创伤弧菌外膜蛋白的分离及其抗原性分析

分别采用Sarkosyl和PMSF法分离、提取鳗源创伤弧菌FJ03-X2的外膜蛋白,并应用SDS-PAGE和Western-blotting分析比较两种方法提取的外膜蛋白的组分和抗原性。SDS-PAGE分析结果表明,Sarkosyl法分离的主要外膜蛋白分子量集中在14～66 kDa之间;而PMSF法分离的主要外膜蛋白分子量分布在14～92 kDa之间。在两种方法中,分子量38 kDa、36 kDa的外膜蛋白均为高丰度蛋白。两种方法提取的创伤弧菌外膜蛋白经SDS-PAGE后,用兔抗创伤弧菌FJ03-X2血清进行Western-blotting,结果显示,兔抗FJ03-X2高免血清能识别绝大多数外膜蛋白组分,说明FJ03-X2菌株的外膜蛋白具有良好的抗原性。其中,分子量分别为66kDa、47 kDa、44 kDa、38 kDa、36 kDa、34 kDa的外膜蛋白呈强阳性反应,是主要的免疫原组分。同时,经比较分析认为PMSF法提取创伤弧菌外膜蛋白的效果更好。     

草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒的构建与表达分析

为进一步研究CD8α、CD207在草鱼树突状细胞(dendritic cells,DCs)中的功能,实验构建了草鱼CD8α、CD207基因重组真核表达质粒并在草鱼DCs中成功表达。采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从草鱼DCs中获得CD8α、CD207开放阅读框序列(ORF),分别插入真核表达质粒pcDNA3.1,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207;经测序鉴定正确后,采用脂质体法将重组真核表达质粒分别转染至草鱼树突状细胞,经细胞免疫荧光技术和蛋白免疫印迹(Western blot)法验证CD8α、CD207的表达。结果显示,在蛋白免疫印迹实验中CD8α、CD207蛋白可正常表达,且大小与预测结果一致。细胞免疫荧光结果显示,CD8α、CD207蛋白主要在草鱼DCs的细胞膜上表达。本研究成功构建pcDNA3.1-CD8α、pcDNA3.1-CD207重组真核表达质粒,为后续研究CD8α、CD207基因在DCs中的作用机制奠定了基础。     

创伤弧菌外膜蛋白免疫刺激复合物最小免疫剂量测定

为探讨创伤弧菌Vibrio vulnifiticus外膜蛋白(outer membrane protein,OMP)免疫刺激复合物(Immune stimulating Complexs,ISCOMs)的抗原性,制备创伤弧菌OMP-ISCOMs腹腔注射免疫欧洲鳗鲡Anguilla anguilla(平均规格为17g·尾-1),通过免疫血清学检测和攻毒保护试验,测定ISCOMs最小免疫剂量。结果表明,于免疫后第30d用FJ03-X2菌株攻毒,免疫组40、20、10、5μg·尾-1的免疫保护力分别为100%、87.5%、75%、50%;免疫血清效价分别为1∶6 400、1∶3 200、1∶800、1∶200。结果说明创伤弧菌外膜蛋白ISCOMs的最小免疫剂量为0.59μg.g-1水温(24±1)℃,并证实了创伤弧菌OMP-ISCOMs具强抗原性。     

基于改进残差神经网络的家蚕日龄识别模型

家蚕日龄的准确识别有助于精准饲喂和动物福利,因此为准确识别家蚕生长时期中3龄第1天至5龄第7天,共14个日龄,在实际环境下采集特定家蚕品种,构建以14个日龄为单位的数据集。提出一种基于改进残差神经网络的Moga-ResNet,该方法在经典残差神经网络ResNet50的基础上,引入多阶门控机制以获取日龄图像的显著性特征。通过在同一个家蚕日龄数据集上开展模型训练与测试得到,Moga-ResNet的识别准确率为96.57%,F1值为96.57%,召回率为96.62%,与Swin Transformer、MobileNet v3、CSPNet和DenseNet四个经典模型的评价指标相比,Moga-ResNet在家蚕的日龄识别中具有较强的识别能力,可以为开展家蚕精准饲喂和数字化管理相关工作提供基础。     

创伤弧菌、溶藻弧菌外膜蛋白特性的比较研究

对用Sarkosyl法分离的创伤孤菌、溶藻弧菌、副溶血弧菌、鳗弧菌的外膜蛋白进行了初步的比较分析.这4种弧菌外膜蛋白的SDS-PAGE和Western blotting的图谱有相似性亦有差异.SDS-PAGE显示,4种弧菌中除副溶血弧菌外均能分离到47、38 ku的外膜蛋白;创伤弧菌和溶藻弧菌存在4种共同的外膜蛋白,大...     

