牛结核ELISA及其抗原的比较研究

作者采用4种抗原建立了ELISA检测牛结核血清抗体的方法,并对其进行了比较。以结核清净声场1026头牛血清建立了ELISA阴性平均值(X),以X±3SD为临界值检测了结核菌素变态反应阳性牛118头,各抗原ELISA阳性率分别为:PPD53％,KCl浸出抗原64％,Triton X-100浸出抗原60％,聚合OT56％。在屠宰牛中对6头变态反应阳性,39头变态反应阴性牛进行了符合试验,ELISA与病变及细菌培养有高的符合率。通过对其它疾病和分枝杆菌免疫血清的检测,证明ELISA法检测牛结核有较好的特异性。4种抗原中以Triton x-100浸出抗原最佳。     

牛副结核ELISA诊断方法研究

本文建立了牛副结核病ELISA诊断方法。采用亲和层析抗原。被检血清以高压粉碎草分枝杆菌吸收原进行吸收。该方法的敏感性76％,特异性97％,通过对2483头奶牛进行检测,检出率为6.1％,并与常规的补反和变态反应进行了比较。作者认为:牛副结核ELISA可以替代补反,做为检测牛副结核的一种有力手段。     

ABC-ELlSA技术在禽网状内皮组织增殖病抗体检测上的应用

建立了检测禽网状内皮组织增殖病(KE)抗体的ABCELISA技术,并用此法检测250份鸡血清、80份鸭血清、60份2日龄肉杂鸡血清,阳性检出率分别为17.6％、21％、1.69％。采用ABC-ELISA、间接ELISA和IF三种方法对REV抗体进行检测比较表明,ABC-ELISA最敏感,其敏感性分别为后二种方法的4倍和16倍。     

ELISA、补体结合反应、变态反应诊断牛副结核病的比较

应用 ELISA、补体结合反应和变态反应检测牛副结核病,结果,ELISA 的检出率为6.7%,补反为2.2%,变态反应为3.7%。应用三种方法对49头粪便检菌阳性牛进行诊断比较,结果,ELISA与粪便检菌的符合率为93.9%,补反为57.1%,变态反应为52.9%。检测部分有副结核临床症状的牛,ELISA 检出率为88.2%,补反为50%,变态反应为25%。     

间接ELISA检测牛分枝杆菌抗体方法的建立及初步应用

针对现行牛结核病检疫方法结核菌素皮内变态反应(TST)的不足,本研究选用牛分枝杆菌特异性抗原MPB83、MPB70及CFP10与ESAT-6融合蛋白(CFP10-ESAT-6)分别建立了检测牛分枝杆菌特异抗体的间接酶联免疫吸附方法(ELISA)。上述3种抗原中一种以上抗原的特异性抗体为阳性时,即可判断为结核检测阳性。以TST为标准,判断ELISA方法的敏感性与特异性。结果证明,ELISA方法具有较好的敏感性(71.4%)。对ELISA检测为强阳性的奶牛进行细菌分离,并对5头结核菌分离阳性奶牛进行TST检测,结果有3头为TST阳性,2头可疑,显示出ELISA方法对严重感染牛的检测较TST具有更高的敏感性。由于TST与ELISA分别以细胞免疫与体液免疫为基础,两种检测方法结合应用可进一步提高牛结核病的检出率。     

牛病毒性腹泻病毒不同检测方法的比较研究

采用Idexx公司抗原捕获ELISA试剂盒对新疆部分地区160份牛血清进行了牛病毒性腹泻病毒抗原检测,结果有6份样品为阳性,对该6份血清用BVDV阴性血清进行了系列稀释后,分别用抗原捕获ELISA、RT-PCR和荧光RT-PCR进行检测,发现RT-PCR方法比ELISA检测灵敏度高10-100倍,荧光RT-PCR比RT-PCR灵敏度高约10-100倍。     

ELISA方法检测奶牛结核病的效果评价

牛结核病是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)引起的一种慢性消耗性人畜共患病。该病可通过排泄物及分泌物等进行传播,严重威胁畜牧业的发展及城乡居民的身体健康。为保障牛奶、牛肉等畜产品市场安全和人民生命健康安全,牛结核病的防控意义不言而喻。本文以PPD变态反应为检测标准,对ELISA检测结果进行评价,论述了ELISA方法在牛结核病检测中的使用可行性,以期为临床生产中牛结核病的检测提供数据支持。     

