黑曲霉6042液体发酵生产饲用复合酶的工艺研究

对适合固体培养的黑曲霉变异菌株６０４２进行液体深层发酵工艺研究结果。其优化工艺为，发酵培养基配方：豆粕粉４．５％，麸皮０．５％，ＮＨ４ＮＯ３０．５％，ＣａＣｌ２０．３％和适量１号产酶诱导物。初始ｐＨ５．０－５．５种龄２４小时，接种量１０％，发酵温度２８℃，发酵周期７２小时。     

蛋白质降解菌的筛选及其在烟叶中的作用效果研究

为分离产蛋白酶能力较强的菌株,利用酪蛋白培养基,对醇化烟叶上分离到的细菌进行了定向筛选,得到了降解蛋白质能力较强的菌株24株,对其蛋白酶活性的测定表明:PE1菌株的蛋白酶活性最高,达到156.25 U/m L。将PE1的粗酶液用于烟丝处理,烟丝蛋白质的分解率随着处理浓度的提高而增加,烟丝抽吸品质也有所改善,粗酶液最适浓度为40⁶0 U/g。     

蛋白质降解菌的筛选及其在烟叶中的作用效果研究

为分离产蛋白酶能力较强的菌株,利用酪蛋白培养基,对醇化烟叶上分离到的细菌进行了定向筛选,得到了降解蛋白质能力较强的菌株24株,对其蛋白酶活性的测定表明:PE1菌株的蛋白酶活性最高,达到156.25 U/m L。将PE1的粗酶液用于烟丝处理,烟丝蛋白质的分解率随着处理浓度的提高而增加,烟丝抽吸品质也有所改善,粗酶液最适浓度为40~60 U/g。     

腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究

以毛霉菌Ｍ２为出发菌株，经紫外线，６０Ｃｏγ－射线复合诱变，获得一株高产蛋白酶突变株毛霉Ｍ２６３．该菌株的生长速度快，菌丝旺盛，且洁白致密。固体培养，中性蛋白酶活力为８４１μｇ／ｍｉｎ，产酶活力约为原出发菌株的２倍。产酶最适培养条件为：９８％麸皮，１％豆饼粉，１％葡萄糖，料水比１：１，起如ｐＨ７．０，２０℃培养１２０ｈ。     

耐高温酸性蛋白酶的菌株筛选及特性研究

本研究采用高温，超剂量常规诱变筛选方法，获得的耐高温酸性蛋白酶生产菌Ｓ３１５菌株，它所产生的耐高温酸性蛋白酶，最适ＰＨ值依次为２．５，３．０、２．０，最适温度为５０℃。     

土壤中产碱性蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的研究

[目的]从土壤中筛选产碱性蛋白酶菌株,并优化产酶条件。[方法]采用平板分离方法从土壤样品中分离出8株产碱性蛋白酶菌株,采用滤纸片法和Folin-酚法测定8个菌株的产酶能力。将具有较强产酶能力的菌株作为目的菌株,研究该菌株产酶能力的影响因素,并采用正交试验法优化产酶条件。[结果]经过初筛和复筛,从土壤中得到一个碱性蛋白酶高产菌株（5号）,作为目的菌株,其产酶能力为6.00 U/ml,为地衣芽孢杆菌的134.1%,该菌株为革兰氏阳性芽孢梭菌。正交试验表明,在pH为11的初始发酵培养基中添加0.3%蔗糖和0.8%蛋白胨,并以105个/ml的接种量接种,目的菌株可得到较好的产酶效果,且蛋白胨对该菌株产酶能力具有显著影响。[结论]该研究为产碱性蛋白酶菌株的筛选提供了理论参考。     

纺织用中性蛋白酶MYS11菌株发酵条件的优化

研究了一株产纺织用中性蛋白酶MYS11菌株的培养基组成。结果表明,该菌株的发酵最适条件为碳源3%玉米粉、氮源1%大豆蛋白粉、添加0.2%KH2PO4。通过正交试验优化了发酵条件,即培养基起始pH6.8、接种量6%、发酵时间54 h、发酵温度36℃。在最适条件下,MYS11菌株产酶活力达到1 884 U/mL,明显高于优化前水平。     

腐乳毛霉菌种选育及产酶条件研究

以毛霉菌（Ｍｕｃｏｒ）Ｍ２为出发菌株，经紫外线，６０Ｃｏγ－射线复合诱变，获得一株高产蛋白酶突变株毛霉Ｍ２６３。该菌株的生长速度快，菌丝旺盛，且洁白致密。固体培养，中性蛋白酶活力为８４１μｇ／ｍｉｎ，产酶活力约为原出发菌株的２倍。产酶最适培养条件为：９８％麸皮，１％豆饼粉，１％葡萄糖，料水比１：１，起始ｐＨ７．０，２０℃培养１２０ｈ。     

