Flag-ALD融合载体构建及蛋白表达

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）是感染鱼类的最常见致病菌之一，为了解维氏气单胞菌中丙氨酸脱氢酶（alanine dehydrogenase，ALD，EC 1.4.1.1）的调控功能，笔者通过分子克隆获得 Flag-ALD 融合表达载体，并在大肠杆菌中大量表达该蛋白。即以维氏气单胞菌C4基因组DNA为模板，采用PCR方法扩增获得N端带有Flag标签的ald基因，将带有标签的目的基因与原核表达载体pACYCDuet连接，并将重组质粒pACYCDuet-Flag-ald 转化到大肠杆菌（E.coli）BL21中。添加异丙基?β?D?1?硫代半乳糖吡喃糖苷（Isopropyl-beta-D-thiogalactopyranoside，IPTG）诱导重组蛋白大量表达。SDS-PAGE分离与Western blot结果表明，来源于维氏气单胞菌的Flag-ALD重组蛋白在E.coli中以可溶性形式成功表达。本实验构建的Flag标记靶标蛋白可为研究丙氨酸脱氢酶在维氏气单胞菌中的功能以及在生物抑菌剂方面的应用提供技术支持。     

火焰兰茎段侧芽离体再生及褐化的研究

以火焰兰的茎段为外植体,探讨不同植物激素配比对茎段侧芽萌发和生根壮苗的影响,以及不同培养基配方和不同添加剂对火焰兰生长过程中褐化现象的抑制作用。结果表明:最佳侧芽诱导培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA 0.5mg/L,培养40 d,后诱导率可达97.95%;添加活性炭0.3 g/L可有效抑制侧芽诱导过程中的褐化现象,褐化率仅为13.17%;1/2 MS+6-BA 0.2 mg/L+NAA 1.0 mg/L+AC 0.5 g/L生根效果最好,生根率达到100%,且植株生长健壮。利用火焰兰茎段侧芽能够离体再生获得瓶苗,建立高效的火焰兰茎段为外植体的离体再生体系,为扩大拓宽火焰兰组织培养外植体来源和快速繁殖技术提供技术支撑。     

海南省农业资源信息管理系统（MIS）的设计,建立和优化

用快速原型法和生命周期法相结合的方法，设计和建立了《海南省农业资源信息管理系统》，这是海南省第一个综合性的大型农业数据库。它录入了１９５２一１９９３年间海南省Ｎ个县（市）、９２个农场的自然环境、土地资源、气候资源、人力资源、水力资源、生物资源以及农业生产、农产品加工、农业产值、农业现代化、农业科技、农业灾害及其治理等方面的大量数据，共３００多个库，１３００多项指标，近６００万有效数据。对本系统采取如下措施：严格审理指标体系，减少冗余；用下拉式菜单代替一般的树型结构菜单；巧妙使用宏替换实现数组的功能，大大简化了程序；用ＦＯＸＰＣＯＭＰ，ＥＸＥ编译了所有的ＰＲＧ文件和。ＦＭＴ文件，以及编制过程文件，大大提高运行速度；用２１３１或２ｌ３Ｋ支持本系统，使之既能充分发挥２１３Ｌ方便灵活的打印功能和强有力的绘图功能的优点，又能克服２１３Ｈ的菜单底色有黑色条纹的缺点，并可解决大字封面设计的存储及调用问题；还对本系统实行三级加密，自动查病毒；使本系统逐步优化，成为一个速度快、准确、用户界面友好、安全可靠、有生命力的系统     

长期施肥对木薯农艺性状、鲜薯产量和淀粉质量分数的影响

1992—2003年12a间，对2个木薯品种(华南205和华南124)，进行氮、磷、钾和火烧土等4种肥料各4个不同施肥水平组成共16个施肥配方的试验，研究了长期施肥对木薯农艺性状、鲜薯产量和淀粉质量分数的影响。结果表明：淀粉质量分数与收获指数呈显著正相关，鲜薯产量与株高、茎径及单株结薯数呈极显著正相关，单株结薯数与株高、茎径呈极显著正相关，株高与茎径呈极显著正相关。并列出它们的相关回归方程。推荐木薯最佳N，P2O5，K2O的施肥质量配比为2～4：1：2～4，其中，N，P2O5，K2O的施肥质量配比在连作初期以2：1：2为佳，而连作后期则以逐渐过度为4：1：4为佳。     

