Ⅱ耆水气单胞菌β-hemA重组菌表达产物ISCOMs的研制

嗜水气单胞菌β-hemA重组菌PCB的培养上清液经硫酸铵梯度沉淀粗提毒素蛋白质，并在pH2．5的柠檬酸缓冲液里酸化处理以暴露其疏水区，经Mega-10裂解后与QuilA结合制备ISCOMMs，电镜下可观察到30～40nm的多面体的笼格状颗粒结构。经鳗鱼的免疫保护试验证实．ISCOMs组(每尾40～80μg)保护率高达100％，同剂量的溶血素 弗氏佐剂组可达62．5％，未加佐剂的溶血素只有50％。     

β-hemA-ISCOMs对鳗鲡的口服免疫效果

携带嗜水气单胞菌β-溶血素基因的重组菌可表达具天然活性的β-溶血素。重组菌胞外产物制成的ISCOMs(β-hemA-ISCOMs)经由肠胃途径免疫,可显著提高鳗鲡淋巴细胞的增殖转化能力(P<0.05),并诱导免疫保护,一次免疫的攻毒存活率为44.4%。二次免疫的攻毒存活率为100%。本研究首次将ISCOMs技术应用于鳗鲡口服免疫,试验结果表明ISCOMs技术在发展鱼类口服型疫苗上有广阔的应用前景。     

细菌DNA和gm-csf基因对抑制素基因免疫的作用

40只小鼠分为4组,分别注射pC ISI(抑制素质粒)、pC ISI+细菌DNA、pC ISI+pGM-CSF和生理盐水(8.5 g.L-1)。pC ISI剂量为20μg,与佐剂等量混合,2周后加强免疫1次。试验结果表明,细菌DNA佐剂组诱导77.8%(7/9)的个体产生了抑制素阳性抗体,抗体以IgG2α型为主,gm-csf佐剂组产生的抗体以IgG1型为主;基因佐剂联合抑制素基因免疫激发的淋巴细胞增殖能力显著高于抑制素基因单独免疫组(P<0.05);细菌DNA佐剂组阳性鼠的动情期血浆雌二醇高于阴性鼠(P<0.05),免疫对动情期孕酮水平无显著影响(P>0.05)。上述结果表明,细菌DNA和gm-csf能增强抑制素基因的免疫效果。     

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物最小免疫剂量测定

为探讨创伤弧菌Vibrio vulnifiticus外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)免疫刺激复合物(Immune stimulating Complexs,ISCOMs)的抗原性,制备创伤弧菌OMP-ISCOMs腹腔注射免疫欧洲鳗鲡Anguilla anguilla(平均规格为17g·尾-1),通过免疫血清学检测和攻毒保护试验,测定ISCOMs最小免疫剂量。结果表明,于免疫后第30d用FJ03-X2菌株攻毒,免疫组40、20、10、5μg·尾-1的免疫保护力分别为100%、87.5%、75%、50%;免疫血清效价分别为1∶6 400、1∶3 200、1∶800、1∶200。结果说明创伤弧菌外膜蛋白ISCOMs的最小免疫剂量为0.59μg.g-1水温(24±1)℃,并证实了创伤弧菌OMP-ISCOMs具强抗原性。     

应用猪精液抑制素主动免疫法诱导黄牛孪生

 2 70头经产母黄牛分成 3组 ,每组 90头 ,分别在产后 13个月用 2mg(Th组 )或 1mg(Tl组 )精液抑制素和福氏完全佐剂进行主动免疫 ,34周后进行加强免疫。加强免疫所用抑制素剂量减半 ,佐剂为福氏不完全剂。另一组牛用不含抑制素生物活性的精液提取物和上述佐剂进行主动免疫和加强免疫 ,用作对照组 (C组 )。母牛发情时 ,间隔 8 12h用冷冻精液进行人工授精。在主动免疫和加强免疫后 812d采集颈静脉血 ,收集血清 ,分别用双扩散凝胶沉淀法和酶联免疫吸附测定法测定抗抑制素抗体的效价。根据记录完整的 2 4 7头牛资料 ,发现Th组 87头母牛中有 73头(83.9% )发情 ,其中 5 1头排单卵 ,19头排双卵。妊娠期末 ,15头产双胎 (孪生 2 6 .3% ,15 / 5 7)。而在T1组 (72头 )和C组 (88头 )中 ,分别只有 4 4头 (6 1.1% )和 5 5头 (6 2 .5 % )母牛发情 :其中排双卵的母牛分别为 4头和 0。妊娠期末 ,孪生率分别为 3.1% (1/ 32 )和 0 (0 / 34)。分析血清抗体水平 ,证明排双卵的母牛血清抗抑制素水平显著高于排单卵和不排卵的母牛 ,排卵数与抗抑制素抗体水平呈正相关 (r=0 .75 0 7,P <0 .0 1)。     