腐乳毛霉高产蛋白酶菌株的分离与鉴定

从贵州各地风味较好的腐乳样品中分离到20株疑似毛霉菌株,经理化鉴定。并采用福林-酚试剂法检测产蛋白酶活力,获得1株发酵风味良好且蛋白酶活性较高的腐乳毛霉菌株MGC317。鉴定为雅致放射毛霉Actinomucor elegans（Eid）Benjam et Hesseh。将MGC317菌株接种麸皮培养基,28℃培养48h。其蛋白酶活性为57．26μL;对其16SrDNA的ITS序列进行克隆和分析,其分子长为711bp,与雅致放射毛霉比较。序列同源性为96％-97％。前发酵结果显示,MGC317菌株的菌丝高度为3．1cm。48h时蛋白酶活性为13.82μL。     

不同菌株配伍摇瓶发酵蛋白酶的初探

探索产蛋白酶不同芽孢杆菌产蛋白酶的协同作用以提高发酵产物的蛋白酶活性.采取酪素平板初筛的方法,从分离的芽孢杆菌中筛选出产蛋白酶活性较高的菌株,再通过菌株两两配伍发酵和三者配伍摇瓶发酵培养,采用Foiln-酚法分别检测不同菌株配伍发酵产物的蛋白酶活性.酪素平板初筛结果表明,SH、TCP和B1 3株纳豆芽孢杆菌产蛋白酶活力高,SH和B1配伍发酵培养48 h后,酶活力比单菌株发酵分别提高了37.69%和59.23%.菌株之间的科学配伍在摇瓶发酵中能显著提高蛋白酶的活性.     

剩余污泥碱性发酵产蛋白酶菌株的筛选与鉴定

为了能够缩短剩余污泥碱性发酵周期,从碱性发酵剩余污泥中筛选产蛋白酶活力较高的耐碱细菌,利用形态学、生理生化、分子生物学特征对筛选到的菌株进行鉴定。结果表明,从碱性厌氧发酵剩余污泥中最终筛选获得2株产蛋白酶活力较高的耐碱细菌HIT-01菌株和HIT-02菌株,经鉴定分别为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和芽孢杆菌属细菌(Bacillus sp.)。为进一步利用筛选获得的优势菌株构建生物菌剂、从而快速启动污泥碱性发酵开拓了新思路。     

高产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌的研究进展

碱性蛋白酶(Alkaline protease)广泛存在于微生物中,最早发现在猪的胰脏中,1913年Rhom首先将胰蛋白酶作为洗涤浸泡剂使用。1945年瑞士的Dr．Jagg等发现了微生物碱性蛋白酶,使其成为洗涤剂的主要添加剂之一。碱性蛋白酶在丝绸、制革工业、饲料工业、动物食品加工中也有广泛用途,     

产酸性蛋白酶深红沙雷氏菌的筛选及其在种子萌发中的应用

酸性蛋白酶在工业生产中需求量巨大，但我国产酸性蛋白酶菌株的品种较为单一，因此，亟需开发新型的微生物源蛋白酶和选育高产蛋白酶菌种。从海口红树林土壤中筛选出一株可以在酸性环境下产蛋白酶的菌株，采用福林酚法测定蛋白酶活，经过形态学观察、生理生化实验及16S rRNA序列比对鉴定为深红沙雷氏菌。利用该菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥，通过种子萌发实验，研究发酵液的促生效果。结果显示，分离出的产酸性蛋白酶菌株R3可以用于鱼下脚料的发酵，在发酵液稀释5~25倍时，处理60 h均可以促进菜心种子的萌发，与市场购买的液肥效果相同。利用分离出的产酸性蛋白酶菌株发酵鱼下脚料制备生物液肥，实现了对废弃鱼蛋白资源的重新利用，增加了鱼类产品的附加值。     

白僵菌菌株毒力与Pr1蛋白酶活性相关性研究

利用专一性短肽底物Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-pNA对不同突变体菌株进行Pr1蛋白酶活性测定,同时应用玉米螟3龄幼虫对不同突变体菌株进行毒力测定,求算LT50值。以不同突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活为自变量,菌株毒力LT50值为因变量,进行相关性分析,得到突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活与毒力LT50值的线性回归方程:y=-2.411 6x+31.405,r2=0.521 6。由线性回归方程可以得出:不同突变体菌株的Pr1蛋白酶比酶活与菌株毒力LT50值呈负相关趋势,说明菌株的Pr1蛋白酶活性越高,菌株的LT50值就越低,菌株的毒力也就越大。两者相关系数r=-0.722 2,在0.05水平上相关显著,因此建议将Pr1蛋白酶的酶活性作为菌株初筛时的一个补充指标,但由于Pr1蛋白酶比酶活与菌株毒力LT50值相关性未达极显著水平,所以不建议将Pr1蛋白酶的酶活性作为菌株初筛时的替代指标。     

