液相芯片技术在动物疫病检测中的研究进展

液相芯片技术是整合了激光技术、流式细胞仪、数字信号处理和传统化学技术的一种新型生物分子检测技术,目前广泛应用于各种免疫分析和核酸检测中。液相芯片技术支持单重和多重分析,可在多种测定方法中对蛋白质和核酸靶标进行高通量检测,具有高通量、操作简单、适用范围广、重复性好、特异性高、所需样品量少、更灵敏稳定、成本低等优点,正逐渐代替传统检测和定量病原体的工具,如实时荧光定量PCR扩增检测系统（qPCR）、酶联免疫吸附试验（ELISA）等检测方法。动物传染病严重危害着养殖业健康发展,一些诸如高致病性禽流感的人畜共患病对人类健康造成了严重威胁。高效灵敏的诊断系统将有助于在传染病暴发期间筛选大量样本,防止感染扩散。液相芯片技术的发展为高通量检测和疾病的预防提供了新的平台。作者简要概述了液相芯片技术的原理和优点,重点阐述了液相芯片技术在检测动物疫病,包括猪病、禽病、兔病、犬病、啮齿类动物和其他动物疫病方面的研究进展。相信今后液相芯片技术会成为临床诊断、基础研究、新药开发、司法鉴定、食品卫生监督、生物武器防范等领域的一项重要分析检测技术,该技术的发展将大大推动生命科学研究与进步。     

核酸疫苗的应用研究进展

核酸疫苗不仅引起体液免疫反应,而且诱导高水平的细胞免疫应答,尤其是细胞毒T淋巴细胞(CTL)反应,被认为在病毒、胞内菌、寄生虫等病原体感染的防治中具有更大的优势。核酸疫苗作为近年来发展起来的一项新的生物技术,已经成为疫苗研究领域的热点之一,并获得了迅速的发展。实验结果表明,核酸疫苗既可作为病毒、细菌或寄生虫的预防疫苗,也可作为非感染性疾病如肿瘤病的治疗用疫苗。通过介绍近年来核酸疫苗在病毒、细菌、寄生虫等感染性疾病的预防和治疗等领域的研究进展情况,表明随着分子生物技术的不断发展,核酸疫苗的进一步研究和实践为改善人类和动物健康显示出新的希望。     

犬冠状病毒诊断技术研究进展

犬冠状病毒（canine coronavirus,CCoV）是导致犬胃肠道疾病的常见病原,与其他肠道病原共同感染时犬死亡率显著升高,严重影响养犬业的健康发展。快速、灵敏和特异的诊断技术对该病的防控起到至关重要的作用。除临床诊断外,常见的CCoV实验室诊断技术主要有病毒分离培养、电镜观察及血清学诊断技术,然而这些技术往往耗时长且工作量较大,分子诊断技术主要包括普通RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、纳米PCR等检测方法,这些诊断技术在准确性、敏感性及特异性上有极大提高,诊断效率也显著提高。近年来,随着分子免疫诊断技术与新型材料研发技术的迅速发展,新的检测方法应运而生,纳米金、核酸探针、芯片技术及纳米生物传感器等技术更加敏感、便捷、高效且都具有制备试剂盒的可能性,从而在诊断上具有简洁性和普适性。文章将针对CCoV的诊断技术进行全面综述,以期为CCoV诊断试剂的研发提供参考。     

荧光定量PCR技术及其在动物传染病定量检测中的应用

荧光定量PCR是近年发展起来的一 种新的实时定量检测特定核酸技术,它是核 酸探针技术、荧光共振能量传递技术和PCR 技术的有机结合,而荧光探针是荧光定量 PCR的核心。目前报道的荧光探针主要有 TaqMan、Amplisensor、分子信标、Lightcycler 以及在这4种探针基础上发展起来的其他荧 光探针。各种荧光探针在定量PCR中的作 用是识别和报告特定核酸。这些荧光探针与 相应的靶分子杂交时经历一个自发荧光形成 或消失的构象变化,只有与完全互补的靶核 酸杂交时才会出现这种变化,当靶核酸存在 碱基错配或缺失时,荧光探针就不会与之杂 交,也不会出现荧光的变化。在检测时根据 这种荧光变化来确定检测中特定核酸的存在 和量的多少。荧光探针用于定量PCR不但 提高了PCR的检测灵敏度,还能在同一封闭 管中对模板进行准确定量检测,特别适合特 定核酸扩增的实时监测。荧光定量PCR用 于动物传染病的诊断,不但能定量检测病原 体感染的强弱和在机体内的分布,还具有灵 敏、快速、省力的特点。     

