大樱桃病毒病研究进展

综述了近年来国际上李属坏死环斑病毒(PNRSV)、李矮缩病毒(PDV)、苹果褪绿叶斑病毒(A鄄CLSV)、樱桃卷叶病毒(CLRV)、樱桃小果病毒(LChV)、樱桃病毒A(CVA)及伊庇鲁斯樱桃病(EpCV)等几种侵染大樱桃的重要病毒的发生状况、形态、分类地位、基因组、检测技术等研究现状及存在的问题与展望。     

新疆石河子地区设施樱桃病毒病害调查及病原检测

【目的】研究新疆石河子地区设施樱桃病毒病的发生情况,明确病毒种类及带毒率。【方法】对新疆石河子设施樱桃病毒病害进行调查,利用已报道在樱桃上发生的8种病毒特异性引物,对122个设施樱桃疑似病毒病样品进行RT-PCR检测及序列同源性分析。【结果】石河子地区设施樱桃病毒病田间症状主要表现有花叶、卷叶、褪绿黄化、畸形、皱缩等。在样品中扩增出与樱桃病毒A(Cherry virus A,CVA)、李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,PDV)和樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,CGRMV)预期大小一致的目的片段;序列分析表明4种病毒扩增片段与Gen Bank中注册的相应病毒核苷酸和氨基酸序列均具有较高的同源性;其中分离物CVA-SHZ、PNRSV-SHZ、PDV-SHZ和CGRMV-SHZ与Gen Bank中已报道的分离物Ch TA12(KT310083.1)、DJ1-1(JF333586.1)、HSY4-1(HQ539657.1)、ZZ-Ch-13(KC965106.1)对核苷酸同源性分别为99.5%、99.5%、99.0%和99.4%。CVA、PNRSV、PDV和CGRMV的检出率分别为67.3%、61.1%、6.5%、4.9%,受两种及两种以上病毒复合侵染检出率56.5%。【结论】新疆石河子地区设施樱桃病毒病原以CVA和PNRSV为主,且两种病毒复合侵染较为普遍。这是在新疆设施樱桃上检测到CVA、PNRSV、PDV、CGRMV4种病毒。     

海南辣椒、樱桃番茄病毒病调查及病原dot-ELISA鉴定

【目的】调查和鉴定海南省辣椒和樱桃番茄病毒病发生情况和病毒种类,明确病毒病发生为害程度及毒源种类。【方法】2018—2019年,通过5点取样法对海南省10个市县的辣椒和樱桃番茄进行病毒症状类型、发病率和病情指数统计。采集辣椒和樱桃番茄主产区病毒病样本593份,通过斑点酶联免疫吸附法(dot-ELISA)对黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)、烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)、蚕豆萎蔫病毒(Broad bean wilt virus,BBWV)和黄瓜绿斑驳病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)5种病毒进行检测。【结果】辣椒病毒病主要症状是斑驳花叶和矮缩丛枝,发病率在0～75%之间,病情指数在0～25.67之间。樱桃番茄主要症状是皱缩卷曲和斑驳花叶,发病率在7%～98%之间,病情指数在1.67～37.33之间。辣椒病毒总体检出率为37.5%,复合侵染率为2.08%,樱桃番茄病毒总体检出率为20.33%,复合侵染率为0.98%。【结论】病毒病在辣椒和樱桃番茄上普遍发生,研究结果明确了辣椒和樱桃番茄田间发病状况,dot-ELISA检测结果表明CMV和TMV仍是检测的5种病毒中的优势毒源,存在4种类型的复合侵染。     

十堰市中国樱桃贮藏保鲜方法研究

根据十堰市的中国樱桃产业形势,从十堰当地的中国樱桃特征入手,对比了中国樱桃与甜樱桃在贮藏保鲜方面的差别,提出了中国樱桃贮藏保鲜的可行方法,为中国樱桃的保鲜提供指导。     

甜樱桃病毒病的发生及防治

简述了甜樱桃栽培中存在的问题以及病毒病对甜樱桃栽培的影响,介绍了4种在甜樱桃生产中为害比较严重的病毒病害,描述了其在田间的表现症状、传播途径,并提出了樱桃病毒病的主要防治措施。     

