特性测定,并对其进行全基因组测序分析。结果表明：1）噬菌体SDYTW1-F1-2-2噬菌斑呈现透亮,外周无晕圈,形态学观察显示其具有可伸缩性尾鞘。2）生物学特性分析表明,噬菌体最佳感染复数为0.1,潜伏期为50 min,爆发期为40 min,爆发量为（331±9）PFU/cell。在温度4～40℃,pH为4～12的环境下,噬菌体活性较为稳定。3）通过噬菌体全基因组测序及核酸类型鉴定显示,该噬菌体基因组全长为74 752 bp,双链DNA,GC含量42.1%。在噬菌体基因组中共鉴定出121个编码蛋白（CDS）,包括结构组成、DNA代谢与复制和包装以及细菌裂解相关的功能基因,发现一个tRNA基因,且未检测到如stx-1等致病性基因和mcr-1等耐药基因相关的基因。综上,噬菌体SDYTW1-F1-2-2裂解谱较宽,具有良好的酸碱性、热稳定性以及安全...     

一株绒山羊源大肠杆菌噬菌体φPTK的分离鉴定及生物学特性分析

以从患羔羊痢疾的羔羊粪便中分离的1株大肠杆菌为宿主菌,从污水中分离纯化1株烈性大肠杆菌特异性噬菌体φPTK,并对其生物学特性进行研究,为研制一种替代抗生素的有效生物防治方法提供资源。双层琼脂平板培养后,噬菌斑呈现清晰透明、边缘光滑的圆形,直径2~3 mm。噬菌体φPTK生物学特性试验结果表明:φPTK对大肠杆菌的最佳感染复数为0.000 1;φPTK吸附和感染宿主菌的潜伏期为15 min,裂解期约195 min,裂解量93;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析可以观察到至少6条蛋白质条带,相对分子质量为2.5×10~4~1.8×10~5,说明其蛋白质外壳至少含有6个结构蛋白;在30~90℃范围内φPTK的裂解活性均较强,30~40℃时活性最高,90℃处理90 min后仍然具有较强的活性;对酸碱的耐受力较强,p H值在5至9范围内均有较强的裂解活性,当p H值超过9后活性较低;对紫外线的耐受能力较强,经紫外线照射8 h后仍然具有较强的裂解能力。这株烈性大肠杆菌特异性噬菌体φPTK最佳感染复数较小,吸附和感染宿主菌的潜伏期短,裂解能力强,杀菌效果好,有较强的环境适应能力,具有研发成为有效防治羔羊大肠杆菌病的生物杀菌制剂的潜力。     

宽谱噬菌体NTHP01的生理特征及噬菌作用

针对1株从中华鳖养殖塘中分离得到的宽谱噬菌体NTHP01(保藏号:CGMCC No. 9623),对其感染复数、潜伏期和裂解期、热稳定性、pH稳定性等理化特性展开研究,探讨了氯化镁促噬菌体感染的最佳浓度,并考察了该噬菌体的噬菌谱。结果显示,噬菌体NTHP01的最佳感染复数为0.01,潜伏期和裂解期分别为150、60 min,最适温度为30℃,最适pH值为7,氯化镁终浓度为4 mmol/L时对噬菌体的感染促进作用最佳。此外,结果显示噬菌体NTHP01宿主范围宽,能够有效抑制来自不同水产养殖品种的细菌,包括嗜水气单胞菌、脑膜脓毒性黄杆菌、迟缓爱德华氏菌、副溶血性弧菌、维氏气单胞菌、腐败希瓦菌、温和气单胞菌等。研究结果为噬菌体NTHP01的规模化制备及今后在水产养殖细菌性病害防治中的应用奠定了良好基础。     

