海南地区剑叶龙血树种质资源遗传多样性分析

利用ISSR标记法对海南省野生剑叶龙血树资源进行多样性分析,从100条ISSR引物中选取10条多态性好、重复性高、谱带清晰的引物,对105份样品DNA进行扩增,共得到116条谱带,其中多样性谱带有104条.品种间遗传相似系数在0.6442～0.994之间,平均为0.8011,表明剑叶龙血树遗传基础相对较狭窄.利用UPGMA聚类分析,将7个样地的居群分为1个大类群和1个小类群,类群与地理分布密切相关.     

甘蔗种质遗传基础的AFLP分析

采用AFLP分子标记技术对54份甘蔗种质（14份祖亲种、40份栽培品种或品系）的遗传基础进行了分析。利用筛选出的4对多态性较强的引物组合（M+CAG/E+ACG,M+CTC/E+ACT,M+CTG/E+ACC,M+CTG/E+ACG）,构建了甘蔗54份种质的AFLP指纹图谱,这4对引物组合共扩增出396条谱带,其中多态带390条,占98.5%。54份种质的遗传相似系数变化     

火焰兰属SRAP-PCR 体系的建立优化及验证

为建立火焰兰SRAP-PCR体系,采用U20(55)均匀试验设计,以10份火焰兰种质基因组DNA为模板,用3对SRAP引物对DNA模板、Mg2+、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs等5个因素的浓度进行优化组合和验证.结果表明,提取的火焰兰基因组DNA纯度高、完整性好;利用引物对Me6/Em6进行PCR扩增,对20个处理初步筛选出扩增条带较清晰,多态性丰富的处理,再用2个DNA模板进行复筛,获得最佳反应体系(20μL):模板DNA 60 ng、Mg2+2.0 mmol/L、引物1.0 μmol/L、Taq DNA聚合酶1.2 U、dNTPs 0.20 mmol/L.最后用2对引物、8份火焰兰种质来验证优化SRAP-PCR体系,其所获条带清晰,多态性丰富.     

木薯体细胞染色体银染显带的带型特点

以木薯(Manihot esculenta)“东方一号”种质为材料，对木薯体细胞染色体银染显带的带型特点进行了观察分析。结果表明，木薯体细胞染色体银染显带不存在核仁组织区域(NOR)的特异性，木薯体细胞所具有的全部染色体(36条)均能显示银染带，每条染色体上有2-5条银染带：根据银染带在染色体上的位置可区分为端粒带、次缢痕带、着丝粒带、居间带4种类型。因此，可将银染带作为木薯染色体的识别标记。对木薯中NOR区的数目也进行了讨论。     

香蜜杨桃果实不同部位的可溶性固形物含量分析

2009年7月在三亚市、五指山市香蜜杨桃果园的不同地段、坡向,采集样品果实,测定果实不同部位及全果实的可溶性固形物（TSS）含量。结果表明,同一果实的下端、中部、上端TSS含量差异极显著,中部、全果TSS含量差异不显著。果实下端TSS含量最高,中部次之,上端最低。果棱间、不同果棱中部TSS含量差异圴不显著。对果实中部、全果TSS含量进行线性回归,呈极显著的直线相关。表明果棱中部TSS含量可直接表示全果TSS含量状况。在环境条件和栽培措施等差异下,果实不同部位TSS含量有一致性的显著性差异,果实下端TSS含量最高,中部次之,上端最低。     

维氏气单胞菌ΔexsA1减毒株对宿主免疫原性研究

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）是一种人鱼共患的革兰氏阴性病原菌。在革兰氏阴性菌中,ExsA能激活Ⅲ型分泌系统(Type Ⅲ secretion systems, T3SS),对宿主产生毒害作用。前期分析基因组研究结果表明,维氏气单胞菌有2个拷贝的exsA基因,推测其毒力调控可能由exsA基因介导。利用同源重组双交换技术构建了维氏气单胞菌ΔexsA1敲除株,采用腹腔注射的方式进行攻毒实验,结果表明,exsA1缺失后维氏气单胞菌毒力显著下降。将ΔexsA1减毒株和野生株分别接种罗非鱼,发现鱼体内血清中免疫球蛋白M（IgM）积累水平上升,在第4天达到峰值;在致死剂量维氏气单胞菌野生株感染下,接种ΔexsA1减毒株对罗非鱼的免疫保护率为70%。ΔexsA1减毒株可为进一步开发维氏气单胞菌减毒活疫苗奠定基础。     

维氏气单胞菌Cbl蛋白的原核表达及纯化

维氏气单胞菌（Aeromonas veronii）引起的细菌性疾病已威胁到鱼类养殖业的发展。Cbl（类CysB蛋白）是细菌硫代谢的重要调控因子之一。本研究选取pET-28a为Cbl的原核表达载体,以大肠杆菌BL21（DE3）为宿主菌,使用IPTG（Isopropyl-beta-D-thiogalactoside,异丙基?β?D?硫代半乳糖苷）诱导表达,用SDS-PAGE凝胶电泳验证蛋白条带,再用BOSTER的BCA蛋白浓度测定试剂盒测量Cbl蛋白浓度,寻找较适宜的蛋白表达条件。结果表明,当诱导时间为8 h,IPTG终浓度为0.1 mmol·L?1,诱导温度为15 ℃,咪唑洗脱浓度为100 mmol·L?1时,Cbl蛋白质量浓度能达到601.405 mg·L?1,可满足后续实验要求。     

海南龙血树基因组DNA提取方法比较

摘 要：为选择一种简单、快速、有效的海南龙血树总DNA的提取方法,分别采用CTAB法、SDS法、SDS-CTAB法和改良CTAB法提取海南龙血树嫩叶片的总DNA,用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计和ISSR对所提取的总DNA进行检测。结果表明,改良CTAB法提取的DNA A260/A280在1.7-1.9之间,纯度高、杂质少、DNA完整性好。以该方法提取的总DNA为模板进行ISSR扩增,谱带清晰,多态性、稳定性、重复性好。该法提取的总DNA适用于PCR扩增和其他分子生物学研究是有效提取海南龙血树基因组的方法。     

海南龙血树种质遗传多样性的ISSR分析

应用ISSR标记,对96份海南龙血树种质的遗传多样性进行研究。从100个ISSR引物中筛选出10个多态性明显、反应稳定的引物,共扩增出134条谱带,平均每个引物能扩增出13.4条带,多态性条带比率达99.25%。材料间遗传相似系数为0.589 6～0.985 1,POPGENE结果分析表明,平均Shannon信息指数(I)为0.370 2,平均Nei’s基因多样性(H)为0.232 1,每位点平均有效等位基因(NE)为1.369 2。用UPGMA法将96份海南龙血树种质分为4大类。     

柱花草DNA提取及ISSR反应体系的正交优化

报道了以新鲜嫩叶提取高纯度、完整性好的柱花草基因组DNA方法.并利用正交设计,从Taq聚合酶、Mg2 、dNTP、DNA模板、引物浓度5个因素、4个水平对柱花草ISSR反应体系进行优化试验,确立了适合柱花草的快速而又高效的ISSR反应体系,即20 μL反应体系中含1×PCR缓冲液,2.0 mmol/L Mg2 ,0.2 mmol/LdNTP,0.4 μmol/L引物,60 ng DNA模板,1 U Taq聚合酶.