山东地区樱桃绿环斑驳病毒(CGRMV)的RT-PCR检测及外壳蛋白基因的克隆

为调查我省甜樱桃感染樱桃绿环斑驳病毒(Cherry Green Ring Mottle Virus,CGRMV)情况,本研究以甜樱桃(Prunus avium L.)品种"红灯"叶片总RNA为模板,根据CGRMV基因组序列设计特异引物,对山东地区37份甜樱桃"红灯"样品进行RT-PCR检测,共检测出19份阳性样品。利用CGRMV外壳蛋白基因序列引物,从阳性植物样本中分离到约800 bp的目的片段,克隆测序,序列分析显示该片段全长807 bp,编码268个氨基酸,与GenBank中已登录的CGRMV分离物的外壳蛋白基因序列一致性为87%～97%,氨基酸序列相似性为95%～99%。该结果表明山东地区甜樱桃生产园中感染CGRMV的病例较为普遍。     

樱桃栽培技术

樱桃为蔷薇科李属樱亚属的植物。生产上作果树栽培的主要种类,有中国樱桃、欧洲甜樱桃（简称甜樱桃）和欧洲酸樱桃（简称酸樱桃）三种。樱桃口感好,深受大家的喜爱,本文就樱桃的栽培技术做以介绍。     

上海地区樱桃丰产栽培技术

樱桃是蔷薇科李属类植物的统称,在我国主要种植的品种为中国樱桃和欧洲甜樱桃。本文介绍了上海地区樱桃丰产栽培技术,包括品种选择、苗木定植、土壤管理、施肥管理、水分管理、树体管理、病虫害防治、采收储运等方面内容,以期为樱桃在上海地区的丰产栽培提供参考。     

浙南樱桃优质丰产栽培关键技术

在落叶果树中，樱桃成熟最早，为“百果之先”，果实色泽鲜艳，鲜嫩多汁，玲珑晶莹，味道鲜美，外观和内在品质皆佳，被誉为“果中珍品”。樱桃属植物有120多种，作为果树栽培的主要有3种，即中国樱桃、欧洲甜樱桃和欧洲酸樱桃。其中，在中国广泛种植的为中国樱桃和欧洲甜樱桃（又称甜樱桃、大樱桃）。[第一段]     

樱桃病毒PNRSV、CGRMV、PDV多重RT-PCR检测方法的建立与应用

采用多重RT-PCR方法,建立可同时检测李属坏死环斑病毒(Prunus necrotic ring spot virus,简称PNRSV)、李矮缩病毒(Prune dwarf virus,简称PDV)、樱桃绿环斑驳病毒(Cherry green ring mottle virus,简称CGRMV)的方法。根据GenBank中PNRSV、PDV、CGRMV的保守基因序列设计特异性引物,并对多重RT-PCR的退火温度、循环数、灵敏度、特异性、dNTPs浓度等因素进行优化,建立能同时检测3种樱桃病毒的多重RT-PCR方法。该方法能同时扩增出PNRSV(675 bp)、CGRMV(363 bp)、PDV(304 bp)特异片段,扩增产物大小与预期相符。测序结果表明,3种病毒的序列与相应参考序列相似性达90%以上。多重RT-PCR反应条件优化结果显示,在退火温度为58℃、35个循环条件下,效果均较为理想;dNTP的浓度对试验结果影响不大,最适的浓度为0.6 mmol/L;灵敏度分析结果显示,最低检测浓度为59.7 ng/μL。应用该方法对新疆石河子地区的樱桃样本进行检测,结果显示,该方法可以准确、快速、灵敏地同时检测单一或复合侵染的3种樱桃病毒。     