溶藻弧菌烈性噬菌体分离鉴定及其抑菌作用研究

溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus, VA)是水产品中普遍存在的人兽共患病原菌。为研制水产品中VA的生物抑菌剂,以溶藻弧菌VAf 211为宿主菌,应用双层平板法从扬州农贸市场的宰鱼污水中分离纯化获得裂解性噬菌体,研究其微观形态、最佳感染复数、一步生长曲线、裂解谱等生物学特征,并在鱼汁模型中测定噬菌体对VA的抑菌效应以及对VA生物被膜形成的影响。结果分离到1株溶藻弧菌烈性噬菌体,将其命名为VAPf211,透射电镜观察显示其形态归属于肌尾噬菌体科,最佳感染复数为0.01,潜伏期约为10 min,裂解期为50 min,平均裂解量为34.80 PFU·细胞~(-1)。温度和pH稳定性试验结果显示VAPf211在温度40～60℃、pH值4.0～9.0范围内活性稳定。抑菌试验结果显示噬菌体VAPf211能显著抑制宿主菌在鱼汁中的增长,并能抑制VA生物被膜的形成。这一研究提示VAPf211具有良好的应用前景,为水产食品中溶藻弧菌的减除提供了新型生物减菌剂。     

1株鸡白痢沙门菌噬菌体的分离鉴定

以鸡白痢沙门菌C79-13为宿主菌,从粪便样品中分离到1株裂解性噬菌体SP17,并对获得的噬菌体进行纯化鉴定及生物学特性研究。结果表明:SP17噬菌斑清晰透亮,空斑直径达到5mm;最佳感染复数为0.01;该长尾噬菌体由正多面体头部(直径约60nm)和无收缩性尾巴(长约110nm)组成,对肠炎沙门菌、鸡白痢沙门菌、德尔卑沙门菌及部分鼠伤寒沙门菌具有良好的裂解能力;生长曲线表明噬菌体SP17的潜伏期为10min,爆发期约为80min,爆发量为80PFU/cell;在温度30～60℃、pH值4～12条件下具有良好的稳定性。这一研究提示噬菌体SP17具有应用于沙门菌防控的前景。     

金黄色葡萄球菌噬菌体生物学特性研究

本研究利用分离自生鲜牛乳样品中的金黄色葡萄球菌作为宿主菌，从污水中分离得到一株噬菌体，命名为RPCSa20091。对其生物学特性研究结果显示，该噬菌体属于微球形有尾目噬菌体；宿主谱较宽，裂解率为81.8%;在40℃条件下噬菌体相对稳定，45℃条件下不生长；pH值在3～10时较稳定，pH值在1～2和11～12时噬菌体完全失活；其最佳感染复数为0.1;潜伏期为15 min,裂解周期为75 min。本研究结果为金黄色葡萄球菌噬菌体用于奶牛乳腺炎的治疗提供了理论基础。     

一种大肠杆菌噬菌体新裂解酶的表达与活性检测

前期分离得到1株具有较强裂解能力的大肠杆菌噬菌体v B_Eco M-ep3。测序后发现,噬菌体v B_Eco M-ep3的裂解酶基因在大肠杆菌噬菌体中尚未报道,能够编码一种新的裂解酶,并与绿脓杆菌噬菌体裂解酶具有很高同源性。为了探讨该裂解酶对大肠杆菌和绿脓杆菌的裂解活性,克隆了v B_Eco M-ep3的裂解酶基因,经原核表达和纯化,体外评价了Lysep3裂解活性。结果表明:克隆裂解酶基因Lysep3长为492 bp;表达蛋白分子质量为17.7 ku;裂解酶单独作用时,对大肠杆菌和绿脓杆菌均不能裂解,但是能够显著抑制生长;与柠檬酸配合使用(0.5 mg/m L终浓度的Lysep3和0.5 mmol/L终浓度的柠檬酸),对大肠杆菌和绿脓杆菌均表现出较好的裂解能力,作用从2~24 h持续有效,细菌数量分别下降7.2倍和17.3倍。该结果表明,v B_Eco Mep3的裂解酶不但在基因序列上与绿脓杆菌存在进化关系,在功能上也具有相关性。该研究为解析裂解酶结构与功能的关系提供了一个良好的例证,同时有助于裂解酶的广谱性改造。     

