高产蛋白酶纳豆芽孢杆菌的分离筛选与鉴定

以北京、大连和日本3个产地的纳豆产品为试验材料,从中筛选可用于畜禽生产的纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)蛋向酶高产菌株.先通过酪蛋白平板初筛得到9株芽孢杆菌,再以N1型纳豆芽孢杆菌为模式菌株,对初筛得到的菌株进行菌落和菌体形态观察、生理生化鉴定,确定有5个菌株为纳豆芽孢杆菌.测定5个菌株48 h发酵液中蛋白酶活性,结果表明:菌株NB1为蛋白酶高产菌株,发酵液中蛋白酶活性为19.41 U·mL-1,产蛋白酶特性在6代内可保持稳定.     

纳豆芽孢杆菌的分离纯化及鉴定

根据纳豆芽孢杆菌耐热耐盐的特征分离纳豆芽孢杆菌菌株.由纳豆粉中分离纯化出1株纳豆菌株,由家庭自制纳豆中分离纯化出5株纳豆菌株,并对这6株纳豆芽孢杆菌的细胞、菌落形态及生理特性进行研究.结果表明,这6株纳豆菌均属于枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).     

直投式纳豆芽孢杆菌发酵剂的制备及应用效果

[目的]优选出发酵制备纳豆激酶制品质量稳定、价格低廉的直投式纳豆发酵剂。[方法]采用稀释平板分离法,从市售纳豆及纳豆菌剂中筛选出3株纳豆芽孢杆菌优势菌株。通过比较这3个分离菌株与实验室保存的纳豆芽孢杆菌菌株的产酶能力,优选出其中1株作为制备直投式纳豆发酵剂的菌种并研究其发酵工艺。[结果]试验得出,实验室保存的纳豆芽孢杆菌产纳豆激酶酶活力最高。作为接种剂,直投式发酵剂在产酶活力上均优于液体种子液。试验优化了冻干粉菌悬液的浓度为107CFU/ml,发酵豆粕获得了498.8 U/g纳豆激酶酶活力。[结论]研究可为利用直投式发酵剂发酵产纳豆激酶制品提供参考依据,为实际生产奠定基础。     

纳豆激酶生产菌的定向筛选

本实验利用目标纳豆枯草芽孢杆菌所应具有的耐热性，耐盐性及显著的蛋白酶活性等生物学特性设计定向选育方案，从日本纳豆和纳豆发酵剂样品中筛选蛋白酶活力高，并溶血纤维蛋白特异性显著的枯草芽孢杆菌，最终从1种干纳豆中分离筛选出1株芽孢杆菌，代号为：HL986，其培养物中1种蛋白酶的溶栓性和分子量都十分接近已有报道的纳豆激酶（NK）。     

四株纳豆枯草芽孢杆菌的分离筛选与鉴定及其对瘤胃发酵的影响

采用酪蛋白平板和羧甲基纤维素钠(CMC-Na)平板初筛法、菌落形态和16SrRNA序列比对分别从无菌大豆(DD)、接种稻草的大豆(DC)、市售纳豆(ND)以及实验室储存菌株纳豆枯草芽孢杆菌NY-3(NY)中分离、筛选、鉴定出4株产蛋白酶和纤维素酶活性较高的纳豆枯草芽孢杆菌;通过体外批次发酵试验,向日粮底物中添加1.5×1011cfu筛选出的四株菌,取0h和24h的瘤胃液样测定各个发酵参数.结果表明:与对照组相比,添加纳豆枯草芽孢杆菌(DC组、DD组、ND组、NY组)并不影响瘤胃液pH值(P=0.883),但显著提高瘤胃液中NH3-N值(P0.05)和挥发性脂肪酸(VFA)各成分的浓度(P0.05);与对照组相比,DC组的乙酸/丙酸差异不显著(P0.05),但是DD、ND组和NY组均有显著降低(P0.05).     

纳豆芽孢杆菌益生菌株B2的筛选与鉴定

根据纳豆芽孢杆菌水解淀粉的生物学特性,采用稀释平板分离法,从中国传统食品豆豉中筛选出2株纳豆芽孢杆菌优势益生菌株。通过比较这2个分离菌株与实验室保存的纳豆芽孢杆菌菌株的耐受性和抑菌能力,从中选出1株最优菌株B2。     

1株纳豆激酶高产菌株的分离·筛选与复合诱变研究

为选育纳豆激酶(Nattokinase,NK)高活性菌株,从4种不同风味食品中分离得到26株菌株,通过酪蛋白平板初筛和液体发酵复筛,得到2株纳豆激酶高产菌株,利用分子生物学技术鉴定为2株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis).采用氯化锂-紫外与亚硝基胍(NTG)复合诱变的方式,最终获得1株纳豆激酶活性达到2338.01 U/mL的高产菌株SD3-3-6,该突变菌株纳豆激酶酶活相较于初始菌株SD3提高了1.93倍,是1株具有应用前景的高产菌株.     