H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗安全性试验研究

通过对H5N1亚型禽流感油佐剂疫苗的急性毒性试验、眼结膜刺激试验、肌肉刺激试验与溶血试验研究,评价其安全性。急性毒性试验：取AA+肉鸡70只,随机分成7组,设为高剂量疫苗组与佐剂组,中剂量疫苗组与佐剂组,低剂量疫苗组与佐剂组,空白对照组。眼结膜刺激试验：取兔12只,随机分成2组,为疫苗组和佐剂组,采用自身对照法,观察兔...     

新鱼腥草素钠纳米乳佐剂对肉仔鸡免疫功能的影响

以新鱼腥草素钠纳米乳为免疫佐剂,将其混入传染性支气管炎灭活疫苗,探讨其对肉仔鸡免疫功能的影响。选150只1日龄黄羽肉鸡,随机分成3组,第1组用新鱼腥草素钠纳米乳佐剂疫苗,铝胶佐剂疫苗为阳性对照组作为第2组,第3组为空白对照组(PBS)。免疫后21d(35日龄)采用IBV M41株病毒液进行点眼、滴鼻攻毒。通过测定每组鸡淋巴细胞(PBMC)增殖情况、鸡血清抗体效价、IBV强毒株攻毒保护及组织病理学变化。结果表明:新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组PBMC增殖指数、鸡血清抗体效价水平显著提高(P0.05),在IBV M41株攻毒试验中,新鱼腥草素钠纳米乳佐剂组可显著减轻病毒感染肉仔鸡临床症状,肺和肾无明显组织病理学变化,免疫保护率达到96.7%。这表明以新鱼腥草素钠纳米乳佐剂能提高肉仔鸡对传染性支气管炎的免疫力。     

芦笋粗多糖对正常小鼠免疫功能的影响

采用腹腔巨噬细胞吞噬法、溶血素及溶血空斑形成法和淋巴细胞转化法 ,观察其对正常小鼠免疫作用的影响。芦笋粗多糖大、中、小剂量组和香菇多糖组均可显著提高正常小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能 (P <0 .0 1) ,而芦笋粗多糖各剂量组又优于香菇多糖组。与生理盐水组比较 ,大剂量芦笋粗多糖组对正常小鼠溶血素及溶血空斑的形成和淋巴细胞的转化有显著影响 (P <0 .0 5 ) ,中剂量组有极显著影响 (P <0 .0 1) ,小剂量组对溶血空斑的形成有显著影响 (P <0 .0 5 )。     

日本沼虾血清溶血素的活性研究

[目的]为深入了解虾类的免疫机制提供科学依据和基础材料。[方法]以日本沼虾为材料,利用溶血试验和糖抑制试验测定其血清溶血素的溶血活性和糖抑制性,分析外界因子对其活性的影响。[结果]日本沼虾血清溶血素对鱼和鸡血细胞的敏感性较高。D-葡萄糖对日本沼虾血清溶血素有促进作用,而D-甘露糖、D-山梨糖、α-乳糖、L-鼠李糖,D-阿拉伯糖则有抑制作用。在50～60℃条件下溶血素的溶血作用较强,70℃及以上血清发生变性,无溶血活性。该溶血素pH作用范围广,在pH 2～12内对鸡血细胞都有溶血作用,其中pH 6～9溶血效果较好。最适盐度范围为3～5。溶血素对金属离子Cu2+敏感,其活性被完全抑制。敌百虫和乙酰甲胺磷可影响溶血素活性。葎草、生姜黄酮和葎草、桑叶多糖可增强日本沼虾血清的溶血活性。[结论]日本沼虾血清溶血素活性可随环境条件的影响而变化,具有一定的稳定性,是虾类免疫反应的重要组成部分。     

棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的理化特性研究

为深入研究棉铃虫幼虫血淋巴免疫因子溶血素的分子结构和生理功能,明确其分离、纯化的理化条件,采用分光光度法分别研究了温度、浓度、作用时间、pH、EDTA和金属离子对该溶血素的溶血活性影响及其糖结合特性。结果表明,棉铃虫幼虫血淋巴溶血素属热不稳定型。溶血素反应浓度与溶血活性并不成正比,8倍稀释液的溶血活性反高于4倍稀释液。反应2 h后,血淋巴溶血素对鸡血红细胞溶解速度急剧加快,6 h溶血效能达最大。血淋巴溶血活性的最适pH 7.0～8.0。62.5～500 mmol·L~(-1)EDTA对血淋巴溶血活性具有促进作用,而Ca~(2+)却具有极显著的抑制作用。糖抑制试验结果表明,供试的8种糖(糖苷)和唾液酸均未对血淋巴溶血活性产生抑制作用。     

马尾藻多糖佐剂对猪PRRS疫苗免疫效果影响的研究

分别以马尾藻多糖的不同剂量与猪PRRS灭活抗原配制成完全佐剂疫苗,免疫5组非猪PRRSV免疫猪,并于首免的第0、20、40、50d采血,测定其体液免疫和细胞免疫水平。结果表明：（1）各马尾藻多糖佐剂组T淋巴细胞转化率（61.4%、65.0%、63.4%）均高于空白组1（52.8%）及普通佐剂疫苗组（59.6%）,各马尾藻多糖佐剂组与空白对照组间差异显著（P〈0.05）;（2）各马尾藻多糖佐剂组的T淋巴细胞亚群数量均高于空白组和普通佐剂疫苗组,其中以CD3的数量差异最明显（P〈0.05）,但马尾藻多糖组与普通佐剂疫苗组的CD8和NK细胞亚群的测定值差异不显著;（3）间接ELISA法测定各马尾藻多糖佐剂组血清中抗体的活性（0.631、1.015、0.688）均高于两对照组（0.518、0.568）,其中100mg/头份马尾藻多糖佐剂组与对照组间的差异显著（P〈0.05）。可见,以马尾藻多糖作为佐剂即可以提高体液免疫水平,又能增强细胞免疫功能,其中100mg/头份马尾藻多糖剂量的总体免疫效果最佳。     

副溶血弧菌耐热性直接溶血素的研究进展

副溶血孤菌是存在于海洋水体及海洋生物的致病菌,同时也是引发人食物中毒的重要因素之一.其主要的致病因子是溶血素,其中耐热性溶血素被认为是致病性副溶血弧菌的主要毒力因子.本文就副溶血孤菌耐热性直接溶血素的研究进展作一综述.     

灰树花多糖PGF-1对荷瘤小鼠免疫功能的影响

以纯品灰树花多糖PGF - 1为原料 ,研究了其对S180 肉瘤生长的抑制作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果表明 ,在口服给药 5 0～ 15 0mg/kg·d的剂量下 ,PGF - 1对小鼠S180 肉瘤的抑制率为 2 0 .5 7%～ 34.75 %。经免疫试验发现PGF能明显增加荷瘤小鼠的胸腺指数、淋巴细胞转化能力、脾细胞抗体形成能力及IgM溶血素的含量     

黄牛对抑制素pCISI基因免疫的反应性

为分析抑制素基因免疫对黄牛的影响,优化免疫方法,将3.0 mg抑制素真核融合表达质粒pCISI以不同纯度并配以不同的免疫佐剂分2次导入72头母黄牛体内,采用ELISA法检测血样中抗抑制素抗体效价。结果表明:抗体阳性牛占59.72%(43/72);添加佐剂的重组质粒较空质粒组免疫效果明显(P<0.05),普鲁卡因佐剂显著优于脂质体(P<0.05);高纯度疫苗组阳性牛的比例略高于低纯度组,但差异不明显(P>0.05)。这说明应用抑制素质粒pCISI免疫黄牛后可产生抗抑制素抗体。     

