鹧鸪茶种质资源ISSR分子标记中的引物筛选

[目的]为快速和准确地对鹧鸪茶种质材料进行ISSR分析提供有效引物。[方法]基因组DNA的提取采用改良的CTAB法。利用99个ISSR引物,对来自海南岛境内的10个居群中共20份鹧鸪茶种质材料进行PCR扩增,以筛选出适合于所有鹧鸪茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[结果]从99条供试引物中共筛选出15条多态性丰富、条带清晰且可重复性良好的有效引物。用筛选出的15条引物对66份鹧鸪茶种质材料进行ISSR-PCR扩增,均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱;共扩增出286条DNA谱带,其中231条为多态性带,占总扩增带数的80.77%,平均每个引物扩增出19.1条谱带。[结论]所筛选的15条引物可以有效地应用于鹧鸪茶种质资源材料的ISSR分析。     

文心兰品种变异RAPD分子检测技术的建立及应用

通过对DNA提取方法的改良,随机引物的选择、RAPD反应条件的筛选,建立文心兰品种变异RAPD分子标记检测技术。利用该技术对3个母本园品种和1个试管苗品种进行RAPD检测,结果是品种“黄金2号”和“黄金3号”未发现变异;7个引物对品种“新奇士”共扩增出63条清晰带,3个样品带型发生变化,样品变异率为10％;14个引物对“黄金2号”试管苗共扩增出119条清晰带,9个样品带型发生变化,样品变异率为9．4％。结果表明,该技术能有效用于文心兰品种的变异检测。     

女贞ISSR分子标记的引物筛选

利用60个ISSR引物，对来自不同地域的12份女贞种质材料进行PCR扩增，筛选出12个多态性丰富、条带清晰且重复性良好的、适合于所有女贞种质材料进行ISSR分析的有效引物。筛选出的12个有效引物对12份女贞种质材料进行ISSR—PCR扩增，均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱，共扩增出228条DNA谱带，其中210条为多态性带，占总扩增带数的92．1％，平均每个引物扩增出19条谱带。本试验筛选的12条引物可以有效地应用于女贞种质资源材料的ISSR分析。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

浙江红山茶总DNA提取及ISSR-PCR引物筛选

[目的]筛选出简易的DNA提取方法及适合于所有浙江红山茶种质材料进行ISSR分析的有效引物。[方法]采用改良的CTAB法提取基因组DNA,参考其他山茶科植物的50个ISSR引物,对来自浙江、福建、江西、安徽10个居群中共20份浙江红山茶种质材料进行了PCR扩增。[结果]改进的CTAB法可简单、快速地提取到高纯度DNA产物;筛选出的20条引物多态性丰富、条带清晰且可重复性良好。共扩增出337条DNA谱带,其中281条为多态性带,占总扩增带数的83.4%,平均每个引物扩增出16.85条谱带。[结论]所筛选的20条引物可有效应用于浙江红山茶种质资源材料的ISSR分析。     

龙眼限制生长保存EC体胚再生植株的RAPD分析

利用筛选的10条随机引物,对龙眼胚性愈伤组织(embryogenic callus,EC)限制生长保存后体胚再生完整植株基因组DNA进行扩增。结果表明,龙眼EC不同保存年限(5个月、3年、13年)体胚再生完整植株RAPD谱带存在一定差异,保存5个月的EC体胚再生完整植株共扩增出371条谱带,其中有37条变异谱带,变异率为9.70%;保存3年的EC体胚再生完整植株共扩增出352条谱带,其中有47条变异谱带,变异率为13.07%;保存13年的EC体胚再生完整植株共扩增出365条谱带,其中有55条变异谱带,变异率为15.07%。由此可见,长期限制生长保存后EC再生的体胚苗变异率趋于稳定。     

河南省蝙蝠科7种蝙蝠的RAPD分析

为了解蝙蝠科种间亲缘关系,采用随机引物对河南省蝙蝠科7种蝙蝠进行DNA多态性研究,从20个随机引物中优化出12个引物对基因组DNA进行扩增,共扩增出223条DNA谱带,平均每个引物扩增出18.6条谱带。RAPD聚类结果表明,种间亲缘关系较远,种内亲缘关系较近。对同种蝙蝠而言,同一地理区域的蝙蝠个体之间分化较小,不同地理区域的蝙蝠个体之间分化较大。同时对鼠耳蝠属和长翼蝠亚科的分类地位也进行了讨论。     