一株产纳豆激酶芽胞杆菌分离及鉴定

[目的]筛选并鉴定纳豆芽胞杆菌.[方法]筛选芽胞杆菌,显微镜观察其菌落形态,生理生化鉴定,测定其生长曲线及产纳豆激酶的酶活力.[结果]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023.该菌最高酶活力可以达263.38 IU/ml.[结论]筛选到一株产纳豆激酶的纳豆芽胞杆菌ZD023,为下一步开发成具有溶栓功能的食品或药品奠定基础.     

纳豆生产优良菌株的筛选研究

[目的]筛选出最优的纳豆生产菌株。[方法]以实验室现有的16株纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)为出发菌株,通过蛋白酶、纳豆激酶及产黏(r-PGA)性能的综合指标,筛选出适合纳豆生产的纳豆芽孢杆菌。[结果]综合考虑,菌株DL-1521具有最高的蛋白酶、纳豆激酶和较高的产黏特性,具备作为纳豆生产优良菌种的特性。[结论]筛选结果可为纳豆直投式菌剂的制备提供优良菌株。     

发酵菜籽粕高产纳豆激酶菌株的选育研究

[目的]为了选育发酵菜籽粕高产纳豆激酶的优良菌株.[方法]出发菌株纳豆芽孢杆菌(Bacillus natto)Z1经过紫外诱变处理后,以菜籽粕作为唯一氮源进行摇瓶发酵培养,并以纳豆激酶为考核指标进行高产菌株的筛选.[结果]通过反复筛选和遗传稳定性试验,获得高产纳豆激酶且遗传稳定的突变株U49,其酶活力比Z1提高了100.34％.[结论]该研究可为利用菜籽粕工业发酵生产纳豆激酶奠定基础,并为新型保健食品和药物的产业化提供理论依据和技术支持.     

产蛋白酶和纤维素酶纳豆芽孢杆菌益生菌株的筛选及其生长特性研究

根据纳豆芽孢杆菌(Bacillus subtilis natto)水解酪蛋白和羧甲基纤维素的生物学特性,以菌株NB-1和NR-l为出发菌株,采用稀释涂平板法获得10株初筛纳豆芽孢杆菌,通过测定初筛菌株48 h发酵液中蛋白酶活性和纤维素酶活性,确定NY-3产蛋白酶和纤维素酶活性均相对较高.同时对该菌株生长特性进行了研究....     

9株纳豆菌产酶活力的比较研究

对9株纳豆菌产纳豆激酶和超氧化物歧化酶活性进行了研究,从中选出1株产纳豆激酶(NK)和超氧化物岐化酶(SOD)能力较高的菌株(NS-W-6)。该菌株在普通大豆培养基上能产生大量纳豆激酶和SOD酶,产纳豆激酶活力为1 766.25 U/mL,超氧化物歧化酶活力为214.85 U/mL。     

具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌的分离与鉴定

采用梯度稀释分离法,从黄河稻区水稻根际土壤中分离出耐高温芽孢菌722株。通过真菌生长抑制试验,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的菌株27株。通过形态学观察和生理生化指标鉴定,获得具有稻瘟病菌拮抗活性的枯草芽孢杆菌疑似菌株7株。挑取其中抑菌活性最强的1株进行16SrDNA鉴定,将其16SrDNA基因序列与GenBank中基因序列进行同源性比较,发现与枯草芽孢杆菌16SrDNA有99%同源性,判定此菌为枯草芽孢杆菌,命名为BS501a。     

稻瘟病菌拮抗微生物的筛选及鉴定

将稻叶和种子浸在NB培养液中，并研碎成浆浆液，用接种环挑少量匀浆液在NB琼脂平板上划线分离，获得356个菌株，分别将它们接种于NB培养液中，振荡培养3d，并利用它们的培养液对稻瘟菌分布孢子进行萌发抑制试验，最终获得具显抑制作用（分生孢子萌发抑制率分别为82．5％和100％）的2个拮抗菌株，按照伯杰手册进行严格的鉴定，初步确定为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis) 和短小芽孢杆菌（B.pumillus)。     

刺五加内生细菌的分离及抑菌研究

从刺五加中分离出内生细菌227株,以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌,分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明:刺五加内生细菌对3种供试菌有一定的抑菌活性。     

