慢性阻塞性肺疾病患者外周血中性粒细胞凋亡的研究

目的：研究慢性阻塞性肺疾病(COPD)患者不同病期外周血中性拉细胞(PMN)凋亡及相关基因(bcl-2)的表达。方法：分离外周血中性粒细胞，流式细胞仪分析培养24h PMN凋亡及bcl-2基因表达的情况。结果：COPD患者PMN凋亡率明显低于对照组，bcl—2基因表达上调，急性期组PMN凋亡率又明显低于缓解期组，bcl-2基因表达也明显上调。结论：COPD患者PMN凋亡减少，bcl-2上调。     

白头翁汤对溃疡性结肠炎患者外周血PMN凋亡和IL-6、IL-8的影响

目的探讨白头翁汤对溃疡性结肠炎（UC）患者外周血中性粒细胞（PMN）凋亡和血清白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）的调节作用。方法48例UC患者随机分为白头翁组和西药组,每组24例,分别采用白头翁汤、柳氮磺胺吡啶片治疗,采用流式细胞术检测两组患者治疗前后外周血PMN凋亡;采用双抗体夹心ELISA法测定其治疗前后及25例健康志愿者的血清IL-6、IL-8水平。结果白头翁组治愈、有效、无效的例数为20、3、1例,西药组则分别为15、6、3例,以白头翁组的疗效为优旧扣3．845,P〈0．05）。治疗前,两组患者的血清IL-6、IL-8水平明显高于健康组,PMN凋亡率则明显低于健康组（P〈0．01）。治疗后,两组患者的IL-6、IL-8水平均较治疗前明显降低,外周血PMN的凋亡率明显升高,且均以白头翁组改变得更显著（P〈0．01）。结论白头翁汤治疗UC疗效显著,从免疫角度调节患者PMN凋亡、下调IL-6、IL-8水平可能是其治疗UC的作用机制之一。     

β淀粉样肽25-35对PC细胞p53和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β淀粉样肽25-35（β-amyloidpeptide25-35,Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡和对p53及bcl-2基因表达的影响。方法：采用终浓度分别为0、5、10、20μmol／L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,DNA电泳观察梯状条带(DNA-Ladder),RT-PCR和Western blot检测p53和bcl-基因表达变化。结果：随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,p53基因表达增加,bcl-2基因表达降低。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡可能与上调p53基因,下调bcl-2基因有关。     

外源bcl—2基因和脂质体对鸡卵泡颗粒细胞体外分裂和凋亡的影响

选用正在产蛋的罗曼鸡，取其排序第3的卵泡分离层颗粒层细胞，用含血清培养基培养，并用含脂质体每孔0．0，0．6，1．2，2．4，4．8μL和bcl-2基因重组质粒每孔0．2μg转染卵泡颗粒细胞。用流式细胞术等方法分析转基因后的源代细胞和传代细胞的生长与凋亡情况。结果发现，与未转染组相比，转染后的传代细胞分裂速度较快（P＜0．01）、凋亡比率较低，G2／M＋S期细胞极显著高于对照（P＜0．01），且与脂质体浓度有剂量依赖关系。在转染时间为12h、DNA含量为每孔0．2μg的条件下，脂质体最佳转染浓度为每孔1.2μL。这些结果进一步证明，外源bcl-2基因或脂质体具有促进细胞分裂、抑制细胞凋亡、延长细胞寿命的作用。     

款冬花多糖对肺腺癌A549细胞生长及凋亡的影响

目的观察款冬花多糖对人非小细胞肺癌A549生长及凋亡的影响,探讨其体外的抗肿瘤效应。方法体外培养A549细胞,以不同浓度的款冬花多糖为实验组,并设对照组,CCK8法测细胞增殖抑制效应、荧光倒置显微镜观察药物对细胞凋亡的影响,流式细胞术检测A549细胞中P53和Bcl-2蛋白表达情况。结果不同浓度款冬花多糖作用A549细胞24h增殖抑制明显(P<0.05),其抑制效应具有剂量依赖的特点并可诱导A549细胞凋亡,同时上调p53基因表达、下调bcl-2基因表达(P<0.05)。结论款冬花多糖可抑制A549细胞的生长且增殖抑制效应具有剂量依赖性,并可诱导肿瘤细胞凋亡,其抗肿瘤效应可能与细胞凋亡相关基因表达的调控有关。     