滩地13个杨树无性系遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记手段,研究杨树无性系的遗传多样性。在探讨杨树叶片基因组DNA提纯方法和优化PCR扩增反应体系的基础上,采用18个引物对13个杨树无性系的基因组DNA进行扩增;每个引物扩增的DNA片段数为1～14个,共产生126条带,其中多态带53条,占42%,平均每个引物扩增出3条多态带。结果表明:通过对126条谱带的聚类,分析了供试杨树无性系的系统发育,并通过比较各品种间的特异带或特征带的差异进行无性系鉴别和测定,运用特殊谱带,建立了杨树无性系的分子检索表。     

RAPD技术在志贺菌及沙门菌鉴别中的应用

以鸡鲍氏志贺菌、鸡白痢沙门菌和痢疾志贺菌为研究对象,分别提取基因组DNA,利用6条随机引物以随机扩增多态性DNA(RAPD)技术对其基因组DNA进行了分析.结果表明,4条随机引物能较好地在这3种菌中检测到多态性分子标记.共扩增出了59个DNA片段,其中3个菌株共有的谱带有7条,而显示多态性的片段有52条,占88.1%.引物P6的扩增图谱可用于3株细菌的鉴别.在对3株细菌扩增中发现,鸡鲍氏志贺菌与人痢疾志贺菌的扩增条带相同率达67%,但各有自己的特征性谱带.鸡沙门菌与志贺菌的扩增谱带相差甚远.     

鹧鸪茶种质资源ISSR分子标记中的引物筛选（摘要）

[目的]为快速和准确地对鹧鸪茶种质材料进行ISSR分析提供有效引物。[方法]基因组DNA的提取采用改良的CTAB法：先用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测DNA完整性,EB染色,以Lambda DNA/HindⅢ＋Eco RIMarkers为参照,电泳结果用Gel Doc XR型凝胶成像分析系统下照相并记录。再用Biophotometer紫外分光光度计分别测定OD_（260）和OD_（280）,并计算出OD_（260）/OD_（280）值,每份样品的OD_（260）/OD_（280）比值均要求在1.8～2.0范围内。测定每份样品DNA浓度（ng/μl）,并将其稀释至20 ng/μl,分装后置-20℃保存。利用99个ISSR引物,对来自海南岛境内的10个居群中共20份鹧鸪茶种质材料进行PCR扩增,以筛选出适合于所有鹧鸪茶种质材料ISSR分析的有效引物。[结果]从99个供试引物中共筛选出15个多态性丰富、条带清晰且可重复性良好的有效引物。用筛选出的15个引物对66份鹧鸪茶种质材料进行ISSR-PCR扩增,均可获得带型丰富和清晰可辨的DNA指纹图谱;15个引物共扩增出286条DNA谱带,其中231条为多态性带,占总扩增带数的80.77%,平均每个引物扩增出19.1条谱带。[结论]所筛选的15条引物可以有效地应用于鹧鸪茶种质资源材料的ISSR分析。     

WHBE兔遗传特异性的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔进行了遗传分析.用10个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增.根据电泳结果选用其中8个引物扩增的条带进行遗传分析,共检测到107条扩增片段,其中多态性片段32条,占29.91%,反映了家兔品系间的遗传变异.多态性统计分析表明,WHBE免和日本大耳白兔的遗传相似度最高,为0.7948.其中4个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出不同品系的特征条带,表明WHBE兔与日本大耳白兔和新西兰兔之间有遗传的相似性,也存在遗传差异.这些结果表明应用RAPD技术可以很好地检测家兔不同品系间以及同一品系不同个体间的亲缘关系.     

槟榔江水牛群体遗传结构的RAPD分析

 为探讨RAPD标记在水牛遗传多样性方面检测的应用价值，以及了解槟榔江水牛的群体遗传结构状况，研究采用随机扩增多态性DNA标记技术对槟榔江水牛20个个体进行了遗传变异分析，从70个随机引物中筛选出15个多态性丰富的引物对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增，结果15条引物共产生105种扩增片段，多态片段95条，平均每条引物的扩增带数为7，各引物多态性片段范围在2～12之间，多态频率在40%～100%之间，多态座位平均为90.48%。表明槟榔江水牛的遗传多样性较丰富。     

