6个月季品种的自交亲和性

以云粉、云玫、蜜糖、蜜月、云艳、粉妆等6个月季品种为材料,采用离体培养与活体萌发法测定花粉生活力,统计分析田间自花授粉坐果率、平均种子数,并对授粉后花粉原位萌发及花粉管的生长过程进行荧光显微观察.结果表明,在活体和离体培养条件下,每个月季品种的花粉萌发率基本一致;云粉的离体和活体萌发率均最高,分别为(33.34±1.7...     

三聚氰胺及其与三聚氰酸联合攻毒对Vero细胞的毒害作用研究

为补充三聚氰胺的毒理学资料,以易于生长的传代细胞为研究对象,采用形态学观察、MTT法、中性红法等,检测三聚氰胺及其与三聚氰酸混合物对体外培养的Vero细胞的影响。结果表明:不同浓度三聚氰胺及其与三聚氰胺混合物对Vero细胞均会产生一定影响:圆缩细胞增多,贴壁细胞数量减少,且呈现出一定的浓度依赖性。混合组还表现出不规则细胞形态增多。三聚氰胺浓度超过0.75mg·mL-1时会极显著抑制细胞的增殖(p0.01),细胞毒性级为1级;而二者混合攻毒时毒性明显增强,浓度超过0.094mg·mL-1时会显著或极显著抑制细胞的增殖(p0.05或p0.01),细胞毒性级为2级。同时,该类化合物对蛋白质的合成没有明显的影响,但三聚氰胺及其混合物,均会干扰Vero细胞对中性红的摄取率,由此推测该类化合物对细胞的溶酶体可能会产生一定的损伤。三聚氰胺及其混合物对Vero细胞均会产生一定毒性。     

氧氟沙星与Cu2+复合物对非洲绿猴肾细胞(Vero)的毒性效应

抗生素氧氟沙星(Ofloxacin,OFL)与重金属铜离子(Cu~(2+))复合污染对离体培养的非洲绿猴肾细胞(Vero)的生长抑制作用及毒性效应,是值得关注的热点问题。通过模拟试验,研究了抗生素OFL与Cu~(2+)及其复合物对非洲绿猴肾活体细胞(Vero)的毒性效应。在正常体细胞环境下培养非洲绿猴肾细胞(Vero)3 d,加入OFL浓度为0.63、1.25、2.5、5、10 mg·L~(-1),加入Cu~(2+)浓度为2.75、6.88mg·L~(-1),反应24 h,并通过MTT法检测OFL与Cu~(2+)及其复合物对非洲绿猴肾细胞生长的抑制率。结果表明:OFL与Cu~(2+)及其复合物会导致细胞形态变化,细胞破碎,贴壁率降低。随着Cu~(2+)浓度增加,Vero细胞生长抑制率逐渐上升;OFL对Vero细胞生长有显著的影响。在2.75 mg·L~(-1)Cu~(2+)浓度时,OFL与Cu~(2+)的复合物对细胞的抑制率在30%到36%之间;当OFL浓度为2.5、5、10 mg·L~(-1)时,OFL与Cu~(2+)的复合物对细胞的抑制率与OFL、Cu~(2+)单一抑制率之和有显著差异,但随OFL浓度的变化没有显著差异;在6.88 mg·L~(-1)Cu~(2+)浓度处理时,OFL浓度为1.25、2.5 mg·L~(-1)时,OFL与Cu~(2+)复合物对细胞抑制率的实测值与OFL、Cu~(2+)单一抑制率之和之间没有显著差异;而当OFL浓度为0.63、5、10 mg·L~(-1)时,OFL与Cu~(2+)的复合物对细胞抑制率的实测值显著低于OFL、Cu~(2+)单一抑制率之和;OFL与Cu~(2+)的复合物对细胞的抑制率随着OFL浓度的增加而增加。OFL与Cu~(2+)的复合物会对Vero细胞产生毒性效应,并表现为抑制细胞生长,对细胞产生了复合污染;OFL与Cu~(2+)的复合物对细胞生长的抑制率小于OFL与Cu~(2+)单一对细胞生长抑制率之和,OFL与Cu~(2+)对细胞生长的毒性具有拮抗作用。     