巴西菇多糖对肝癌细胞株凋亡的影响及其机制

目的：研究巴西菇多糖诱导人肝癌细胞株(SMMC—7721)凋亡的作用及机制。方法：采用电镜、DNA电泳、免疫组化法，对SMMC—772l株细胞凋亡以及凋亡抑制基因bcl—2的表达进行检测。结果：SMMC—772l株细胞经巴西菇多糖处理后出现核固缩、膜起泡、凋亡小体形成．琼脂糖凝胶电泳呈现出典型凋亡DNA梯状带．细胞内bcl—2表达较对照组低。结论：巴西菇多糖能诱导SMMC—772l株细胞发生典型凋亡．其抑制细胞内bcl—2的表达，是诱发肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

自控镇痛对剖官产妇泌乳功能及镇痛效果的影响

目的：观察硬膜外麻醉剖宫产产妇术后的自控镇痛泵对产妇泌乳功能及镇痛效果的影响。方法：剖宫产妇262例随机分为研究组(硬膜外麻醉留置自控镇痛泵)及对照组(肌注盐酸哌替啶)．研究自控镇痛对术后产妇泌乳功能及镇痛效果的影响。结果：研究组24h内哺乳次数明显多于对照组(P＜0．01)；术后镇痛效果两组差异有显著性(P＜0．05--0．01)。结论：剖宫产术片应用自控镇痛泵能促进乳汁分泌、产生良好的镇痛作用。     

外周神经阻滞在老年人下肢手术中的应用

目的：观察外周神经阻滞在老年人下肢手术的应用效果。方法：40例拟行单侧下肢手术的老年患者．随机分成A、B两组．每组20倒．A组采用外周神经刺激器（PNS）定位行腰丛复合坐骨神经阻滞；B蛆为对照组．行蛛网膜下腔阻滞．比较两组患者麻醉前及麻醉后5、10、20、30、60min的心率（HR）、收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、脉搏血氧饱和度（SPO2）以及感觉／运动神经阻滞起效及维持时间、术后不良反应情况等指标。结果：A、B两组患者阻滞效果相同，感觉／运动阻滞起效时间两组问差异无显著性．A组感觉／运动维持时间长于B组（P〈0．01）；B组患者麻醉后5、10、20、30、60min的SBP、DBP同麻醉前比降低明显（P〈0．01或0．05）；术后不良反应A组少于B组（P〈0．01）。结论：外周神经阻滞对血流动力学影响小．麻醉起效时间迅速．作用完善．镇痛时间长．术后并发症少．是老年人下肢手术较理想的麻醉方法。     

依达拉奉预处理对大鼠脑缺血再灌注海马组织Hsp-70表达及细胞凋亡的影响

目的：观察依达拉奉预处理对脑缺血再灌注后海马组织细胞凋亡及热休克蛋白-70（Hsp-70）表达的影响。方法：健康雄性SD大鼠45只随机分为假手术组、生理盐水对照组、依达拉奉预处理组,每组15只。采用线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,脑缺血再灌注前12h,预处理组腹腔注射依达拉奉3mg／kg,对照组给予等量生理盐水。脑缺血再灌注24h后断头取脑,应用免疫组织化学法及原位细胞凋亡检测脑缺血再灌注海马组织凋亡细胞及HSP-70表达情况。结果：与假手术组比较,依达拉奉预处理组术后24h原位末端标记（TUNEL）、HSP-70阳性细胞明显增加,差异有统计学意义（P〈0．01）;与对照组比较,依达拉奉预处理组术后24h TUNEL阳性细胞明显减少（P〈0．01）;依达拉奉预处理组术后24h HSP-70阳性细胞数较对照组明显增加（P〈0．01）。结论：凋亡机制参与了脑缺血再灌注后继发性损伤的过程;依达拉奉可能通过上调HSP-70蛋白表达,减轻脑缺血再灌注后的细胞凋亡,增强脑缺血再灌注损伤应激耐受性保护,对神经损伤起保护作用。     