甲壳素对猪传染性胃肠炎免疫调节作用的研究

研究了甲壳素对猪传染性胃肠炎疫苗的免疫调节作用；用浓碱法处理甲壳素可获得吸附能力强的佐剂，但物理性状不适合用于疫苗佐剂；壳聚糖可用作制备具有良好水溶性的疫苗佐剂，经与白油和蜂胶等佐剂比较：表明该佐剂对猪传染性胃肠炎具有一定的免疫调节作用。即4种佐剂的疫苗在免疫后14d，壳聚糖疫苗组抗体效价显著高于其它组；免疫后30～120d油乳剂疫苗组抗体效价显著高于其它组。     

亚麻木脂素对小鼠淋巴细胞、巨噬细胞、IL-2免疫功能的影响

文章为研究亚麻木脂素对小鼠免疫功能的影响,选用雌雄各半,体重18～22 g的ICR小鼠120只,随机分为对照组和试验低、中、高3个剂量组,小鼠分别经口给予0.6,1.2,3.6 g.kg-1.d-1的木脂素(SDG),持续30 d后测其各项免疫指标,结果表明,3个剂量组的小鼠T淋巴细胞中IL-2细胞活性分别提高57.8%、64.2%、67.4%;巨噬细胞吞噬水平分别提高55.4%、57.0%、59.7%,与对照组比较差异显著(P<0.05,P<0.01);中、高剂量组可使小鼠脾淋巴细胞转化率分别提高58.9%、62.3%;溶血空斑数分别增加51.8%、53.1%;NK细胞活性分别提高58.9%、62.7%,与对照组比较差异显著(P<0.05,P<0.01)。结果表明木脂素具有增强小鼠免疫功能的作用。     

创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡细胞免疫的影响

应用创伤弧菌ISCOMs疫苗对欧洲鳗鲡进行腹腔注射免疫,免疫后35 d进行攻毒试验,结果表明,经免疫的欧洲鳗鲡相对存活率达75%,证实创伤弧菌ISCOMs疫苗具有较好的免疫保护性。对创伤弧菌ISCOM疫苗免疫后的欧洲鳗鲡细胞免疫水平的淋巴细胞进行转化试验,检测结果分析表明,试验组与对照组的淋转指数差异不显著,推测该疫苗诱导的免疫保护方式可能与细胞免疫保护无密切相关性。     

猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建

以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。     

大黄鱼溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs的免疫效果初步研究

以溶藻弧菌外膜蛋白为模式抗原,制备其ISCOMs,免疫大黄鱼,进行安全和免疫力试验测定,结果显示溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全、纯净;免疫组菌体凝集效价比对照组高,但免疫组个体间有差异,而免疫组的血清ELISA抗体水平明显高于对照组;攻毒试验组（O．3&#215;10^7个&#183;尾^-1）存活率可达100％,对照组（0．3&#215;10^7个&#183;尾^-1）存活率为20％;试验表明溶藻弧菌外膜蛋白ISCOMs安全,免疫大黄鱼后可产生免疫保护力。     

牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株(zfb)β-溶血素(h/b)的克隆、表达及溶血活性分析

[目的]实现牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素在大肠杆菌中的高效表达,并分析重组β-溶血素的溶血活性.[方法]PCR扩增牛乳中金黄色葡萄球菌山东分离株β-溶血素基因,构建原核表达载体pET32a+/hlb,并在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,用96孔血凝板测定重组蛋白的溶血效价,以血琼脂平板法检测重组蛋白的CAMP反应.[结果]测序结果表明,扩增片段含有993 bp的ORF,可编码含330个氨基酸的成熟蛋白;SDS-PAGE分析重组蛋白表达水平,IPTG诱导后表达的融合蛋白分子量为57 kD,表达量占菌体总蛋白的23.9%;溶血效价分析,金葡菌β-溶血素对绵羊红细胞的溶血效价为278 HU·mg-1,对奶牛红细胞的溶血效价为9×103Hu·mg-1;重组蛋白在血琼脂平板上和无乳链球菌能发生明显的CAMP反应.[结论]成功表达了牛乳中金黄色葡萄球菌β-溶血素,该毒素对奶牛红细胞的溶血活性明显大于绵羊红细胞,显示出牛源金黄色葡萄球菌β-溶血素的特性明显不同于人源金黄色葡萄球菌β-溶血素,为进一步研究其致病与免疫机理、疫苗设计提供了理论基础.此外,重组蛋白还可用来特异性诊断、鉴别无乳链球菌,为兽医临床诊断提供新的方法.