枸杞属两个种的RAPD遗传多态性分析

采用优化的CTAB法提取宁杞1号和黑果枸杞的叶片基因组DNA,利用紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳检测所得DNA的浓度和纯度,并进行PCR扩增。从101个引物中筛选出12个10 bp的随机引物对这两种枸杞的DNA样品进行RAPD扩增,共得到111条谱带,61条表现出多态性,多态性比率达54.95%。结果表明,宁杞1号与黑果枸杞的相似系数S=0.618,遗传距离D=0.382。     

葡萄种质资源的RAPD分析

对15个葡萄品种进行RAPD分析。从60条随机引物中筛选出10个多态性引物用于DNA扩增,共扩出71条DNA带,其中多态性DNA带47条,占总数的66.2%。通过聚类分析,分成4大类,美洲葡萄类群康可、奇妙无核自成一类,与欧亚种、欧美杂种分开;其中森田尼无核、无核白遗传关系近,最先聚在一起。该结果显示,欧亚类群遗传差异较大,具有丰富的遗传多样性,证明RAPD技术能在DNA分子水平上揭示葡萄遗传背景及亲缘关系。     

四川主栽小麦品种RAPD标记遗传差异研究

采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ） 标记,对四川近５０ 年来年推广面积６－６７ 万ｈｍ２（１００万亩）以上的４０ 个小麦主栽品种遗传差异进行了初步探讨。结果表明,５５ 个随机引物中,有３２个引物（ 占５８－２％ ） 扩增产物具有多态性。３２ 个引物共扩增出１８５ 条带,其中９３ 条带（ 占５０％ ）具有多态性,每个引物可扩增出１ ～１１ 条多态性带,平均２－９ 条。４０ 个品种ＲＡＰＤ 标记遗传距离（ＧＤ） 变异为０－０１９ ～０－４７５ ,平均ＧＤ 值为０－２２１。聚类分析表明,在ＧＤ 值０－２３ 水平上,４０ 个品种可聚为５ 类。一些随机引物对有些品种能进行特异性扩增。引物ＯＰＮ１４ 对小麦１ＢＳ 扩增能产生特异性ＤＮＡ 片段,能完全鉴定出４０ 个供试品种中的９ 个１ＢＬ／１ＲＳ小麦－ 黑麦易位系品种。据此认为,ＲＡＰＤ标记可以作为小麦品种鉴定的指纹图谱。     

Classification and Genetic Diversity of Kentucky Bluegrasses by Using RAPD Markers

Total 69 random primers were screened out through RAPD （Random Amplified Polymorphic DNA） markers to analyze the genetic bands of 32 Kentucky bluegrass cultivars. A total of 197 bands were amplified from 46 primers of them, among which 195 bands were polymorphic. Each primer could amplify one to nine polymorphic bands with an average of 4.3 being amplified from an average of primer. Based on the similarity coefficient analysis of RAPD results, NTSYS software and cluster analysis by using average UPGMA method, the result showed that 18 of 32 cultivars were in group 1, three cultivars were in group 2, two cultivars were in group 3, eight cultivars were in group 4, and there was only one cultivar in group 5, which was C2.     

Study on Classification and Genetic Diversity of Kentucky Bluegrasses by Using RAPD Markers

A total of 69 random primers were screened by using random amplified polymorphic DNA (RAPD) markers to analyze the genetic bands of 32 Kentucky bluegrass cultivars. A total of 197 bands were amplified ...     

黄果及红果人参、西洋参基因组的RAPD分子标记研究

利用RAPD技术对人参属(Ginseng)黄果人参、红果人参、黄果西洋参及红果西洋参基因组进行了分析。共采用15个随机引物，其中14个引物的扩增带型在不同品种间出现差异，共扩增出131条带，多态性达59．5％。聚类分析结果表明：人参与西洋参各自聚为一类，彼此遗传距离较远，黄果西洋参与红果西洋参、黄果人参与红果人参遗传距离均较近，但也存在着一定程度的核苷酸序列差异。RAPD及聚类分析结果与形态学和细胞学等分析结果基本一致，证实了RAPD分析方法是人参属系统分类、品种鉴定的有效方法。     

云南鹅群体遗传结构的随机扩增多态DNA分析

 采用随机扩增多态性DNA标记技术对云南鹅主产区6个不同地点的45个个体进行了群体遗传学分析，从85个随机引物中筛选出的23个引物对所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增，共检测出178条DNA片段，其中150条属多态性片段（多态率84.27%），计算了各座位在群体中的基因频率、杂合度和群体Shannon多样性指数等参数。结果表明：云南鹅的群体遗传变异较丰富。