异丙酚加小剂量氯胺酮用于人工流产术麻醉的观察

目的：观察异丙酚加小剂量氯胺酮用于人工流产术的麻醉效果及对呼吸、循环的影响。方法：自愿终止妊娠的孕42—77d孕妇100例，随机分为A、B两组，每组50例。A组麻醉用异丙酚1mg/kg加氯胺酮0．5mg/kg，B组麻醉用异丙酚2．5mg/kg，于40--60s内静注诱导，术中视患者反应分次追加异丙酚20--30mg。结果：两组麻醉优秀率(A组98％，B组82％)比较差异有显著性(P＜0．01)。B组诱导后2min平均动脉压(MAP)、脉搏血氧饱和度(SPO2)明显下降，心率(HR)、呼吸(RR)减慢(P＜0．01)；与诱导前比较，A组差异无显著性。结论：异丙酚加小剂量氯胺酮用于人工流产术麻醉效果好，对呼吸、循环干扰小，麻醉苏醒平稳。     

不同麻醉方法对胸部手术应激反应的影响

目的:观察不同麻醉方法对胸部手术患者应激激素的影响。方法:42例肺癌手术患者随机分为全麻复合硬膜外腔阻滞(GEA)组和全麻(GA)组,每组21例,分别测定麻醉诱导前、手术2h、术毕、术后1d的血浆去甲肾上腺素、肾上腺素、内皮素、C-反应蛋白、皮质醇的水平。结果:GEA组的血浆去甲肾上腺素、内皮素和血清皮质醇,术中、术后差异无显著性(P>0.05),与GA组比较差异有非常显著性(P<0.01)。两组血浆肾上腺素,术中、术后差异均无显著性(P>0.05)。两组血清C-反应蛋白,术中、术后均显著升高(P<0.01),组间比较差异无显著性。结论:硬膜外腔阻滞可以减轻胸部手术的应激反应。     

Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞的影响

目的：探讨阳离子脂质体Lipofectin对bcl-xL反义寡核苷酸进入CNE－2Z细胞的影响。方法：采用阳离子脂质体Lipofectin介导bcl-xL反义寡核苷酸转染CNE－2Z细胞，应用MTT法观察Lipofectin介导前后对CNE－2Z增殖的影响；RT－PCR检测处理前后bcl-xL mRNA表达水平。结果：Lipofectin介导bcl-xl反义核酸可提高反义核酸对细胞的增殖抑制率；Lipofectin介导bcl-xL反义核酸可增强反义核酸下调bcl-xL mRNA表达水平的能力。结论：Lipofectin可促进反义核酸转染进入细胞。     

bcl-x基因在两株鼻咽癌细胞中的转录和表达

目的：研究细胞凋亡相关基因bcl-x在人鼻咽癌高分化上皮细胞株CNE-1和低分化上皮细胞株CNE-2Z中的转录和表达。方法：分别抽提两种细胞的总RNA，通过逆转录PCR(RT-PCR)检测bcl-x基因的转录；同时制备两种细胞的蛋白质样品。经免疫印迹检测bcl-x基因的表达。结果：在两株鼻咽癌细胞中均检测到bcl-xL的转录和表达。但没有bcl-xs的表达。结论：bcl-xL在人鼻咽癌高、低分化上皮细胞株中均有表达。但表达量没有明显差异提示其表达可能与细胞分化程度无关。     