猕猴桃溃疡病菌噬菌体的初步研究

以丁香假单胞菌猕猴桃致病变种为指示菌,从猕猴桃溃疡病病枝中分离到一株噬菌体,对该噬菌体进行了热稳定性、pH值稳定性、紫外线稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线等生物学特性的测定。结果表明:噬菌体的热稳定性较弱,在65℃下10 min内即可全部失活;在pH值4~9的范围内噬菌体均可稳定存在;紫外线下照射12 min,噬菌体几乎全部失活;噬菌体的最佳感染复数为0.1;感染指示菌的潜伏期约60 min,爆发期约70 min,烈解量为123。这是首次关于猕猴桃溃疡病菌噬菌体的报道。     

沙门氏菌噬菌体裂解酶LysLorf22的制备及溶菌活性分析

根据沙门氏菌噬菌体Lumpael的全基因组序列,预测该噬菌体裂解酶基因并对其进行生物信息学分析;优化其在大肠杆菌表达系统中的表达,并分析噬菌体裂解酶LysLorf22与外膜渗透剂最优组合的溶菌效果。结果表明,裂解酶LysLorf22的相对分子质量为1.76×10~4,等电点为9.14,其较优表达条件为:表达菌株Escherichia coli BL21,37℃诱导4 h。LysLorf22裂解谱较宽,最佳工作浓度为375 nmol/L,在30 min内可使氯仿处理的Salmonella Enteritidis ATCC 13076菌悬液OD_(600)下降0.72;375 nmol/L的LysLorf22与0.5 mmol/L乙二胺四乙酸二钠联用对Salmonella Enteritidis ATCC 13076溶菌效果最佳,在2 h内可使活菌数从1.62×10~9 CFU/ml下降至4.31×10~8 CFU/ml。     

一株沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定与生物学特性研究

以1株多重耐药沙门菌(SA209)为宿主菌,从安阳市某规模化养殖场污水样本中分离出1株沙门菌裂解性噬菌体,命名为SA-1。采用点滴法和双平板法分离、鉴定及纯化了SA-1,并对其效价、最佳感染复数、酸碱稳定性、热稳定性、一步生长曲线等生物学特性进行了研究。结果表明:SA-1的初始效价为1.15×10^{(10 )}PFU/mL;最佳感染复数为0.001;对酸碱的耐受性较强,在pH 3.0～11.0范围内活性稳定;在40～50℃温度内活性稳定;其感染宿主菌的潜伏期为10 min,裂解期为20 min,之后进入稳定期,平均裂解量为108 PFU/cell; SA-1的核酸类型为DNA。     

噬菌体vB＿SalS＿DZ的生物学特性及对鸡沙门氏菌病的疗效

抗药性沙门氏菌的出现,严重影响了抗生素对沙门氏菌病的治疗效果,而噬菌体治疗是一种可能的替代方法。本试验研究了沙门氏菌噬菌体vB_SalS_DZ的基本生物学特性及其对沙门氏菌SM86的治疗效果。噬菌体vB_SalS_DZ的生物学特性分析显示其效价可达109pfu/m L,透射电镜结果显示该噬菌体属于有尾目T4噬菌体。对p H值的适应范围宽,在p H值4~12内能保持较高的裂解活性;该噬菌体的最适p H值在5.0左右。最佳感染复数为10-6,感染宿主菌的潜伏期和爆发期均为60 min;基因组中不携带抗性基因和毒力基因。噬菌体vB_SalS_DZ可以使感染沙门氏菌病的SPF鸡死亡率降低50个百分点,这表明该噬菌体在治疗特定的沙门氏菌感染中具有较大的应用潜能。     