孕早期家兔子宫内膜细胞的分离培养与形态观察

为探讨子宫内膜细胞的分离与体外培养条件、生长特点及其增殖过程,采用不同消化方法进行了孕早期家兔子宫内膜细胞的消化和分离培养试验。结果表明,多数情况下采用胰蛋白酶消化获得的细胞数量少且活率低于60%,而采用1g/L胶原酶 型消化获得的细胞数量多达1×106/cm3,且活率大于90%。经74μm(200目)滤网过滤分离培养出多角形和梭形2种形态的基质细胞及铺路石状的腺上皮细胞,并均能在体外培养和传代。     

Marc-145细胞无血清培养驯化、代谢分析及PRRSV增殖能力比较

采用逐步降低培养液中血清用量的方法对Marc-145细胞进行无血清培养驯化并考察其生长代谢、增殖PRRSV(猪繁殖及呼吸综合征病毒)的能力.结果表明,通过在细胞对数生长期更换低浓度血清的培养液或传代操作,Marc-145细胞可完全适应含5％新生牛血清的营养条件,经3次传代后,Marc-145细胞可营正常贴壁生长.然而在1％新生牛血清的营养条件下,初次培养于该条件的Marc-145细胞伪足不伸展,贴壁时间明显延长.经过在该1％血清浓度下10次传代后,Marc-145细胞可贴壁生长,维持较高的存活率,但贴壁较松.由此Marc-145细胞进一步驯化适应无血清悬浮培养条件,筛选获得能够在无血清条件下悬浮生长的Marc-145细胞,且生长状态良好.比较在不同血清浓度及不同培养方式下生长的Marc-145细胞增殖PRRSV的能力,无血清条件下悬浮生长的Marc-145细胞对PRRSV的增殖性能没有改变.     

人心果花粉育性的研究

为进一步探讨人心果落花落果严重、座果率低的问题,利用TTC染色法、固体培养基法及苯胺兰染色法对人心果花粉活力、花粉在离体和活体状态的萌发率进行检测分析。人心果不同地方类型花粉活力存在较大差异,随着花的开放,花粉活力逐渐减小,开放期的花粉活力高于60%;离体培养条件下,人心果花粉萌发率总体较低,约10%左右;而在活体状态,即授粉后花粉能在柱头上大量萌发,萌发率超过了50%,且能正常生长至花柱内部。结果表明:花粉育性并不是造成人心果落花落果的主要原因。     

青霉菌对活性染料废水的脱色效果

研究了青霉菌BX1生长菌俸对2种活性染料废永的脱色效果.结果表明,青霉菌对2种活性染料母液废水均表现出较强的吸附脱色性能,绿色染料母液废水在5倍或更高倍数稀释条件下,染料废水的脱色率显著提高,96h脱色率为95％.红色染料母液废水在5倍稀释条件下,脱色率达到64.56％,96h脱色率高达96.82％.青霉菌生长菌体的脱色效果明显优于静止活体.     

鸡传染性法氏囊病毒在DF-1细胞系上繁殖特性研究

对鸡传染性法氏囊病毒(IBDV) HQ株在DF-1细胞上的适应及增殖条件进行了研究,结果表明,HQ株不适应在Vero细胞上生长,而在DF-1细胞上能够很好的适应.经培养条件优化,最终选用pH值为7.0,血清含量体积分数为2％的DMEM/F12培养基做维持液,在细胞传代后第2天接种IBDV HQ株,接毒量为1％(约0.7...     