3种甜樱桃病毒PNRSV、PDV及LChV-2的多重RT-PCR检测方法的建立与应用

【目的】建立可同时检测李属坏死环斑病毒（Prunus necrotic ringspot virus,PNRSV）、李矮缩病毒（Prune dwarf virus,PDV）、樱桃小果病毒2（Little cherry virus-2,LChV-2）的多重RT-PCR检测方法。【方法】以复合感染3种病毒的甜樱桃病株叶片为材料,采用CTAB法提取样本总RNA,选用随机六聚体引物对植物样本总RNA进行反转录,所得cDNA作为多重RT-PCR的扩增模板。根据GenBank中PNRSV、PDV、LChV-2基因组序列共设计6对特异引物,分别通过单一RT-PCR和多重RT-PCR筛选出可用于同时检测3种甜樱桃病毒的引物组合。对多重RT-PCR的退火温度及循环数进行优化,以筛选出各引物组合的最适扩增条件。分别以单一感染PNRSV、PDV、LChV-2、复合感染3种病毒、单一感染樱桃病毒A（Cherry virus A,CVA）及甜樱桃无毒苗为样本,对多重RT-PCR引物的特异性进行分析。选取复合感染3种病毒的甜樱桃总RNA的反转录产物为初始模板,按照梯度稀释法依次将模板稀释为2、22、23、24、25倍,在相同PCR反应体系及反应条件下分别对各引物组合的灵敏度进行分析。多重RT-PCR的扩增条带经凝胶回收试剂盒回收纯化后连接至pMD18-T vector,克隆测序,以验证多重RT-PCR检测的准确性。并应用该方法对山东泰安地区甜樱桃生产园中间隔栽培的中国樱桃进行检测。【结果】筛选到2个可以应用的引物组合,组合1“PNRSV-S1/A1、PDV-S2/A2、LChV2-S1/A1”可分别特异性地扩增733、467、337 bp的片段。组合2“PNRSV-S1/A1、PDV-S3/A3、LChV2-S1/A1”可分别扩增得到733、265、337 bp的片段。扩增产物大小与预期相符。多重RT-PCR反应条件优化结果显示,在退火温度52℃、35个循环条件下,2个引物组合的检测效果均较为理想。特异性分析结果显示,2个引物组合均能特异性检测其各自的靶病毒。灵敏度分析结果显示,2个引物组合在cDNA的23×稀释液中仍能特异性扩增,但扩增条带的强度稍有差异,其对植物总RNA的反转录产物的最低检测浓度为107.9 ng•μL-1。克隆测序及序列分析表明,2个引物组合对各自靶病毒的检测结果可靠。应用该方法对9个中国樱桃样本进行检测,结果显示,测试样品均至少感染了2种病毒,其中5个样品复合感染了3种病毒,2个样品同时感染PDV和LChV-2,2个样品同时感染PNRSV和LChV-2。【结论】应用建立的多重RT-PCR检测方法可稳定、准确、灵敏的同时检测单一或复合侵染的3种甜樱桃病毒。     

甜樱桃和中国樱桃果实性状的比较

以甜樱桃品种大紫、长把红、红灯和养老及中国樱桃品种泰小红樱为材料,研究果实的可溶性蛋白质含量、可溶性糖含量、单果重、果柄长、纵横径,并进行口感评价。结果表明:甜樱桃不同品种之间,可溶性蛋白质含量没有显著差异,可溶性糖含量存在差异,以养老最高,达14.52%;中国樱桃可溶性蛋白质和可溶性糖含量均显著高于甜樱桃的4个品种。其中,中国樱桃可溶性蛋白质含量是甜樱桃的l.98-3.6倍,可溶性糖含量比甜樱桃高出3.6～4.7个百分点。在果实外观方面,甜樱桃中以红灯单果重最大为8.54g,果柄最短为2.58 cm,果实纵横经比最小为0.77;中国樱桃品种泰小红樱果柄长1.885 cm,显著短于甜樱桃,但单果重最小为1.35 g。口感评价表明,甜樱桃中养老甜酸适中,其他几个品种酸甜,中国樱桃最甜,明显甜于甜樱桃,与可溶性糖含量相符合。果实浸水后裂果情况表明,大紫最先裂果,裂果率最高,长把红次之,红灯最晚裂果,裂果率最低,养老和泰小红樱相近,裂果较晚,裂果率较低。     

