大麦-小麦无抗型日粮添加壳聚糖和非淀粉多糖酶对肉鸡生长性能和盲肠微生物组成的影响

试验旨在研究大麦—小麦无抗型日粮中添加壳聚糖(CTS)和非淀粉多糖(NSP)酶对1~42 d肉鸡生长性能、空肠组织结构和盲肠微生物组成的影响。选择720羽1 d ROSS 308商品代肉仔鸡,随机分为4组,每组6个重复(30羽/重复),对照组饲喂以大麦—小麦为主的基础日粮,CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组饲喂含300 mg/kg CTS、200 mg/kg NSP酶和150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶的日粮,试验期42 d。结果显示:CTS组、NSP酶组和CTS+NSP酶组较对照组显著提高了21 d、42 d肉鸡末重和1~21 d、1~42 d肉鸡平均日增重(P0.05)。CTS+NSP酶组较对照组、CTS组和NSP酶组显著降低22~42 d及1~42 d料重比。CTS组和CTS+NSP酶组1~42 d肉鸡胸腺指数显著高于对照组和NSP酶组(P0.05)。日粮添加CTS+NSP酶较其他各组显著降低了空肠隐窝深度(P0.05),显著提高了空肠绒毛高度与隐窝深度比值(P0.05)。NSP酶组或CTS+NSP酶较对照组和CTS组显著提高了盲肠乳酸杆菌含量(P0.05),与对照组相比,CTS组、NSP酶组或CTS+NSP酶组均显著降低了盲肠大肠杆菌数量(P0.05)。综合考虑,本试验中150 mg/kg CTS+100 mg/kg NSP酶应用效果最佳。     

版纳微型猪近交系PPP2CA克隆、表达及蛋白质功能生物信息学分析

蛋白磷酸酶2A(protein phosphatases of the type 2A, PP2A)是一种广泛表达的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶,介导蛋白质的去磷酸化从而调控多种关键信号通路的活性。该酶由催化亚基、结构亚基、调节亚基形成异源三聚体复合物发挥作用。本研究借助GenBank中猪(Sus scrofa)及其他物种的蛋白磷酸酶2A催化亚基α(protein phosphatase 2A catalytic subunitα, PPP2CA) mRNA序列,设计特异引物扩增版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)PPP2CA基因编码区序列,并对其进行表达和功能特性分析。应用qRT-PCR分析组织mRNA表达谱,并对编码的蛋白质序列进行生物信息学分析。扩增得到了BMI PPP2CA 930 bp (GenBank No. KU705627)的完整CDS序列,共编码309个氨基酸。与其他组织相比PPP2CA基因在尿道球腺和精囊腺中极显著高表达(P0.01),在睾丸中表达量也相对较高,在肝、结肠、脾、肺、十二指肠、前列腺、肾、附睾及脑中中度表达;在胃、心、肌肉中表达水平极显著低于其他组织。PPP2CA蛋白质功能预测表明其存在1个保守结构域MPP_PP2A_PP4_PP6,存在4类功能活性位点,无跨膜螺旋结构,无信号肽序列,N末端和C末端均亲水,位于细胞质的概率是94.1%。二级结构预测表明该蛋白α-螺旋含量最高,是组成N端的主要结构,C端有一段无规则卷曲,多物种氨基酸序列比对结果显示,PPP2CA序列在不同物种间相似度很高,推测其在进化中高度保守,为深入研究PPP2CA基因在猪精子获能方面作用机制提供了资料基础。     