一株产肠毒素大肠杆菌短尾噬菌体分离与鉴定

以产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli, ETEC)K88为宿主菌,从养殖场污水中分离出一株短尾裂解性噬菌体vB_EcoP_E21。该噬菌体可侵染多株大肠杆菌,一般生物学特性分析表明最佳感染复数为0.1,潜伏期和爆发期均为20 min,裂解量为370 PFU·cell-1;对氯仿不敏感,可在40～60℃,pH 4.0～10.0条件下保持较高活性;全基因组测序结果表明其基因组长度为58 536 bp,(G+C)%含量为46.89%,含66个开放阅读框,其中23个为已知编码序列;不含tRNA、溶源基因、毒力因子和抗生素耐药基因;噬菌体终末端酶大亚基和主要衣壳蛋白系统发育树同源性分析结果显示,该大肠杆菌噬菌体与变形杆菌(Proteus)噬菌体P16-2532、PM87、pPM 01和Saba亲缘关系较近,但无法侵染变形杆菌属(Proteus spp.)标准菌株。     

大肠杆菌噬菌体分离及宿主谱研究

噬菌体具有特异性强、无残留、对人畜无感染性、容易筛选获得等独特优势,在无抗养殖趋势下潜力巨大。本研究从鸡场采集粪便样本,从中分离出大肠杆菌,再从粪便样本中分离、纯化出噬菌体,测定纯化后噬菌体的效价,并对噬菌体的噬菌谱进行研究。结果表明:噬菌体可以裂解大肠杆菌;分离到的噬菌体为宽宿主谱噬菌体,但有一定的局限性。     

一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

【目的】分离并纯化出一株裂解性青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)噬菌体,并测定其各项生物学特性,为开发新的抗烟草青枯病制剂提供依据。【方法】取烟草青枯病重病田中健康烟株的根际土壤制成土壤悬浮液,并通过在青枯雷尔氏菌菌液中加入过滤后的土壤悬浮液富集噬菌体,用双层平板法验证噬菌体的存在后挑取单个最大噬菌斑进行反复纯化,直到得到单一清晰的噬菌斑。纯化后的单个噬菌斑加入对数早期的青枯雷尔氏菌菌液中进行增殖培养,将增殖液按常规方法进行噬菌体颗粒浓缩后,取20 μL浓缩液用磷钨酸染色并通过电子显微镜观察噬菌体的形态特征;同时将浓缩液进行SDS-PAGE电泳,观察蛋白条带大小和数量;用λ噬菌体DNA提取试剂盒提取噬菌体增殖液中的噬菌体核酸进行琼脂糖凝胶电泳,确定其基因组片段大小;最后用常规方法测定噬菌体的滴度、最佳感染复数、一步生长曲线,并通过比较加入噬菌体液前后青枯雷尔氏菌菌液的OD₆₀₀值变化测定其对温度、pH、紫外线、氯仿的敏感性。【结果】分离并纯化出了一株裂解性青枯雷尔氏菌噬菌体,命名为∈RS-1, 噬菌斑为圆形,清晰透明,边缘光滑,直径1-2 mm,经电镜观察其形态为蝌蚪状,头部为二十面体的立体对称,直径约为94 nm,并有一带伸缩尾鞘的长尾大约为27 nm×100 nm,按照国际病毒分类委员会分类标准,其属于有尾噬菌体目（Caudovirales）,肌尾噬菌体科(Myoviridae)的裂解性噬菌体,核酸性质为dsDNA;噬菌体浓缩液经SDS-PAGE分析至少可以观察到25条蛋白条带,相对分子质量在10-100 kD,说明其蛋白外壳至少含有25个结构蛋白;将提取的DNA进行琼脂糖凝胶电泳显示其条带大于48 kb,符合肌尾噬菌体科基因组大小范围（31-317 kb）;生物学特性的测定显示该噬菌体对青枯雷尔氏菌的最佳感染复数为0.01;其吸附和感染青枯雷尔氏菌时的潜伏期约为30 min,爆发期约为80 min,裂解量约为156;该噬菌体的裂解活性在28℃时最高,在28-50℃均较强,但在温度超过60℃后活性基本丧失;其对酸碱的耐受力较强,在pH 3-8的范围内均有较强的裂解活性,当pH值超过9后活性开始降低;其对紫外线有一定的耐受能力,经紫外线照射0-9 min后裂解活性依然较强,12 min后活性开始下降,21 min后活性基本丧失;其对氯仿不敏感,5%浓度的氯仿对其活性基本没有影响。【结论】分离到了裂解性的青枯雷尔氏菌噬菌体,属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科,经过测定其各项生物学特性可知其潜伏期较短,裂解能力较强,具有很好的杀菌效果,且其裂解活性持续时间长,并能在不同温度、不同酸碱性的环境内有较强的适应能力,具有开发为抗青枯雷尔氏菌菌剂的潜力。     