自拟抑癌汤联合辅助化疗对胃癌术后血清肿瘤标志物、凋亡相关因子表达水平和T淋巴细胞亚群的影响

目的 探讨自拟抑癌汤联合辅助化疗对胃癌术后血清肿瘤标志物、凋亡相关因子表达水平和T淋巴细胞亚群的影响。方法 收集常州市中医医院2014年10月-2016年9月收治的60例行手术治疗的胃癌患者为对象,采用随机数字表法将其分为对照组及干预组各30例,对照组患者术后实施常规辅助化疗方案治疗,干预组在对照组基础上另联合自拟抑癌汤治疗。观察治疗前后2组血清肿瘤标志物[糖类抗原125（CA125）、糖类抗原199（CA199）、癌胚抗原（CEA）、组织多肽特异性抗原（TPS）]、凋亡相关因子[胃癌细胞原癌蛋白（Bax）、凋亡调控基因蛋白（Bcl-2）]、T淋巴细胞亚群（CD₃、CD₄、CD₈）、生活质量[卡氏评分量表（KPS）]的变化及毒副反应发生率。结果 治疗前2组CA125、CA199、CEA、TPS、Bax、Bcl-2、CD₃、CD₄、CD₈、KPS评分相较无明显差异（P>0.05）;治疗后2组CA125、CA199、CEA、TPS、Bcl-2较治疗前明显降低（P<0.05）,Bax、CD₃、CD₄、CD₈、KPS评分明显升高（P<0.05）,而干预组的各项指标变化较对照组明显,差异有统计学意义（P<0.05）;且干预组毒副反应总发生率明显低于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 自拟抑癌汤联合辅助化疗应用于胃癌术后患者,可有效调节机体血清肿瘤标志物、凋亡相关因子及T淋巴细胞亚群表达,明显提高患者生活质量,且毒副反应更少,适于推广应用。     

甲状腺肿瘤中p53、bcl-2及c-myc蛋白的表达

目的 :探讨p5 3、bcl 2和c myc蛋白在甲状腺肿瘤中的表达意义。 方法 :应用免疫组化EnvisionTM法对 73例甲状腺肿瘤中 p5 3、bcl 2和c myc蛋白的表达进行检测。 结果 :3 6例腺瘤中 p5 3、bcl 2和c myc蛋白的阳性表达率分别为 :0 0 %( 0 / 3 6)、88.6%( 3 2 / 3 6)和 5 0 .0 %( 18/ 3 6) ;3 7例腺癌则分别为 :2 1.6%( 8/ 3 7)、64 .9%( 2 4/ 3 7)和 89.2 %( 3 3 / 3 7) ;p5 3、bcl 2、c myc蛋白分别在 3 6例腺瘤与 3 7例腺癌之间比较差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。p5 3蛋白阳性表达的腺癌 8例 ,其bc1 2及c myc蛋白阳性表达率分别为 75 .0 %( 6/ 8)和 10 0 %( 8/ 8) ,在腺癌中 p5 3蛋白表达与bcl 2蛋白表达仅呈低度正相关 (r =0 .3 5 1,P <0 .0 5 )。 5例淋巴结转移性甲状腺癌中p5 3蛋白阳性表达率为 60 0 %( 3 / 5 ) ,但均无bc1 2蛋白阳性表达。结论 :p5 3、bcl 2及c myc蛋白可能共同参与甲状腺癌的发生发展 ;检测 p5 3蛋白有助于甲状腺良恶性肿瘤的鉴别     

电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注大鼠GRP78和Caspase-12基因表达的影响

目的 观察电针内关、百会穴对脑缺血/再灌注（Ischemia/Reperfusion,I/R）大鼠脑GRP78和Caspase-12基因表达的影响,探讨针刺发挥脑保护作用是否与内质网应激凋亡通路有关。方法 100只大鼠随机分为5组,每组20只,即正常组、假手术组、手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）脑I/R模型。采用TUNEL染色法,检测大鼠神经细胞凋亡指数;采用实时定量多聚酶链式反应（Real-Time polymerase chain reaction,RT-PCR）,检测GRP78、Caspase-12 mRNA表达。结果 与正常组和假手术组相比,手术造模组、依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数升高,GRP78和Caspase-12 mRNA表达增多,差异具有统计学意义（P<0.05或P<0.01）;与手术造模组相比,依达拉奉组和针刺干预组大鼠细胞凋亡指数和Caspase-12 mRNA表达均明显降低（P<0.01）,GRP78 mRNA表达明显升高（P<0.01）;与依达拉奉组相比,针刺干预组大鼠各项指标差异无统计学意义（P>0.05）。结论 针刺内关、百会穴可以有效抑制脑缺血神经元细胞凋亡,其保护机制可能上调内质网应激保护性GRP78表达,同时抑制促凋亡Caspase-12表达有关。     