牛环形泰勒虫ELISA裂殖体抗原制备和应用研究

本文报道了牛环形泰勒虫(Theileria annulata(简称环泰虫)裂殖体抗原的制备和ELISA在诊断环泰虫病、检测免疫牛抗体水平和确定虫种间血清学关系等方面的应用。应用冻融研磨法制备的抗原进行ELISA,检测25头份带虫牛血清,阳性符合率为96％,检测30头份阴性牛血清,阴性符合率为100％;一个样本重复性试验的变异系数为9.52％,多个样本重复试验的结果基本一致。表明ELISA具有较高的特异性和重复性,ELISA检测环泰虫疫区牛,阳性检出率为61.02％(镜检法为38.98％)。ELISA值的高低,与环泰虫带虫牛的红细胞染虫率呈正相关。检测49头份非疫区牛血清,结果均为阴性。用作检测免疫牛抗体水平,32头份重环泰虫裂殖体细胞胶冻苗免疫的牛血清,7个月后ELISA值仍明显高于健牛(未免疫),有62.5％在阳性范围内。检测其他种属虫体血消.不与伊氏锥虫、贝氏贝诺孢子虫和牛肉孢子虫血清发生交叉反应。检测瑟氏泰勒虫血清,有11/12的阳性反应率,初步证实环泰虫与瑟氏泰勒虫有密切的血清学关系。     

五省牛、羊和猪口蹄疫疫苗免疫效果的试验

为了监测O、A和AsiaⅠ型口蹄疫疫苗免疫后引起的抗体水平,采用口蹄疫液相阻断ELISA法和病毒非结构蛋白3ABC-ELISA法对我国云南、内蒙古、甘肃、新疆和西藏的部分地区牛、羊和猪的血清样品共65591份进行三型口蹄疫抗体水平监测。液相阻断ELISA方法显示加强免疫后各地合格率均能达到100%;非结构蛋白3ABC-ELISA方法显示五省抗体检测合格率分别为91.13%、88.38%、78.04%、88.15%和85.15%;不同动物口蹄疫分型抗体检测结果以云南最高(均在85%以上),其它四省抗体检测合格率均在70%以上。结果表明,该疫苗免疫可产生较好的免疫效果。     

双抗体夹心阻断ELISA检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病病毒抗体的研究

本研究建立了检测血清中牛病毒性腹泻-粘膜病(BDV-MD)病毒抗体的双抗体夹心阻断ELISA,并用其检测了长春地区293头奶牛和262头黄牛的血清.结果,奶牛的阳性率为54.9％.黄牛的阳住率为43.5％.本方法是一种敏感、特异、快速的检测抗体方法,可在基层推广应用.     

聚合OT抗原ELISA检测牛结核血清抗体

以聚合OT为抗原的ELISA检测了结核清净场1026头牛血清的ELISA值((?)=0.07,SD=0.05)。以(?) 3SD为临界值,检测了结核菌素(OT)变反阳性牛118头,阳性率56％。屠宰牛中,OT变反阳性6头,3头有结核病变,细菌学检查阳性,ELISA阳性;另3头无可见病变,1头有肝片吸虫寄生,2头细菌分离培养在肺门淋巴结培养出快生长抗酸菌,此3头ELISA阴性,检测了四种疾病及三种分枝杆菌免疫血清,阳性1例,交叉反应率1.75％。     

ELISA在牛病毒性腹泻病检测中的应用

牛病毒性腹泻病呈世界性分布,在许多养牛业发达国家尤其严重,造成该病广泛流行的主要传染源是牛群中存在持续性感染牛,因此建立起特异、敏感、简便且快速的诊断方法来检疫、淘汰持续性感染牛是防制该病的关键之一。ELISA因其特异性强,敏感性高,重复性好,方法快速、简便,设备简单等优点,而得到日益广泛的应用,愈来愈受到人们的重视。目前,应用ELISA检测牛病毒性腹泻病毒已有不少研究,主要包括抗原捕获ELISA、间接ELISA、ABS-ELISA、双抗体夹心ELISA、单抗夹心ELISA、竞争ELISA以及M-ELISA等。文章就这几种检测方法的研究进展进行了概述,为进一步控制牛病毒性腹泻病毒提供参考。     

国内外口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体ELISA检测方法的比较

对国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA检测方法和1种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体阻断ELISA检测方法,在检测牛血清时的敏感性和特异性进行比较,以期获得可应用于口蹄疫检疫的有效试剂盒。采用国内外3种口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体间接ELISA试剂盒和1种阻断ELISA试剂盒,对150份牛血清样品进行ELISA检测。同时对150份样品进行非结构蛋白抗体酶联免疫电转移印迹试验(EITB),以评估4种ELISA检测结果。结果 4种试剂盒的敏感性均达到100%,特异性分别为100%、95%、73%、99%。结论:国内生产的口蹄疫非结构蛋白3ABC抗体检测试剂盒可以用于牛口蹄疫血清学筛选性试验。     

