家蚕生物反应器表达传染性法氏囊病病毒多聚蛋白的免疫原性研究

将传染性法氏囊病病毒(IBDV)浙江分离株JD1的多聚蛋白(VP2/4/3)基因克隆到家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中,重组载体与杆状病毒Bm-BacPAK6的线性化基因组DNA共转染家蚕细胞后,将获得的重组病毒BacPAK-A感染家蚕5龄起幼虫进行虫体内表达.用感染后第5日的蚕血淋巴作抗原制备油佐剂苗免疫14日龄非免疫鸡,安全性试验表明,接种1倍和5倍免疫剂量的试验鸡在临床反应和剖检中均无异常变化;在免疫-攻毒试验中设杆状病毒表达的IBDV VP2蛋白和正常蚕血淋巴免疫对照组,并于28日龄加强免疫,25 d后用IBDV强毒BC6/85攻击.通过临床保护率、病理保护率及血清学试验表明,基于多聚蛋白制备的疫苗更成功地诱导了体液免疫应答,比VP2蛋白对IBDV强毒的攻击具有更高的保护力,更适于作为IBD基因工程亚单位疫苗的抗原成分.     

萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因，将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2，高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌，并直接转染Vero细胞，提取细胞总DNA，DIG标记探针可检测到阳性杂交信号．用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验，可检测到特异性黄绿色荧光．SDS-PAGE和Western blotting可检测到18．5kD和14．5kD的蛋白条带．表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2，且表达产物具有免疫反应性，为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据．     

鸡白细胞介素2原核表达及多克隆抗体的制备

鸡白细胞介素2(IL-2)是一种在机体免疫调节中具有多种功能的细胞因子.本研究将萧山鸡白细胞介素2基因克隆入原核表达载体pET-28b,获得了重组表达载体pET-28b-IL-2,将此重组表达载体转化大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达萧山鸡IL-2.SDS-PAGE结果表明,萧山鸡IL-2在大肠杆菌中得到了表达,以此表达产物制成油乳剂苗免疫家兔,用ELISA和Western blotting检测兔血中的多克隆抗体,结果均为阳性.因而为进一步开展鸡IL-2的结构和功能研究奠定了基础.     

传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的分子生物学特性

传染性法氏囊病病毒(IBDV)主要侵害雏鸡法氏囊等中枢免疫器官，其靶细胞是表面带有SmIg的B淋巴细胞，从而导致以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV属于双节核酸病毒科(Birnavirade)禽双节核酸病毒属(Avibirnavirus)的成员，近几年IBDV分子生物学的研究表明，VP2不仅是IBDV的主要结构蛋白，而且还是主要宿主保护性抗原，与病毒中和性抗体的诱导与识别、病毒毒力变异、病毒的抗原漂变、细胞凋亡的诱导等有关，因此VP2成为研究IBDV遗传变异、繁殖机制以及IBDV的免疫学防制的“hot”基因。本文就这方面的最新进展做一综述。     

传染性法氏囊病病毒VP2基因在家蚕中的表达

传染性法氏囊病病毒（IBDV）能引起以淋巴细胞衰竭为特征的抑制性疾病。IBDV的主要结构蛋白VP2蛋白是主要的宿主保护性抗原，在VP2上的点突变是造成IBDV抗原漂变的主要原因。为研究VP2作为IBDV亚单位疫苗的潜力，本实验将IBDV JD1株的VP2基因重组于家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK8中，将重组载体pBacPAK-VP2与病毒Bm-Bac-PAK6的线性化DNA共转染家蚕培养细胞，获得重组病毒BacPAK-VP2。DIG点杂交表明重组病毒基因组中含有VP2基因。重组病毒感染家蚕5龄幼虫后，用ELISA、SDS－PAGE和Western blotting检测蚕血淋巴中重组VP2蛋白的相对表达量及免疫反应性。结果表明重组VP2蛋白具有免疫反应性，感染后5－6d在蚕血淋巴中的表达量最高。     

传染性法氏囊病病毒VP_2蛋白的分子生物学特性

传染性法氏囊病病毒 (IBDV)主要侵害雏鸡法氏囊等中枢免疫器官 ,其靶细胞是表面带有 Sm Ig的 B淋巴细胞 ,从而导致以淋巴细胞衰竭为特征的免疫抑制性疾病。IBDV属于双节核酸病毒科 (Bir-navirade)禽双节核酸病毒属 (Avibirnavirus)的成员 ,近几年 IBDV分子生物学的研究表明 ,VP2 不仅是 IBDV的主要结构蛋白 ,而且还是主要宿主保护性抗原 ,与病毒中和性抗体的诱导与识别、病毒毒力变异、病毒的抗原漂变、细胞凋亡的诱导等有关 ,因此 VP2 成为研究 IBDV遗传变异、繁殖机制以及IBDV的免疫学防制的“hot”基因。本文就这方面的最…     

萧山鸡IL-2基因真核表达载体构建及其在Vero细胞中的表达

扩增萧山鸡白细胞介素2(IL-2)基因,将其插入真核表达载体pCI构建重组质粒pCI-IL-2,高压电击法将重组质粒转化入减毒沙门氏菌,并直接转染Vero细胞,提取细胞总DNA,DIG标记探针可检测到阳性杂交信号.用FITC标记的羊抗兔IgG进行间接免疫荧光试验,可检测到特异性黄绿色荧光.SDS-PAGE和Western blotting可检测到18.5 kD和14.5 kD的蛋白条带.表明减毒沙门氏菌能将重组质粒pCI-IL-2携带进入Vero细胞内表达IL-2,且表达产物具有免疫反应性,为今后研制鸡IL-2基因作为口服免疫增强剂提供了依据.     

猪Ⅱ型圆环病毒浙江分离株全基因组的克隆与序列分析

越来越多的证据显示,猪Ⅱ型圆环病毒(PCV2)是断奶后仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的主要病原之一.本研究克隆了两株PCV2浙江分离株(JS2003和Zhuji2003)的全基因并对其进行测序.序列分析结果表明,这两个基因组全长均为1767nt,与GenBank中的其它24株PCV2相比,核苷酸同源性为94.8%～99.8%,而与4株PCV1的核苷酸同源性仅为76.5%～78.0%.虽然PCV2基因从总体上来说相对稳定,但在不同地区分离到的PCV2中确实存在一定的基因差异.