甜樱桃DFR基因内含子2和内含子3的多态性

【目的】研究70个甜樱桃品种DFR基因多态性与果皮颜色的相关性。【方法】通过DNA序列分析,以不同果皮颜色的10个甜樱桃品种（Prunus avium L.）为材料,检测DFR基因的多态性。根据多态性出现的位点设计特异引物,通过PCR扩增检测70个甜樱桃品种DFR基因的多态性。【结果】获得甜樱桃DFR基因约1 kb的片段,测序结果用BLAST分析发现,其核苷酸序列与樱桃李（Prunus cerasifera）的核苷酸相似性为80 %,预测的氨基酸序列与已知的甜樱桃（P. avium）DFR氨基酸序列相似性达99 %。该片段由3个外显子和3个内含子组成,2个多态性位点分别在内含子2和内含子3上。在黄色、黄底红晕和红色果皮3个组的70个甜樱桃品种中发现3个单倍型,共5种单倍型组合。通过SAS 9.0软件分析发现,所检测到的DFR基因的等位基因频率在黄底红晕果皮品种组和红色品种果皮组中的分布无显著差异。【结论】本研究在甜樱桃DFR基因座上得到2个差异位点,分别在内含子2和内含子3内,其优势基因频率依次为：0.864和0.679;但未发现DFR基因内含子2和内含子3的多态性与果皮颜色之间存在直接关系。     

避雨栽培对南方甜樱桃生长发育影响研究进展

避雨栽培可提高甜樱桃的产量和品质，尤其是在多雨地区。笔者从生长环境、物候期、营养生长、生殖生长及病虫害五个角度，结合前人的研究分析了避雨栽培对甜樱桃生长发育的影响。并探讨了避雨设施未来的发展前景，以期为南方多雨地区栽培甜樱桃提供一定参考。     

甜樱桃茎尖培养脱毒研究

以甜樱桃(PrunusaviumL.)嫩梢芽为外植体进行了茎尖组培脱毒研究,筛选出的增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L+GA30.5mg/L+AgNO35.0～10.0mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L,丛生芽增殖数达到6个以上;确定良好的生根培养基为1/2MS+IBA0.7mg/L+NAA0.2mg/L+蔗糖20g/L+琼脂7g/L,生根率达75.1%,移栽成活率可达80.5%以上;利用生物学方法对甜樱桃试管苗进行了初步病毒鉴定,结果表明,0.5～0.8mm茎尖培养对苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和李矮缩病毒(PDA)的脱毒率达39.4%和48.1%;0.5mm以下茎尖培养对ACLSV和PDA的脱毒率达75.8%和78.6%,证明甜樱桃试管苗0.5mm以下的小茎尖培养能有效脱除ACLSV和PDA病毒。     

南方樱桃谷种鸭主要流行疫病的调查及分析

为了解樱桃谷种鸭不同生长饲养阶段主要传染病的流行情况,对中国南方地区饲养的不同日龄的樱桃谷种鸭开展了重要病原的感染调查。结果显示,4周龄内的育雏期樱桃谷种鸭主要发生鸭传染性浆膜炎、鸭Ⅰ型病毒性肝炎和鸭大肠杆菌病,5~21周龄的育成期樱桃谷种鸭主要为鸭大肠杆菌、鸭疫里默氏杆菌、鸭圆环病毒感染,鸭霍乱和新城疫也时有发生,产蛋期樱桃谷种鸭主要发生鸭大肠杆菌病,同时还有坦布苏病毒病和鸭圆环病毒感染。可见,近年来中国南方樱桃谷鸭群疫病发生日趋复杂,形势严峻,且不同生长阶段的疫病发生情况不尽相同,为樱桃谷种鸭主要流行疫病的防控提供科学依据。     

南方矮化甜樱桃设施栽培技术

通过引进以"吉塞拉5号"和"吉塞拉6号"为砧木的甜樱桃嫁接苗,经过观察其在南方地区设施栽培条件下的生长习性、物候期等,在园地和设施、品种选择、定植和树形培养、花果期管理、采后管理、越冬管理、灾害防控和病虫害防治方面总结出了一套适合南方地区矮化甜樱桃设施栽培的技术。