卵泡抑制素与GFP融合基因疫苗免疫对大鼠卵巢和生殖激素的影响

将50只大鼠随机分为5组,分别注射0.2（T1）、0.6（T2）、1g/L（T3）pEGISI,100μg空载体pEGFP-N1（C1）和100μL生理盐水（C2）,以探讨在没有使用免疫佐剂的情况下,抑制素与GFP融合基因疫苗pEGISI免疫对大鼠卵巢和生殖激素的影响。研究结果,加强免疫能提高抗体P/N值,T3组在加强免疫期与对照组差异显著（P〈0.05）;加强免疫第2周时T3组抗体阳性鼠比例达40%,与T1和T2组差异均显著（P〈0.05）。T3组卵巢大小和卵泡数均显著高于对照组（P〈0.05）,但抗体阳性鼠大卵泡数与阴性鼠差异不显著（P〉0.05）。各剂量组促卵泡素和雌二醇均高于对照组,且在加强免疫第2周时T3组与对照组差异显著（P〈0.05）;各剂量组孕酮含量与对照组差异均不显著（P〉0.05）。结果表明,在没有使用免疫佐剂的前提下,抑制素pEGISI基因免疫可产生抗体,促进卵巢发育和FSH分泌。本试验条件下100μg是最佳免疫剂量。     

抑制素pCISI基因免疫对黄牛卵泡的影响

为提高动物繁殖力，分别用不同纯度的抑制素真核融合表达质粒pCISI，配以不同免疫佐剂后导入72头母黄牛体内。结果表明：①两次免疫后，产生抗抑制素抗体的黄牛占59．72％（4 3／72）；②pCISI能促进双大卵泡发育（68．75％，44／64），诱发排双卵（50．00％，32／64）；③加入佐剂的疫苗较未加佐剂的疫苗免疫效果明显，普鲁卡因佐剂显著优于脂质体（P〈0．05）；④纯度疫苗对牛的免疫效果略高于低纯度疫苗，但差异不明显（P〉0．05）。     

抑制素基因免疫对黄牛孪生的影响

为增强肉牛的繁殖力,应用本实验室构建的抑制素真核融合表达质粒pCISI,提纯后辅以不同的免疫佐剂注入96头母黄牛体内,采用AMI-900兽用B超对其中84头发情牛进行卵泡检测,并对其中78头妊娠牛进行早期胚胎数目检测。结果发现:抑制素质粒pCISI能促进双大卵泡发育(80.95%,68/84),诱发排双卵(60.71%,51/84),诱导黄牛孪生(41.03%,32/78);普鲁卡因佐剂(48.78%)比脂质体(32.43%)效果明显。研究表明,抑制素基因免疫能有效提高黄牛的繁殖率。     

抑制素pCISI基因免疫对黄牛卵泡和胚胎数目的影响

利用自行构建的抑制素真核融合表达质粒pCISI,提纯后配以不同的免疫佐剂导入96头母黄牛体内,采用AM I 900兽用B超对其中84头发情牛进行卵泡检测,并对其中78头妊娠牛进行早期胚胎数目检测。结果表明:抑制素质粒pCISI能促进双大卵泡发育(80.95%,68/84),诱发排双卵(60.71%,51/84),普鲁卡因佐剂(71.11%)比脂质体佐剂(48.72%)效果明显;同时,抑制素质粒pCISI能诱导黄牛怀双胎(41.03%,32/78),普鲁卡因佐剂(48.78%)比脂质体佐剂(32.43%)效果明显。     

分光光度法快速测算公猪精子密度的研究

为了建立分光光度法测定猪精子密度的标准方法,比较了不同波长(450、550、650 nm)下吸光度(A)、透射比(T)与精子密度(C)的关系。吸光度的检测上限随波长的增加而上升,分别为2.016亿/mL(450 nm)、2.24亿/mL(550 nm)和2.35亿/mL(650 nm),但重复测定的稳定性下降。透射比的观测值随稀释倍数增加,重复测定的稳定性降低,当稀释倍数大于10倍(450 nm)、6倍(550 nm)、4倍(650 nm)时重复测定的观察值之间开始出现差异。试验结果表明,450 nm为最适检测波长,猪精子密度与吸光度、透射比分别呈三次函数和幂函数回归关系,回归方程分别为:C450=0.48A3-0.76A2+0.67A-0.066(R=0.951)和C450=1.657T-0.1068(R=0.940)。     

黄牛对抑制素pCISI基因免疫的反应性

为分析抑制素基因免疫对黄牛的影响,优化免疫方法,将3.0 mg抑制素真核融合表达质粒pCISI以不同纯度并配以不同的免疫佐剂分2次导入72头母黄牛体内,采用ELISA法检测血样中抗抑制素抗体效价。结果表明:抗体阳性牛占59.72%(43/72);添加佐剂的重组质粒较空质粒组免疫效果明显(P<0.05),普鲁卡因佐剂显著优于脂质体(P<0.05);高纯度疫苗组阳性牛的比例略高于低纯度组,但差异不明显(P>0.05)。这说明应用抑制素质粒pCISI免疫黄牛后可产生抗抑制素抗体。     

双拷贝抑制素基因免疫对肉牛卵泡和黄体的影响

 【目的】探讨不同剂量的双拷贝抑制素pcISI基因免疫对肉牛生殖能力的影响。【方法】将58头同期发情肉牛随机分为6组, 每组肉牛分别注射0.75（T1）、1.5（T2）、2.25（T3）、3.0 mg/头（T4）pcISI质粒、3.0 mg/头 pcMV-S空质粒（C1）和3 mL/头 生理盐水（Ｃ2）,初次免疫21d后进行加强免疫,以探讨抑制素pcISI基因疫苗对肉牛卵泡和黄体发育的影响。【结果】4个剂量组的大卵泡数均高于对照组,除了T1外,其它3个剂量组均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3和T4的中卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）;T3和T4的小卵泡数均高于对照组,且差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,各剂量组成熟卵泡直径均高于对照组,除了T1外,其它3组两侧成熟卵泡均与对照组差异显著（P＜0.05）。无论左侧还是右侧,4个剂量组黄体直径均高于对照组,且均与对照组差异显著（P＜0.05）;T3黄体最大,T1最小,且T3与T1差异显著（P＜0.05）。加强免疫后10 d（BM10）抑制素抗体与成熟卵泡大小相关显著（r＝0.629,P＜0.05）,与黄体大小相关极显著（r＝0.651,P＜0.01）。【结论】双拷贝抑制素pcISI基因免疫可促进肉牛卵泡和黄体发育,2.25mg为最佳免疫剂量,抑制素抗体水平与卵泡和黄体发育有一定的相关性。