陕西设施蔬菜根结线虫生防菌株JXC224的分离筛选

几丁质及蛋白质是构成根结线虫体壁和卵壳的主要物质。几丁质酶和蛋白酶活性的高低是评价生防真菌防治潜力的重要生化指标。从陕西省陕北关中陕南根结线虫病害严重的设施蔬菜大棚中采集土样、根结样106份,用分离培养基分离到真菌436株。液体发酵测定分离菌株的几丁质酶活及蛋白酶活,筛选获得几丁质酶活≥0.06 U/mL的菌株11株,蛋白酶活≥100 U/mL的菌株3株。其中JXC224几丁质酶活达0.087 U/mL,蛋白酶活125.8 U/mL,对根结线虫二龄幼虫的侵染率达67%,是一株具有开发潜力的生防菌株,经ITS测序分析,鉴定其为枝顶孢霉(Acremonium sp.)。     

牛初乳营养保健功能研究

牛初乳是母牛分娩后7天内所分泌的乳汁，含有丰富的生长因子，能帮助修复组织，强健肌肉，修复RNA和DNA以及平衡血糖。牛初乳含有丰富的、天然的糖蛋白和蛋白酶抑制剂，从而保护了免疫因子和生长因子免受胃肠道消化酶的破坏，使其能够完整进入肠道，被人体吸收，发挥生理功能。牛初乳是一种纯天然食物，对人体安全无毒，对肠道中的有益菌没有影响，这与大多数抗生素具有广谱抑菌和杀菌作用完全不同。抗生素的使用会导致毒性更大的耐药性菌株的出现，而牛初乳则不会出现这一问题。牛初乳不仅适用于儿童，同样适用于成年人特别是老年人的保健。     

基于Fosmid文库筛选山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因及其表达验证

【目的】利用Fosmid文库功能筛选法,获得山羊瘤胃微生物源蛋白酶基因并进行原核表达。【方法】利用功能底物筛选法从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选具有蛋白酶活性的克隆子,对其进行Illumina二代测序,对预测到的基因进行功能注释,根据基因丰度结果确定后续研究的功能基因。利用大肠杆菌BL21(DE3)对功能基因进行诱导表达,对表达产物进行酶活性测定。通过CRISPR/Cas9基因编辑技术,将密码子优化后的功能基因分别敲入枯草芽孢杆菌C6基因组ctc位点并进行表达验证。【结果】从Fosmid文库1 700个克隆子中筛选到1个具有蛋白酶活性的阳性克隆Pro4-C5。通过二代测序技术,鉴定出3个潜在的蛋白酶基因gene0833（内肽酶,EC编号：EC3.4.21.53）、gene0196（金属内肽酶,EC编号：EC3.4.24）和gene0585（羧肽酶,EC编号：EC3.4.17.14）以及1个L-天冬酰胺酶基因（gene0683,EC编号：EC3.5.1.1）。以pET-28a(+)为表达载体,通过大肠杆菌BL21(DE3)原核诱导表达发现,gene0585和gene0196未表达;gene0833表达的蛋白分子质量为87 ku,蛋白酶活性为10.45 U/mL;gene0683表达的蛋白分子质量为37 ku,L-天冬酰胺酶活性为88.52 U/mL,同时发现该蛋白也具有蛋白酶活性,酶活性为5.25 U/mL。将密码子优化后的gene0683和gene0833定点敲入枯草芽孢杆菌C6基因组中表达发现,gene0833未表达,gene0683表达的蛋白酶活性为109.72 U/mL,相比原始菌株（100.97 U/mL）显著提高了8.67%（P＜0.01）;L-天冬酰胺酶活性为31.63 U/mL,相比原始菌株（22.79 U/mL）显著提高了30.06%（P＜0.01）。【结论】从山羊瘤胃微生物源Fosmid文库中筛选和鉴定出了2个具有蛋白酶活性的功能基因（gene0833和gene0683）,均来源于微小杆菌属（Exiguobacterium）,其中gene0683在大肠杆菌和枯草芽孢杆菌中的表达产物具有较高的蛋白酶和L 天冬酰胺酶酶活性。     

不同种源鸡腿蘑Cc_1菌株的生产性能评价

研究了3种不同来源的7个鸡腿蘑Cc_1菌株的菌丝培养特征和农艺性状,还将7个菌株进行了两两对峙培养,结果表明克隆菌株和多孢分离菌株与保藏菌株间菌丝生长速率、密度、色泽及现蕾时间等方面没有明显差异,任意两菌株间均无拮抗。与保藏菌株相比较,多孢分离菌株在产量上有正负两种效应,而克隆菌株增产均在10%以上。