犬瘟热诊断技术的研究进展

近年来,犬瘟热已严重危害了犬及毛皮动物养殖业的健康发展,快速、准确的诊断技术对于犬瘟热的预防显得尤为重要。现阶段犬瘟热诊断技术的研究主要有病毒分离培养与镜检观察、酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫组化、免疫胶体金、核酸杂交、巢式RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、双重PCR、基因芯片、液相芯片、环介导等温扩增等。获得能产生典型细胞病变的易感细胞株是成功进行犬瘟热病毒分离培养与镜检观察的关键。作者就犬瘟热诊断技术的研究进展作一综述,为有效预防和控制犬瘟热的流行和暴发提供简便、高效的检测技术。     

Research Progress on Diagnostic Technique of Canine Distemper

In recent years, canine distemper is a serious damage to health development of dog and fur animal breeding industry.Fast and accurate diagnostic technique is particularly important for canine distemper prevention.At the present stage, canine distemper diagnostic techniques mainly include virus isolation, culture and microscopy observation, enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA), immunohistochemistry, immune colloidal gold technique, nucleic acid hybridization technique, nested RT-PCR, Real-time fluorescence quantitative RT-PCR, double PCR, gene chip technology, liquid phase chip technology, loop-mediated isothermal amplification technology, and so on.The key of isolation, culture and microscopy observation of canine distemper virus is to obtain a susceptible cell lines that can produce typical CPE.We review research progress on diagnostic techniques of canine distemper, so as to provide simple and highly effective detecting technique for preventing and controlling epidemic and outbreak of canine distemper.     

流感病毒核酸检测方法研究进展

流感病毒可以引起人和动物高度接触性传染性疾病,对公共卫生和畜禽养殖业均造成极大的威胁.因此,准确而又快速的诊断方法对流感的防控起着非常重要的作用.近年来,流感病毒的核酸诊断技术发展较快,主要有RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、基因芯片、逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)等.论文对这些诊断技术的基本原理和应用现...     

禽用核酸疫苗的研究进展

核酸疫苗是近 2 0年来发展起来的一种新型疫苗 ,它应用现代生物工程技术和分子生物学技术 ,克服了传统疫苗所存在的一些问题 ,具有传统疫苗不可比拟的优点 ,成为国内外学者争相研究的热点之一 ,呈现出良好的发展势头和应用前景。在禽病学领域 ,禽流感、新城疫、传染性支气管炎、传染性法氏囊等疾病的核酸疫苗得到了较为深入的研究 ,为禽用核酸疫苗乃至其他领域的核酸疫苗的进一步研究提供了有益的参考 ,也将会为养禽业带来不可估量的经济效益。通过对禽用核酸疫苗研究概况的综述 ,不仅可以了解国内外研究动态 ,借鉴最新的研究方法和研究思路 ,也可以发现问题和提出问题 ,进而寻求新的研究方向     

口蹄疫病毒分子生物学检测方法研究进展

口蹄疫是一种高度传染的病毒性疫病,及早诊断意义重大。分子生物学检测方法在口蹄疫病诊断和病毒分型过程中具有许多优势,已经广泛应用。作者对实时荧光PCR法、多重PCR法、核酸杂交法、基因芯片法、环介导等温扩增法及核酸序列依赖扩增法等进行分析和比较,对各种方法的检测效率、灵敏度、优缺点及国内外的研究情况进行综述,为口蹄疫病毒分子生物学检测方法的应用与深入开发提供参考。     

Research Progress on Microbiological Detection Methods for Residual Antibacterials in Animal Food