鸡TIGAR基因真核表达质粒的构建及其抗凋亡功能评价

【背景】 TP53诱导的糖酵解和凋亡调节因子（TP53-induced glycolysis and apoptosis regulator,TIGAR）是p53下游的靶基因,具有调节糖酵解水平和去除活性氧（Reactive oxygen species,ROS）并降低由活性氧诱发的细胞凋亡水平。【目的】 构建鸡源TIGAR基因的真核表达质粒,并检测TIGAR基因在DF1细胞中的抗凋亡作用,为建立稳定表达鸡TIGAR基因的细胞系做准备。【方法】根据GenBank（登录号：XM_417232.6）中预测基因设计引物,利用RT-PCR的方法从SPF鸡脾脏中扩增鸡TIGAR基因,将扩增产物克隆至载体（Flag-CMV14）后送公司测序验证;随后构建进化树对鸡TIGAR基因与其他哺乳动物及水生动物的TIGAR基因进行同源性分析。将重组质粒（Flag-TIGAR）转染入DF1细胞24 h后,使用新城疫病毒诱导细胞凋亡,利用Western Blot检测重组质粒表达情况以及Poly ADP-Ribose Polymerase（PARP）裂解情况。此外还将重组质粒（Flag-TIGAR）转染入DF1细胞,并于收样前2 h使用Staurosporine刺激细胞发生凋亡,分别在转染后24、48 h收集样品,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。【结果】 RT-PCR扩增TIGAR基因,在843 bp处出现目的条带与预测相符,构建的TIGAR真核表达质粒（Flag-TIGAR）经测序,结果显示其序列与GenBank上预测的基本一致。Western Blot结果显示在30 h、36 h收集的样品中PARP均被裂解且转染重组质粒（Flag-TIGAR）的实验组与未转染质粒（MOCK）组或转染空载体（Flag-CMV14）组的样品相比,裂解的PARP表达量明显降低,且差异极显著（P<0.01）。流式结果显示：24 h 检测转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为11%（早期凋亡7.8%,晚期凋亡3.2%）,而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率仅为4%（早期凋亡3.7%,晚期凋亡0.3%）,转染Flag-CMV14的早期凋亡率和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR组,且差异显著（P<0.05）。48 h转染Flag-CMV14后细胞总凋亡率为20.3%（早期凋亡14.3%,晚期凋亡6.0%）,而转染Flag-TIGAR后细胞总凋亡率为6.4%（早期凋亡4.8%,晚期凋亡1.6%）,转染Flag-CMV14组的细胞早期凋亡和晚期凋亡率均高于转染Flag-TIGAR的组,且差异极显著（P<0.01）。【结论】成功扩增出鸡TIGAR基因,并构建了其真核表达质粒,通过Western Blot和流式实验均证实过表达TIGAR后可降低细胞的凋亡程度并有利于细胞存活。     

右美托咪定复合舒芬太尼用于老年患者术后自控静脉镇痛的效果观察

目的观察盐酸右美托咪定复合舒芬太尼用于老年患者术后自控静脉镇痛（PCIA）的有效性和安全性．方法所有患者手术均采用咪达唑仑、顺式阿曲库铵、丙泊酚、芬太尼行麻醉诱导,顺式阿曲库铵、芬太尼与丙泊酚维持麻醉,术后患者随机分为A,B,C3组,使用PCA泵镇痛;分别记录苏醒后（T0）,术后4h（T1）,8h（T2）,12h（T3）,24h（T4）VAS评分;Ramsay镇静评分;术后不同时点PCA按压次数;24h舒芬太尼累计用量;镇痛期间低血压等不良反应的发生情况．结果术后24h内VAS评分A,B组高于C组（P〈0．05）;Ramsay镇静评分：A,B组低于C组（P〈0．05）;24h镇痛泵的总按压次数A组高于B组（P〈0．05）,B组高于c组（P〈0．05）;与术前相比,A组术后血压、心率变化不明显,而B,C两组术后血压、心率下降（P〈0．05）;3组患者术后均无呼吸抑制和镇静过度等不良反应（P〉0．05）,恶心的不良反应发生率B,C组明显少于A组（P〈0．05）．结论盐酸右美托咪定复合舒芬太尼用于老年患者术后自控静脉镇痛安全、有效．