黄颡鱼朗格汉斯细胞的鉴定及其功能基因的表达分析

为研究黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构特点以及细菌感染对其功能相关基因表达的影响，采用免疫组化技术对黄颡鱼免疫器官中朗格汉斯细胞进行鉴定，通过透射电镜进一步观察到黄颡鱼朗格汉斯细胞的超微结构，并采用荧光定量PCR检测鲶爱德华氏菌感染后黄颡鱼免疫相关组织内朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4的表达情况。结果显示，黄颡鱼头肾和脾脏中具有朗格汉斯细胞的特异性分子标记CD207蛋白，且黄颡鱼朗格汉斯细胞的结构与其他脊椎动物类似，即细胞质中大量的伯贝克颗粒围绕着中心粒呈放射状排列。在鲶爱德华氏菌感染后，朗格汉斯细胞功能相关基因IL-1β、TNF-α、IL-10和TLR-4在黄颡鱼免疫器官内的表达量显著上调。上述结果表明，黄颡鱼含有朗格汉斯细胞，并且其可能参与了机体抗鲶爱德华氏菌感染的免疫反应。     

以史为鉴,可知兴替——评《中国管理科学历程》出版

朱基总理曾说过 :“管理科学 ,兴国之道”,可见管理科学的重要意义。我们今天要搞好管理 ,除了要借鉴国外的先进的管理经验外 ,尤有必要借鉴中国历史上尤其是近现代史上的成功的管理经验。由湖南大学许康教授等人主持的国家自然科学基金委资助的中国管理学史专著《中国管理科学历程》一书 ( 2 0 0 0年由河北科学技术出版社出版 ) ,填补了中国管理科学史的空白 ,为中国管理科学的理论工作者和实际工作者提供了很好的借鉴经验和材料。该著材料翔实 ,作者查阅了上亿字的文献 ,专程走访了数以百计的专家、学者和相关人员     

不同温度下恩诺沙星在克氏原螯虾体内的药代动力学

在18℃和25℃2种温度下,对克氏原螯虾注射剂量为20μg/kg的恩诺沙星药液,分析恩诺沙星和环丙沙星在克氏原螯虾体内的药物动力学特征和残留规律。结果显示,恩诺沙星及环丙沙星在血淋巴、肌肉、肝胰腺中回收率80%～110%,检测值日内变异系数均小于5%,日间变异系数均小于6%,检测限均在0.01μg/mL(μg/g)以下。18℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T_(max)分别为0.083 0、0.344 7、1.933 5 h,25℃时恩诺沙星在克氏原螯虾血淋巴、肌肉、肝胰腺中的T_(max)分别为0.083 0、0.263 4、1.165 8 h,温度提高加快了克氏原螯虾中恩诺沙星的吸收。消除半衰期T_(1/2β)大小顺序为肝胰腺(55.740 3 h)肌肉(52.743 7 h)血浆(18.608 7 h)。以恩诺沙星和环丙沙星作为残留标志物,25℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为311.47 h,18℃时恩诺沙星在肝胰腺的消除期为417.77 h,根据本试验结果,以国家标准0.2μg/g为残留标准,建议恩诺沙星休药期为325 (℃·d)。     

草鱼朗格汉斯细胞的组织分布及其特征基因CD207的功能分析

为了研究草鱼(Ctenopharyngodon idella)体内朗格汉斯细胞(Langerhans cells, LCs)的分布及其特征性基因CD207的功能，利用免疫荧光(immunofluorescence, IF)、蛋白质印迹、实时荧光定量PCR(quantitative Real-time PCR,qPCR)探究草鱼LCs在相关免疫组织的表达情况及其特征性基因CD207在感染中的调节作用。免疫荧光结果显示，LCs主要在草鱼的头肾，皮肤的表皮和真皮，肠道固有层和鳃的鳃小片中分布。蛋白质印迹和qPCR结果显示，在LPS、PolyI:C处理头肾白细胞后，CD207的mRNA和蛋白相对表达水平均有显著上调。结果表明在抗原入侵机体后，草鱼LCs可以通过上调CD207的表达，在抵抗病原感染过程中发挥重要功能。