一株裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的噬菌体及其生物学特性与全基因组分析

本研究旨在分离能够高效裂解耐药金黄色葡萄球菌的噬菌体,为噬菌体生物制品的研制提供候选材料。以耐氨苄西林金黄色葡萄球菌为宿主菌,用双层平板法分离噬菌体,通过透射电子显微镜观察噬菌体形态,并对其进行生物学特性分析及全基因组测序分析。结果分离得到一株金黄色葡萄球菌噬菌体,效价达2.75×10¹⁰ PFU/mL,命名为SP688。该噬菌体具有长的不收缩尾巴,属长尾噬菌体科,对7株耐氨苄西林金葡菌均有裂解效果,最佳感染复数为1,可在10 h内抑制细菌生长,在温度-20～54℃范围和pH值3～11之间活性稳定,对紫外线敏感。全基因组分析显示,SP688基因组为环状DNA,全长45 499 kb, GC含量为34.1%;预测到64个开放阅读框(ORFs),其中19个(29.69%)被预测功能。该噬菌体是一株新型裂解耐氨苄西林金黄色葡萄球菌的广谱噬菌体,可为噬菌体治疗提供材料。     

噬菌体SYJ4及其对肉鸡痢疾治疗效果的初步探究

为了分离以致病性痢疾志贺菌(Shigella dysenteriae)CMCC(B)51105为宿主菌的烈性噬菌体,并分析其生物学特性及其对患痢疾肉鸡的治疗效果,采用双层平板法从水样中分离纯化获得烈性噬菌体SYJ4,其最佳感染复数(MOI)为0.1,最适感染温度为37℃,最适感染p H范围在6-8;一步生长曲线表明噬菌体SYJ4裂解量约为50,潜伏期约为20 min,裂解期约为120 min;将无菌噬菌体富集液通过灌喂方式作用于由S.dysenteriae CMCC(B)51105导致的出现明显白痢症状的病鸡中并与链霉素治疗效果进行比较,结果表明噬菌体SYJ4对痢疾志贺菌(S.dysenteriae)CMCC(B)51105引起的鸡痢疾具有一定治疗效果,其治疗效果与链霉素相仿,并在控制鸡肠道志贺氏菌群数量上优于链霉素。研究表明对于将噬菌体应用于肉禽细菌性肠道疾病治疗研究具有一定的参考价值。     

1株多重耐药大肠杆菌噬菌体的分离、鉴定、生物学特性及全基因组分析

以多重耐药大肠杆菌F2为宿主菌，从养殖场污水中分离出1株肌尾裂解性噬菌体vB＿EcoM＿F2。该噬菌体可侵染多株大肠杆菌，一般生物学特性分析表明最佳感染复数为1，潜伏期30 min，爆发期90 min，爆发量为101 PFU/cell；对氯仿不敏感，可在40～50℃、pH 4.0～10.0的条件下保持较高活性；全基因组测序结果表明其基因组长为168 241 bp,(G+C)%含量为37.32%，含263个开放阅读框，其中113个为已知功能编码序列，含有2个tRNA；不含溶源基因、毒力因子和抗生素耐药基因；全基因组及终末端酶大亚基系统发育树的同源性分析表明，该大肠杆菌噬菌体vB＿EcoM＿F2与志贺菌噬菌phi25-307亲缘关系较近，但它不能侵染志贺菌属的标准菌株。目前，国际病毒分类委员会（ICTV）及美国国家生物技术信息中心资源（NCBI）已将其归类于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,Tevenvirinae亚科，Mosigvirus属，未分类的Mosigvirus物种（unclassified Mosigvirus），这就将为大肠杆菌病的噬菌体应用及防控奠定基础。