不同ELISA试剂盒检测牛结核病效果比较

本研究对自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒与商品化试剂盒进行了比较。用自行研制的双夹心ELISA试剂盒对1255份经牛PPD刺激的牛全血培养上清样品进行了检测,结果发现94份阳性样品,检测阳性率为7.5%。同时用进口的ELISA试剂盒对其中的472份样品进行了对比检测,两者阳性符合率为97.6%,阴性符合率为96.4%,总符合率为96.6%。比较检测结果证明,自行研制的检测牛γ干扰素的双夹心ELISA试剂盒有很好的应用前景。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)诊断牛日本血吸虫病的研究

对707头牛进行了酶联免疫吸附试验,其中感染血吸虫牛200头,检出率为97.5～97.7％,368头未感染血吸虫牛阴性符合率为97.2～98.5％,对寄生肝片吸虫、双口吸虫、东毕吸虫、棘球蚴牛共81头试验结果仅1头寄生肝片吸虫牛呈阳性反应,80头牛是阴性反应,说明ELISA用于牛血吸虫病诊断具有较高的敏感性与特异性,对基本消灭血吸虫病地区的现场试验也取得相似结果,说明BLISA是一种诊断牛血吸虫病较好的方法。     

γ-干扰素ELISA检测方法在牛结核病流行病学调查中的应用

[目的 ]了解宁夏贺兰县奶牛结核病的流行情况,为制定宁夏地区牛结核病净化方案提供参考。[方法 ]2015年采用皮内变态反应和γ-干扰素ELISA检测方法,对宁夏贺兰县2个规模化奶牛场开展牛结核病流行病学调查,共检测奶牛2 230头。[结果 ]在2个规模化奶牛场累计检测出皮内变态反应阳性奶牛79头,皮内变态反应和γ-干扰素ELISA双阳性奶牛72头,双阳性率为3.23%(72/2 230)。[结论 ]γ-干扰素ELISA检测方法准确度较高;在对牛群进行结核病检测时,先以皮内变态反应方法筛测,再结合γ-干扰素ELISA检测结果确诊,更有利于牛结核病的检测与净化。     

评价ELISA方法在奶牛结核病检测中的应用

本实验通过PPD变态反应对ELISA检测结果进行评价,为ELISA方法在牛结核病检测中使用的可行性提供一定的数据支持。     

牛冠状病毒重组N蛋白间接ELISA检测方法的建立

为建立牛冠状病毒(BCV)检测方法,利用构建的pET30a-N重组质粒高效表达了BCV重组N蛋白.western blot检测该重组蛋白具有很好的免疫活性.以纯化的蛋白作为包被抗原,通过方阵试验确定了抗原的最适包被浓度为1.75 μg/mL,血清最佳稀释倍数为1:200,酶标二抗最佳稀释倍数为1:8 000,建立了检测BCV抗体的间接ELISA方法.用该法对黑龙江一些地区采集到的256份牛血清样品进行检测,结果阳性率为65.23%,与病毒中和试验方法的检测结果符合率达95.31%.本研究建立的间接ELISA方法为BCV的检测和区域流行病学调查提供了一种快速简便的血清学诊断方法.     

SICT与ELISA法在奶牛结核病检测中的应用试验

为准确评估宁波市镇海区奶牛结核病检测中阳性牛的感染率,对现存奶牛养殖场的184头奶牛,分别采用SICT与ELISA检测方法进行检测,对这两种方法的检出率、符合率进行比较分析。经试验,SICT与ELISA两种检测方法奶牛结核病阳性牛的检出率分别为1.63%(3/184)和0.54%(1/184),且SICT法的阳性检测率高于ELISA法,两种检测方法的阳性符合率为33.3%(1/3)。     

间接ELISA检测禽霍乱血清抗体的研究

比较不同ELISA包被抗原对禽霍乱免疫血清的检测结果,选择最佳的包被抗原建立禽霍乱血清抗体的间接ELISA检测方法.分别 使用超声波裂解抗原、脂多糖蛋白抗原和全菌抗原作为包被抗原,应用间接ELISA方法检测 禽霍乱免疫血清,并对不同抗原建立的ELISA方法进行重复性试验.根据三种抗原对 免疫血清的检测结果以及重复性试验,发现全菌抗原的敏感度、特异性、稳定性均优于其他 两种抗原.全菌抗原作为ELISA包被抗原用于禽霍乱血清学检测具有敏感度高、特异性强、稳定性好的特点.