AgNO3,GA3和温度对苦瓜纯雌、雄株系性别分化的影响

AgNO3处理可以调节“OHB61-5”苦瓜材料的性别表现。AgNO3对第1雌花节位、雌花数量、雌雄花的比率、两性花数量都有较大影响,随着质量浓度的增高(50～200mg／L),第1雌花发生的节位上升(6．86～16．4个),两性花数量逐渐增多(5．33～15．13个),雌花数量减少(14．3～4．6个),雌雄花比率降低,与对照和低质量浓度10mg／L处理间达极显著水平差异;低质量浓度10mg／l。处理对性别分化的诱导效应与对照差异不显著。外源GA,处理问对“OHB61—5”性别分化的影响差异不显著,GA3(25mg／L)处理与对照问差异达显著水平。温度处理上,2种不同的材料在3性状(雄花数、雌花数、无花节位数)的效应均达极显著差异,但温度水平在3性状的效应对于OHB41-2达到极显著水平差异,而对于OHB61-5没有达到显著差异。     

抑制尖孢镰刀菌人工肽适体的筛选和鉴定

香蕉枯萎病严重危害香蕉产业的发展。本研究从肽适体文库中筛选获得对香蕉枯萎病致病菌尖孢镰刀菌有抑制作用的人工肽适体SNP-D4。通过构建人工肽适体体外重组表达载体,获得SNP-D4体外重组蛋白。结果表明,通过抑菌活性检测表达人工肽适体SNP-D4的大肠杆菌全蛋白提取液,能够特异性抑制尖孢镰刀菌孢子的萌发,使其萌发率降低至19.60%。本研究筛选得到的人工肽适体SNP-D4可应用于研发环境友好型特异抗真菌生物制剂,为香蕉枯萎病防治提供新的技术手段。     

热研二号柱花草转化体系优化的研究

通过柱花草Stylosanthes guianensis转化过程中预培养时间、农杆菌Agrobacterium侵染浓度、乙酰丁香酮、植物组织浸提液、脯氨酸、硝酸银和农杆菌浸入法对农杆菌、外植体及共培养基的处理,研究了提高柱花草基因转化率的方法.试验结果:用预培养2 d处理外植体,10 μmol/L乙酰丁香酮和稀释5倍的番木瓜Carica papaya浸提液预处理农杆菌,1.5 mg/L的脯氨酸处理共培养基及采用农杆菌浸入法侵染外植体可以明显地提高柱花草的转化率;对农杆菌进行稀释,用柱花草浸提液预处理农杆菌及硝酸银处理共培养基对转化率无明显的影响.用SAS软件进行2×2的卡平方(x2)检验在最佳条件下的遗传转化表明:子叶和真叶的出芽率与对照相比差异都达到极显著.     

柱花草种质植物学特征比较分析

为利用植物形态学研究柱花草种质资源的遗传多样性,筛选优良柱花草种质,笔者对48份柱花草种质的植物学特征进行了观测比较并进行了聚类分析.结果表明48份种质(品种)中有3份是半灌木,2份种质属二年生草本,其余42份属多年生草本植物;绝大多数(35份)种质茎的生长习性是直立型或斜升型,只有5种是匍匐型;只有1份为白花,其它4...     

维氏气单胞菌flrB基因敲除株构建及其生物特性鉴定

维氏气单胞菌是一种常见的人鱼共患致病菌,为研究维氏气单胞菌中的flrB基因的功能,笔者通过扩增flrB基因上下游同源臂连接至pRE112质粒中,电击转化重组质粒至大肠杆菌WM3064,接合转入野生型维氏气单胞菌,在蔗糖压力下筛选、PCR和测序验证敲除菌株。结果表明,敲除flrB基因后降低生物膜的形成,但不影响维氏气单胞菌的生长。flrB基因能促进其生物膜的形成,这为进一步揭示该基因的功能和作用机制奠定了基础。     

木薯体细胞染色体银染显带的带型特点

以木薯(Manihot esculenta)“东方一号”种质为材料，对木薯体细胞染色体银染显带的带型特点进行了观察分析。结果表明，木薯体细胞染色体银染显带不存在核仁组织区域(NOR)的特异性，木薯体细胞所具有的全部染色体(36条)均能显示银染带，每条染色体上有2-5条银染带：根据银染带在染色体上的位置可区分为端粒带、次缢痕带、着丝粒带、居间带4种类型。因此，可将银染带作为木薯染色体的识别标记。对木薯中NOR区的数目也进行了讨论。