猪-人异种移植相关基因CMAH的克隆、表达及功能生物信息学分析

【目的】研究版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)CMAH基因特性,探索该基因在猪-人异种器官移植免疫排斥中的作用。【方法】采用实时荧光定量PCR技术检测BMI 27个重要组织的CMAH m RNA表达水平,采用Western blot检测BMI在9个组织中的CMAH蛋白表达特征,并对CMAH编码的氨基酸进行生物信息学预测,分析CMAH蛋白质的功能。【结果】扩增得到BMI CMAH编码区序列长1 734 bp,编码577个氨基酸,序列已提交Gen Bank,基因登录号KM098147,对应的氨基酸登录号AIS36193。多组织相对荧光定量表达分析表明CMAH基因在颌下腺、脾及舌下腺中呈相对高表达水平,在其他组织中呈相对中、低表达水平。Western Blot分析表明CMAH蛋白在除脊髓和大脑外的其他组织都有表达。功能生物信息学分析表明CMAH蛋白质包含Rieske和Ula G保守结构域,二级结构以α螺旋为主,N末端亲水,C末端疏水,有6类功能活性位点。【结论】明确了CMAH基因的结构以及在多种组织中差异化表达情况,为深入研究其在异种器官移植方面的功能积累了基础资料。     

利用微卫星PCR技术分析山猪的遗传结构*

 选用世界粮农组织（FAO）和国际动物遗传学会（ISAG）联合推荐的23个微卫星位点对山猪群体的遗传多样性进行检测。通过等位基因频率、有效等位基因数、杂合度、多态信息含量的计算以及瓶颈效应分析,判断山猪群体目前遗传结构和濒危状况。结果表明,23个微卫星座位的多态信息含量在0.452~0.847之间。群体平均多态信息含量和平均杂合度分别为0.686和0.731。瓶颈效应分析表明,山猪群体拥有极显著的杂合度过剩位点数,在无限等位基因模型和逐步突变模型下的平均杂合度为0.559和0.672,推断其有效群体大小近几十年在明显下降,从而说明山猪群体已经处于被灭绝的威胁中。上述研究结果对于山猪的保种和开发利用具有重要的指导意义。     

利用76个微卫星标记分析滇南小耳猪的遗传多样性

滇南小耳猪是云南省优良地方猪种之一,其数量大,分布广。为了阐明其群体遗传变异情况,以对其进一步有效保护和合理利用提供科学依据,本研究采用分布在家猪19条染色体上的76个微卫星标记对该猪群体54个个体进行了群体遗传变异检测。共检测到338个等位基因,每个座位的等位基因数在2~8个之间,有效等位基因数在1.956 0~5.714 3之间,平均每个座位等位基因数(4.447 4±1.204 4)个,有效等位基因数(3.509 1±0.919 7)个,群体平均杂合度及平均多态信息含量分别为0.691 7±0.097 9和0.638 8±0.114 2。研究结果表明,滇南小耳猪群体遗传多样性较丰富。     

版纳微型猪近交系TNF-α基因克隆、序列分析及分子系统进化研究

分别提取版纳微型猪近交系18种组织的RNA,反转录为cDNA,利用RT-PCR方法扩增肿瘤坏死因子(TNF-α)基因编码区全长序列,将纯化的片段与pMD18-T载体连接,转化大肠杆菌DH 5α,筛选阳性克隆并测定其序列,利用生物信息学方法分析其序列特征,并与其他15个物种构建系统进化树。同时采用半定量RT-PCR方法分析TNF-α基因在版纳微型猪近交系18种组织中的表达情况。结果显示,版纳微型猪近交系TNF-α基因编码区全长699 bp(GenBank登录号:JF831365),编码232个氨基酸。氨基酸序列同源性分析表明,与猫等12个物种具有80%以上的相似性,分子系统进化表明与牛、山羊、绵羊及海豚的关系较近。多组织半定量RT-PCR研究表明,TNF-αmRNA在版纳微型猪近交系的多个组织中均有表达,其中在中脑、卵巢、脾、肺、神经及胃中表达量较高。     