Antibacterials are used for the treatment or prevention of animal diseases by direct administration or feed additives. The inappropriate use of antibacterials in aquaculture inevitably lead to excessive residue of antibacterials in animal food. Microbiological methods are the earliest methods for the detection of antibacterials residues. Compared with other detection methods, microbiological methods are widely used for detecting residual antibacterials in livestock and poultry, milk and others animal food because it is easy to operate, low cost and high throughput. The purpose of this paper is to review the development history of microbiological methods and its application status for the detection of residual antibacterials in milk, feeding livestock and poultry, eggs, aquatic products and honey, which provides a theoretical and practical basis for the subsequent development of new microbiological methods. This review also makes a prospect of the development of microbiological methods.     

猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法研究进展

实时荧光定量PCR技术是结合PCR技术、光谱技术和计算机技术发展起来的一种新型分子生物学定量检测技术,其融合了PCR技术的高灵敏性、DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确定量的特点,它不仅实现了对核酸模板的定量,而且具有特异性强、灵敏度高、重复性好、准确性高、自动化程度高、速度快、全封闭反应、无污染等优点,在猪瘟疫苗的定量检测、猪瘟的诊断以及猪瘟病毒强、弱毒株鉴别诊断中得到了广泛应用,显示出了良好的应用前景。论文就荧光定量PCR技术及其在猪瘟诊断上的应用做一简要综述,为我国猪瘟的综合防控提供参考。     

动物源性食品中抗菌药残留的微生物学检测技术研究进展

抗菌药通过直接用药或用作饲料添加剂投入养殖业中,用于治疗或预防动物疾病。养殖业不当使用抗菌药,不可避免地造成抗菌药在动物源性食品中残留过量。微生物学法是最早用于抗菌药残留检测的方法,较其他检测方法而言,微生物学法操作简单、成本低、高通量,广泛应用于牛奶、畜禽组织等动物源性食品中抗菌药残留快速筛选检测,为后期的化学分析确证法节约大量成本。文章主要综述了微生物学法的发展历程及微生物学法在牛奶、可食性畜禽组织、鸡蛋、水产品、蜂蜜等动物源性食品中抗菌药残留检测的应用情况,为后续研制新微生物学法提供理论依据和实践基础,并对未来的微生物学法的发展做出展望。     

Detection of animal pathogens by using the polymerasechain reaction (PCR)

The polymerase chain reaction (PCR) is a nucleic acid-based technique that enables the rapid and sensitive detection of specific micro-organisms. Although this technique is widely used in veterinary research, it has not yet found applications in routine microbiological analysis of veterinary clinical samples. However, advances in sample preparation together with the increasing availability of specific gene sequences will probably lead to the more widespread diagnostic use of PCR in the future. PCR is likely to have a strong impact in the epidemiology, treatment and prevention of animal infectious diseases.     

Applications of nucleic acid probes in veterinary infectious diseases

Nucleic acid probe technology is increasingly being used in basic research in veterinary microbiology and in diagnosis of infectious diseases of veterinary importance. This review presents an overview of nucleic acid probe methodology and its applications in veterinary infectious diseases. The major applications of nucleic acid probes include detection of pathogens in clinical samples, especially those organisms which are fastidious and difficult to cultivate, differentiation of virulent from avirulent organisms and vaccine strains from wild type isolates, typing of microorganisms, mapping genes, screening libraries of cloned DNA for specific genes, detection of latently infected or carrier animals, study of mechanisms of pathogenesis, epidemiological studies and food safety.     

数字PCR技术在动物疫病检测中的应用

为了支持动物疫病流行地区的控制及消除计划,以及在动物疫病非流行地区进行有效筛查,必须使用更加准确灵敏的诊断手段。数字PCR可实现绝对定量及痕量核酸的检测,与传统检测方法相比具有不依赖参考物或标准品、对抑制剂具有较高耐受性、灵敏度和精准度更高的优点。数字PCR作为一种定量分析的核酸检测新方法,在动物疫病检测中得到了应用,围绕数字PCR技术的原理、应用、存在的问题及发展趋势等进行综述及分析,为数字PCR在动物疫病检测中的进一步应用提供参考。     

