水貂株犬瘟热病毒融合蛋白基因的克隆与序列分析

以犬瘟热病毒水貂分离株RNA为模板,经RT-PCR反应,扩增出融合蛋白基因的1053bp DNA片段,通过T-A克隆技术,成功构建克隆载体PMD-18T/F。序列分析表明:分离株与01-2689株、2544-Han95株、A75-17株、DOGDK91C株、00-2601株、ONP株、PDV-2株核苷酸序列同源性分别为94.3%、93.5%、94.4%、93.6%9、5.3%、97.3%和94.5%;氨基酸序列同源性分别为97.2%、96.6%、97.4%、97.4%、97.4%、97.2%和98.0%。抗原指数分析表明分离株与疫苗ONP株、强毒A75-17株在40-50位氨基酸间存在明显差异。     

犬瘟热病毒疫苗株附着蛋白基因的克隆及同源性比较

根据发表的犬瘟热病毒(CDV)参考株Ondetstepoort的序列设计1对引物,以犬瘟热病毒疫苗株感染Vero细胞总RNA为模板,利用RT-PCR扩增出附着蛋白基因843 bp片段,将这个片段连接到pMD18-T载体上,经过PCR鉴定、酶切鉴定得到1个阳性克隆,将阳性质粒进行序列测定,结果表明,该片段与Onderstepoort株核苷酸同源性为95.9%。从基因角度为犬瘟热的预防、诊断和治疗提供理论依据。     

犬瘟热病毒水貂分离株F基因真核表达载体的构建与表达

为了构建犬瘟热病毒F基因真核表达载体,利用RT-PCR方法扩增出水貂源犬瘟热病毒分离株的F基因,将其克隆至pMD-18T载体上,用BamHⅠ和KpnⅠ进行双酶切,回收目的基因。将目的基因亚克隆至pcD-NA3.1(+)中,获得真核重组质粒pcDNA3.1-CDVF。通过脂质体介导法将pcDNA3.1-CDVF转染至BHK-21细胞中,并利用间接免疫荧光试验和RT-PCR法检测pcDNA3.1-CDVF在BHK-21细胞中的表达情况。结果表明,真核重组表达质粒pcDNA3.1-CDVF构建成功,F基因可在BHK-21细胞中表达。     

梅花鹿IFN-α基因的克隆与原核表达研究

为研究梅花鹿IFN-α的抗病毒功能和分子机制,根据GenBank中牛IFN-α基因序列(A00145),设计并合成1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-α全基因核苷酸序列。序列分析表明梅花鹿IFN-α基因全长570 bp,编码189个氨基酸,其中含18个氨基酸的信号肽和169个氨基酸的成熟多肽,存在1个潜在跨膜区,基因随不同物种发育进化地位表现出种属间的差异性。在此基础上,合成1对引物,扩增梅花鹿IFN-α成熟肽核苷酸序列,构建pET28a-IFNα原核重组表达质粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中。SDS-PAGE和Western blotting检测结果表明,在24 kd左右出现特异性蛋白带,表达产物主要为不溶性的包涵体,表达量占菌体总蛋白的34.04%,且表达产物与抗His标签抗体可发生特异性反应。将Ni柱纯化的pET28a-IFNα诱导表达产物复性后,细胞病变抑制法检测表明表达产物具抗病毒活性。研究结果为梅花鹿IFN-α蛋白抗病毒分子机制的研究及抗病毒药物的开发奠定了基础。     

鹿皮胶原蛋白的提取及特性研究

胶原蛋白因具有独特的氨基酸组成和结构,被广泛地应用于医疗、食品及美容等领域。选取鹿皮为原料,通过酸水解和酶水解结合法提取胶原蛋白,其提取率可达32.38%,进一步分离纯化,通过测定原料中羟脯氨酸的含量换算后得出其所含胶原蛋白含量为9.912%。通过SDS-PAGE测定胶原蛋白的分子量为30万,并对其自由基清除能力进行了研究,在测定范围内,随着胶原蛋白浓度的增加,其自由基清除能力均增大,高浓度时其清除能力较强。     

东亚飞蝗多肽提取工艺优化及对大鼠高脂血症的影响

以东亚飞蝗为原料提取多肽,利用动物试验验证其多肽对高脂血症的抑制作用,为昆虫资源开发提供新的思路和理论依据。采用酶解提取法从东亚飞蝗中分别提取多肽,利用正交试验,采用单因素考察等方式,设置四因素三水平对东亚飞蝗多肽提取工艺进行优化。随后利用东亚飞蝗多肽对大鼠进行降血脂试验,采用5周龄SPF级SD雄性大鼠40只,分别设置正常饲料组（正常对照组CON）、模型组（HFD组）、阳性对照组（氟伐他汀钠组AC）、多肽试验干预组（PE8）,喂食4周。结果表明：多肽提取最佳工艺为反应时间3 h,反应温度40℃,料液比1∶8,酶质量分数0.3%。动物试验经过东亚飞蝗多肽干预后,血清中总胆固醇（P<0.01）、甘油三酯（P<0.01）、低密度脂蛋白（P<0.01）、高密度脂蛋白（P<0.05）显著降低。综上,东亚飞蝗多肽可以改善高脂血症大鼠症状,并通过改善脂肪代谢紊乱,减轻肝脏脂肪堆积,达到对高脂血症的预防效果。     

用链烷烃作为内源指示剂测定绵羊的消化率

6只阉公绵羊喂给再生长3周的黑麦草450kg，用全收粪法测得的干物质消化率为80．5％，用31碳（C31）和33碳（C33）的链烷烃作为内源指示剂估测的干物质消化率分别为81．5％和79．6％。用C1估测的消化率高于C33（P＝0．031），但用该两种链烷烃估测的消化率与用全收粪法测得的消化率无显著差异（P＞0．05）。     

犬瘟热病毒水貂株H与F蛋白基因原核表达重组质粒的构建及表达

将克隆质粒pMD-18T-H和pMD-18T-F分别进行双酶切,获得纯化的H基因和F基因,在T4DNA连接酶的作用下,亚克隆到原核表达载体pET28a(+)上,获得原核重组质粒pET28a-H和pET28a-F.将原核重组质粒转化大肠埃希菌Escherichia coli Rosetta2(DE3)中进行表达,SDS-PAGE结果显示H基因和F基因分别表达相对分子质量约为31 400和38 200的融合蛋白,Western-blot检测结果显示,表达蛋白均可与CDV标准阳性血清呈阳性反应,表明原核表达的CDV H蛋白和F蛋白在反应原性上具有与天然H蛋白和F蛋白同样的特性,可作为CDV诊断用抗原,为CDV的免疫预防研究奠定基础.     

梅花鹿血与发酵梅花鹿血酒氨基酸含量的比较分析

利用 8 35 50型氨基酸分析仪对梅花鹿血及发酵梅花鹿血酒的氨基酸含量进行了分析测定 ,结果表明 ,二者均含有 1 7种氨基酸 ,总氨基酸含量梅花鹿血高于发酵梅花鹿血酒 ,而各种游离氨基酸的含量 ,却是后者高于前者 ,且后者是前者的 3～ 1 0 3倍。