版纳微型猪近交系RNF148基因生物信息分析、组织差异表达及亚细胞定位

指环蛋白RNF148与睾丸形成和精子发生密切相关。本研究以猪及其他近缘物种的RNF148 mRNA为参考序列,设计特异引物从版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line,BMI)睾丸组织中扩增RNF148基因完全编码序列;对RNF148蛋白质序列进行生物信息学分析,预测其功能,并构建RNF148的多物种系统进化树;应用实时荧光定量PCR技术检测BMI 15个重要组织的RNF148 mRNA转录表达水平;构建真核表达载体,转染猪睾丸细胞系,并进行亚细胞定位分析,检测该蛋白在细胞中的表达部位。结果表明:扩增得到BMI RNF148编码区序列长912bp,编码303个氨基酸;RNF148包含3个保守结构域PA_GRAIL_like、RING_Ubox和zf-rbx1超家族,存在1个跨膜螺旋结构,有N端信号肽序列,二级结构以α螺旋为主,N末端和C末端均疏水,有4类功能活性位点,在进化中高度保守,91.4%位于细胞质中;在睾丸中特异高表达,在心、肝等其他14个组织中相对低表达;成功构建了融合的绿色荧光蛋白真核表达载体,并确定RNF148多在细胞质中表达。研究结果为探索RNF148基因在BMI公猪繁殖性能方面的作用奠定了基础。     

版纳微型猪近交系GOT1基因克隆、序列分析及表达分析

【目的】细胞质型天冬氨酸氨基转移酶又称谷草转氨酶,由细胞核GOT1基因编码,催化天冬氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸形成草酰乙酸和谷氨酸,在物质代谢调控中起重要作用。本研究以版纳微型猪近交系(Banna mini-pig inbred line, BMI)为材料,克隆GOT1基因,并对其进行生物信息学及组织mRNA表达分析。【方法】利用RT-PCR技术扩增猪GOT1基因,并进行生物信息学分析,同时应用半定量RT-PCR技术明确其mRNA的组织表达特征。【结果】获得了BMI GOT1基因全长1 484 bp的cDNA序列(GenBank登录号:KU705636.1),包含1 242 bp的开放阅读框。生物信息学分析表明:猪GOT1基因位于14号染色体,包含9个外显子和8个内含子;猪GOT1蛋白无信号肽,无跨膜螺旋,有36个磷酸化位点和1个O连接的糖基化位点,定位于细胞质的概率是94.1%,与水牛、黄牛、黑猩猩、人、食蟹猴、大鼠和小鼠的GOT1蛋白依次有95.6%、95.4%、93.0%、92.7%、92.5%、90.3%和90.1%的同源性;二级结构中以α螺旋为主,无规则卷曲和延伸链含量中等,β转角只在局部出现;三级结构同源建模成功。组织表达分析表明:GOT1 mRNA在检测的15个组织中差异表达,肌肉中表达量最高。【结论】为进一步了解该基因的生理功能及调控机制积累了资料。     

现代职业教育背景下教师培育三级体系的构建与实践——以云南农业职业技术学院为例

<正>职业教育是国民教育体系和人力资源开发的重要组成部分,教师队伍质量决定着职业教育发展水平。加强教师队伍建设,提升教师教学能力,是实现现代职业教育高质量发展的关键。与新时代国家职业教育改革的新要求相比,云南省大多数高等职业院校的教师队伍与全国同类院校相比仍有一定差距。文章分析教师培育方面的不足,依托“现代职业教育背景下教师培育校级、省级、国家级三级体系的构建与实践”项目开展研究实践,阐述现代职业教育背景下,通过建立“校级-省级-国家级”三级培育体系,构建包括培养目标、培养模式、课程体系、教学团队建设与管理的教学质量保障体系,充分体现以教师发展为中心的职业教育教师队伍建设理念。     

澳洲鸵鸟的随机扩增多态DNA研究

采用随机扩增多态性DNA标记技术对澳洲鸵鸟20个个体进行了遗传变异分析,从60个随机引物中筛选出17个多态性丰富的引物,并对其所有个体的总基因组DNA进行了PCR扩增,结果17条引物共产生103种扩增片段,其中共有片段13条,多态片段90条,平均每条引物的扩增带数为6．06,各引物多态性片段范围在2—9,多态频率在40％-100％。表明澳洲鸵鸟的遗传多样性较丰富。