黄花夹竹桃内生细菌抑菌活性的初步研究

从黄花夹竹桃的根、茎、叶中分离出内生细菌13株,以小麦赤霉(Fusarium graminearum)、番茄早疫(Alternaria sclani)、番茄灰霉(Botrytis cinerea)3种常见植物致病真菌以及3种具有代表性的细菌,即金黄色葡萄球菌(Staphyllococcus aureus)、大肠杆菌(Escherichia col-i)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为受试菌,对其进行抑菌活性的测定。结果表明:内生细菌G2、Y1对受试植物病原真菌有较好的抑菌活性;内生细菌G1、G2、G3、G4对受试细菌具有普遍的抑菌作用。     

红树秋茄色素抗菌活性研究

[目的]对红树秋茄色素的抗菌活性进行研究,为红树秋茄药用价值评价及开发利用提供依据。[方法]采用滤纸片法,以抑菌圈为指标,分别考察了秋茄色素对枯草芽孢杆菌、大肠杆菌和绿脓杆菌生长的抑制效果。[结果]红树秋茄色素对3种供试菌种皆表现出不同程度的抑制作用,其中对枯草芽孢杆菌的抑制效果最明显,对大肠杆菌次之,对绿脓杆菌的抑制效果较弱。[结论]红树秋茄色素具有较明显的抑菌作用,此次试验只选用了3种菌种供试,尚需进一步做更多菌种的抑制作用效果试验,以期较全面评价该色素的抑菌作用。     

金银花提取液抑菌活性的研究

[目的]对金银花水提液和醇提液的抑菌活性进行研究。[方法]首先用滤纸片法测定了样品对几种受试菌的抑制活性,再采用微量稀释法测定了敏感菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）。[结果]金银花水提液对金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌具有抑制作用,对金黄色葡萄球菌的M1C为19．25％,MBC为38．50％;对枯草芽孢杆菌的MIC为38．50％。金银花醇提液对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、巨大芽孢杆菌具有抑制作用,对沙门氏菌的MIC为9．80％,MBC为19．60％;对金黄色葡萄球菌MIC为19．60％,MBC为39．20％;对巨大芽孢杆菌的MIC为19．60％。[结论]金银花水提液和醇提液对部分受试菌具有明显的抑制作用。     

3株拮抗菌在水稻植株上的定殖能力及对纹枯病的防效

【目的】研究筛选出的芽孢杆菌（Bacillus sp.）NB12、伯克霍尔德菌（Burkholderia sp.）SD7、卡特拉链霉菌（Streptomyces katrae）NB20在水稻植株上的定殖能力,以及在离体叶片、苗期和分蘖盛期对水稻纹枯病的防治效果。【方法】NB12和SD7两菌株用利福平（Rif）进行抗药性标记,筛选到抗300 μg/mL Rif 的抗药性菌株用于定殖试验;水稻离体叶片试验用5 mm菌丝块接种,苗期和分蘖盛期试验用带菌谷粒接种。【结果】定殖试验结果表明,SD7和NB12菌株在水稻叶片上能以较高密度定殖,第20天仍能检测到10⁶ CFU/g的标记菌株,且10 d后在新生叶片中也可检测到标记菌株。在离体叶片试验中,NB12、SD7和NB20发酵菌液对水稻纹枯病的防效分别达到91.3%,90.0% 和54.4%,前2个菌株的防效显著高于40 μg/mL的井冈霉素（77.5%）。3个菌株对苗期水稻纹枯病也有较好的防治效果,其发酵菌液防效依次为59.91%,53.73%和38.47%,其无菌滤液也有一定防效。3个菌株对分蘖盛期水稻纹枯病的防治效果不理想,表现较好的NB12发酵菌液和SD7发酵菌液防效也只有17.6%和24.0%,低于井冈霉素的防效（32.9%）。试验中发现,3个菌株的混合处理并没有提高防治效果,反而降低了防效。【结论】NB12和SD7两菌株对水稻离体叶片和苗期纹枯病表现了良好的生防能力,其对分蘖盛期水稻纹枯病的防治效果还需要进一步研究。     

鹅掌楸内生菌分离纯化及其抗菌活性初步研究

从鹅掌楸的茎、叶中分离出内生菌5株,以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureu）、大肠杆菌（Escherichia coli）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis）为供试菌,用杯碟法分别对其液体发酵液进行了抗菌活性的研究。结果表明：鹅掌楸内生菌对4种供试菌有一定的押菌活性,不同组织中内生菌的抑菌活性存在差异,其中J1、Y3对供试菌具有普遍抑茼作用。