猪细菌性传染病病原检测新方法研究进展

细菌性传染病是生猪养殖业的严重威胁之一，近年来其发病情况呈现出新变化，对动物产品质量和公共卫生安全造成严重危害。对病原进行快速、准确的检测，是预防和控制猪病的有效手段，对养猪业发展和人畜健康具有重要意义。伴随生命科学技术的发展和学科间的交叉融合，传统的病原菌分离培养、普通PCR方法和早期免疫学等检测技术均朝着精确高效的方向不断发展革新，并以传统方法为基础建立了多种新型检测技术。文章重点介绍了猪细菌性传染病病原检测的几种新技术：以核酸分子生物学为基础的实时荧光定量PCR法（qPCR）、环介导等温扩增法（LAMP）、夹心DNA杂交（DNAH）等；以免疫学为基础的免疫胶体金标记技术、时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）、免疫磁珠分离法（IMS）等；以蛋白质分子生物学为基础的细菌质谱鉴定技术；以及适用于现场快速诊断的即时检测（POCT）技术，并分析了这几种新技术的优缺点，为不同条件的检测机构和研究部门在开展猪细菌性传染病检测和研究时选择相应的方法提供一定的参考，以期在猪病预防控制中发挥更加积极的作用。     

荧光定量PCR方法与其他动物疫病病原检测方法的应用比较

荧光定量PCR方法是一种发展较快的新型核酸定量检测技术。本文比较了荧光定量PCR检测方法与其他三种常见的动物疫病病原检测方法(普通PCR、酶联免疫吸附试验、胶体金快速检测卡)的优缺点,结果得出:荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性好,操作简单,结果判定简单、快速。     

几种兽用合成抗菌药基于抗体快速检测技术研究进展

合成抗菌药在预防、治疗动物疾病等方面应用十分广泛,但不合理使用造成的耐药及残留问题日益严重,因此对兽用合成抗菌药的残留检测势在必行,而基于抗体的快速检测技术具有简便、灵敏度高、成本低等优点,发展前景十分广阔。作者综述了近年来针对磺胺类、氟喹诺酮类、喹噁啉类、硝基呋喃类、硝基咪唑类5大类兽用合成抗菌药物的抗体检测技术最新研究趋势,旨在促进残留快速检测技术的发展。     

病毒性动物疫病诊断技术研究进展

动物疫病的大暴发不仅严重影响畜牧业的生产与发展，造成巨大经济损失，而且会严重危害人类健康。病毒性疫病的增加使得动物疫病更加复杂，流行趋势更加严峻。灵敏、特异、快速地诊断动物疫病是实施疫病防控措施的关键环节。基于PCR技术及等温扩增技术的分子生物学诊断解决了传统病原学诊断费时费力、免疫血清学存在的窗口期等问题并摆脱了对高精度温控设备的依赖，成为目前常用的病原体筛查方法。但大多数检测方法一次只能检测到一个或几个病原体，且复杂的试验流程及对设施的高要求降低了立即干预突发疫情的能力，同时无法满足某些检测分析需求。近年来，学科间相互渗透融合的高通量诊断技术发展迅速，具有同时监测、检测和表征成百上千个靶点的能力，能满足在多种环境下的病原体快速检测的需求，是生命科学发展过程中一种重要的生物学检测手段。笔者从病原学、免疫血清学、分子生物学及高通量诊断等方面对主要的病毒性动物疫病检测技术进行了综述，展望未来动物疫病诊断检测技术的发展，以期为动物疫病快速诊断提供更多的方案思路，提升动物疫病的防控能力。     

新型分子诊断技术在动物疫病检测中的应用与发展

快速有效的病原体检测对于动物疫病的防控和治疗有着非常重要的作用。近年来基于PCR扩增技术的新型分子诊断技术与传统的分子诊断技术相比,对病原体的检测更加快速、特异、敏感、准确,逐步向着分子检测的自动化、高通量和现地使用方向发展。日渐成熟的新型分子诊断技术对于动物疫病检测与鉴别以及出入境检验检疫等领域有着广阔的应用前景,同时可进行大范围的流行病学调查和分析,为动物疫病的科学防控奠定基础。