桃花粉萌发条件筛选及14个桃品种的生活力比较

以桃花粉为试材,通过培养基组分、培养温度、时间及贮藏时间等对花粉萌发率和花粉管生长的影响研究,以期筛选出有利于桃花粉萌发的培养条件,并采用筛选出的最适萌发条件培养14种桃花粉,为花粉贮藏和田间杂交育种亲本的选择提供数据支持。结果表明:培养基组分、培养温度与时间、贮藏时间对花粉的萌发率及花粉管长度均有影响;将花粉采集干燥后,在25℃、10%蔗糖和0.1%硼酸的条件下暗培养3h,有利于花粉萌发及花粉管生长;花粉在-20℃下保存不宜太久,且相同条件下不同桃品种花粉萌发力差异较大。     

老瓜头悬浮细胞培养及其生长特性的研究

以老瓜头嫩茎为材料诱导出愈伤组织,在光照和黑暗条件下进行愈伤细胞的悬浮培养,每隔2 d取样测定相关的生理生化指标.结果表明,老瓜头悬浮细胞的生长曲线呈"S"形,在黑暗条件下生长周期为18 d,弱光条件下24 d,说明黑暗有利于老瓜头细胞生长;在细胞悬浮培养过程中,不同培养条件下,细胞培养液pH值的变化趋势相似,即先下降后上升;老瓜头细胞中可溶性蛋白质的含量变化与细胞生长呈负相关,过氧化物酶活性与细胞生长活力的变化呈正相关.     

Study on Propagation of Chicken Infectious Bursal Disease Virus on Vero Cells Using Microcarriers in Fermentor

It was in flask optimization tests proved that 2% serum, pH 7.0, 5:10 000 inoculation concentration of infectious bursal disease virus (IBDV) and 108 hours cultivation for IBDV harvest after its inoculation were the optimal conditions when IBDV was propagated on Vero cells. 250 mi self-made spinner bottle and 5 L stirring fermentor tests proved that IBDV could maintain higher titers for a long time and the highest titers of IBDV in a spinner bottle and a fermentor were 8. 875 and 8.58 ( - lgTCID50/0.1 ml) respectively when IBDV was proliferated on Vero cells using 2 g/L microcarriers in a spinner bottle and a fermentor and was cultivated under the optimum conditions obtained from flask tests after Vero cells had developed a confluent monolayer on microcarriers, which were at least one titer higher than the highest titer in the traditional rolling bottle. All these results suggested that this technology could be applied to large scale production for IBDV.     

稳定表达犬信号淋巴细胞激活因子基因细胞株的建立与鉴定

[目的]构建稳定表达犬瘟热病毒细胞受体———犬信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的非洲绿猴肾细胞株(Vero)。[方法]采用RT-PCR方法从犬外周血淋巴细胞中扩增出SLAM基因,将其克隆到哺乳动物真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1/SLAM。采用脂质体将pcDNA3.1/SLAM转染到Vero细胞中,利用G418加压筛选和纯化培养获得稳定表达SLAM的重组Vero细胞株。应用RT-PCR和间接免疫荧光试验检测SLAM的表达。[结果]重组蛋白SLAM在Vero细胞中获得表达,并且在不同代次的阳性细胞株中均能稳定表达目的蛋白。[结论]该研究建立了稳定表达犬SLAM的细胞株Vero/SLAM,为犬瘟热病毒的分离和生物学特性研究提供了平台。     

猪圆环病毒2型ORF2基因在PcDNA3.1中的表达效果

[目的]构建猪圆环病毒2型(Porcine circovirus 2,PCV2)ORF2 DNA核酸疫苗,并评价其免疫效果和安全性.[方法]设计一对特异性引物,扩增PCV2-ORF2,利用T载体对其进行克隆,与真核表达载体PcDNA3.1在同等条件下进行双酶切,并进行连接,转化感受态细菌DH5a并克隆,经双酶切鉴定筛选...     

萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因,将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2,高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌,并直接转染Vero细胞,提取细胞总DNA,DIG标记探针可检测到阳性杂交信号.用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验,可检测到特异性黄绿色荧光.SDS-PAGE和Western blotting可检测到18.5 kD和14.5 kD的蛋白条带.表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2,且表达产物具有免疫反应性,为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据.     

犬瘟热病毒单克隆抗体的制备及特性鉴定

用纯化的犬瘟热病毒免疫Balb/C小鼠,采用问接ELJSA方法筛选分泌阳性抗体的杂交瘤细胞株,挑选阳性孔进行亚克隆,用Vero细胞交叉反应试验及间接免疫荧光试验检测单抗的特异性.结果获得6株能稳定分泌抗犬瘟热病毒的单克隆抗体细胞株,分别命名为AD7、AE2、CE3、EH5、GG6和GF1.交叉反应试验及间接免疫荧光染色检测表明,6株单抗的特异性良好;经过体外连续传代及反复冻存、复苏,杂交瘤细胞均能稳定分泌特异性单抗.培养上清液及小鼠腹水ELISA效价分别为26～211和104～107.相加试验表明:单抗AE2、CE3、GG6和GF1具有共同的表位,而单抗AD7和EH5识别的位点与其他4株不同.     

人参水溶性蛋白对Vero细胞增殖影响的研究

采用MTT法测定不同浓度人参水溶性蛋白对非洲绿猴肾细胞(Vero)增殖的影响。研究表明,人参水溶性蛋白对Vero细胞增殖具有抑制作用(P<0.001)。     

应用缺口末端标记法(TUNEL)分析犬瘟热病毒(CDV)诱导的细胞凋亡

利用犬瘟热病毒弱毒标准株ＯＰ－ＣＤＶ感染敏感细胞系非洲绿猴肾细胞,应用缺口末端标记法分析感染细胞的凋亡。结果在感染后４８ｈ的Ｖｅｒｏ细胞中检出了凋亡阳性细胞,而对照细胞内未检测到凋亡细胞,感染后２４ｈ的细胞尚未出现细胞病变,这一时期的细胞内也未检测到凋亡细胞,表明ＣＤＶ能诱导细胞凋亡,且凋亡细胞的检出时间与细胞病变的出现时间呈正向相关。     

人参水溶性蛋白对几种细胞增殖的影响

采用缓冲液抽提及硫酸铵分级沉淀法制备人参水溶性蛋白,以MTT法检测其对非洲绿猴肾细胞Vero、小鼠成纤维细胞L929及人胚肺二倍体细胞2BS增殖的影响.结果表明:人参水溶性蛋白对Vero细胞增殖具有明显的抑制作用;在低浓度时,对L929细胞增殖具有一定促进作用,其中1μg/mL促进作用最明显(P＜0.001),但当蛋白质浓度达到500μg/mL时,则具有抑制作用(P＜0.01);对2BS细胞增殖无明显影响.     

PoprL启动子对丁香假单胞菌DC3000合成冠菌素的影响

冠菌素（coronatine, COR）是由多种丁香假单胞菌致病变种产生的次生代谢产物，是一种新型植物生长调节剂。为了提高菌株冠菌素产量并优化发酵培养条件，将来源于假单胞菌肽聚糖脂蛋白编码基因oprL高效表达组成型启动子PoprL，通过质粒pUCP24/recTE同源重组到丁香假单胞菌DC3000冠菌素合成基因cfl中，得到启动子重组菌株CO，在18和28 ℃培养条件下发酵培养，结果表明，CO菌株在18 ℃培养条件下冠菌素产量是出发菌株DC3000的1.8倍，在28 ℃培养条件下冠菌素产量是出发菌株DC3000的4.1倍。利用启动子替换的方法有效提高了冠菌素的产量，并且改善了高温发酵条件对菌株冠菌素产量的制约影响，为冠菌素的菌种改造和工业化生产应用提供有力支持与借鉴。