HPLC-QTOF和HPLC-MS/MS筛查与确证兽药中非法添加氧氟沙星等15种喹诺酮类药物

采用高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(HPLC-QTOF)筛查并确证1批监督抽检的兽药硫酸黏菌素注射液中的未知添加物,并建立液相色谱-三重四级杆质谱法(HPLC-MS/MS)定量检测20种兽药中15种该类化合物的方法。采用HPLC-QTOF筛查兽药非法添加物时,发现1批硫酸黏菌素注射液中含有未知添加物,与建立的一级谱库中氧氟沙星匹配分数很高,疑似为氧氟沙星。通过二级质谱碎片离子的推导及与对照品二级质谱比对,确证其为氧氟沙星。采用HPLC-MS/MS建立了定量检测20种常见兽药中非法添加氧氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、达氟沙星、依洛沙星、洛美沙星、麻保沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、司帕沙星、二氟沙星、奥比沙星、恶喹酸、氟甲喹共15种喹诺酮类化合物的方法,15种喹诺酮类化合物在各自的线性范围内均呈现良好的线性关系,添加回收率为85.0%～100.0%,相对标准偏差(RSD,n=3)均不高于15.0%。通过检查该样品中的非法添加物,建立了简便、快速、灵敏的定性定量检测方法,为打击当前兽药中非法添加化合物建立技术标准提供参考,为兽药处方外非法添加筛查与确证提供思路。     

HPLC-PDA联合UPLC-Triple TOF MS法确证恩诺沙星注射液中的非法添加物

对恩诺沙星注射液中非法添加加替沙星的确证。通过HPLC-PDA法初筛发现1批恩诺沙星注射液中含有非法添加物,利用高分辨质谱对未知物进行筛查,推测出非法添加物为加替沙星,并用进行确证。结果显示,该批样品中的非法添加物为加替沙星。本研究为兽药中非法添加物筛查及定性确证提供了一个有效的思路与方法。     

猪肉中92种兽药残留的UPLC-Qtrap高通量筛查和定量方法的研究

结合简单快速的前处理方法和超高压液相色谱-三重四级杆/线性离子阱串联质谱(UPLC-Qtrap)技术,建立了猪肉中92种兽药残留同时检测的高通量筛查和定量方法。样品经简单快速的前处理后,经Kinetex Core-Shell色谱柱分离,分析时间仅13.5 分钟。质谱采用多反应监测－信息关联－增强子离子(MRM-IDA-EPI)采集方式及谱库检索技术,通过化合物的保留时间、离子对丰度比以及EPI标准谱库检索对比,可完成对92种兽药的快速筛查和确证。采用基质匹配标准溶液外标法定量。结果表明：在1～50 ng/mL猪肉基质匹配标准溶液浓度范围内呈良好线性关系,相关系数R2均大于0.990;方法定量限均为1 ng/g;在1~10 ng/g的添加浓度范围内92种药物的回收率为50%～120%,批内批间相对标准偏差均小于20％。     

HPLC-PDA联合UPLC-Q/TOF法确证硫酸卡那霉素注射液中的非法添加物

确证1批硫酸卡那霉素注射液中的非法添加物。在对该批样品进行非法添加物常规筛查时发现其含有未知色谱峰,且紫外光谱具有特征性,但与现有的紫外光谱库进行比对,无法确定该未知物的结构。结合UPLC-Q-TOF法给出的未知物的分子量信息推导出疑似添加物,再用HPLC-PDA和UPLC-Q/TOF两种方法进行验证,最终确证非法添加物。结果显示该批样品中的非法添加物为尼可刹米。通过检查该批样品中的非法添加物,总结出确证非法添加物的一般模式,从而为兽药处方外非法添加物的筛查与确证提供思路。     

农业执法案件中未知粉末的分析研究

对农业执法案件中缴获的未知粉末进行分析研究。应用超高效液相色谱-飞行时间高分辨质谱（UPLC-TOF-HRMS）获得未知物分子离子峰的精确质量数、天然同位素信息，二级特征碎片的精确质荷比，并应用SCIEX PeakView及MasterView软件进行分析。经过靶向及非靶向筛查，同时参考文献报道，推导出未知粉末中的疑似化合物。采用高效液相色谱-二极管阵列检测器（HPLC-PDA）法及UPLC-TOF-HRMS法进行了双重确证。结果显示该未知粉末中含克仑特罗（16 g?kg-1）及其合成前体克仑特罗杂质B（455 g?kg-1）。本文详述的分析技术可为未知添加物的筛查和确证提供思路和技术参考。     

高分辨质谱联合超高效液相色谱筛查饲料中非法添加物米诺地尔

利用高分辨质谱技术筛查鉴定饲料中不在常规检测范围内的、完全未知的非法添加物.待测样品经酸性甲醇提取后,经超高效液相色谱四级杆飞行时间高分辨质谱采集全扫描数据进行非目标物分析.经分子特征搜索,生成分子式再结合标准品确证为米诺地尔(C9H15N5O)药物.再通过超高效液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱对比相互印证,最后经超高...     

普通高效液相色谱-二极管阵列法自动筛查识别兽药中非法添加物的研究

为了建立兽药中非法添加物筛查的自动识别方法，采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水-醋酸铵溶液(99∶1)为流动相A,甲醇-醋酸铵溶液(99∶1)为流动相B,二极管阵列检测器测定目标物对照品，记录色谱图和光谱图，建立其主成分紫外光谱和保留时间数据库。兽药样品经处理后上机检测，采集主要成分的紫外光谱及相应保留时间信息，执行峰跟踪，使用光谱库筛选结果，仪器自动识别检测兽药的成分。结果：采用普通高效液相色谱仪配备二极管阵列检测器即可筛查识别农业农村部公告第169号中需要使用超高效液相色谱-二极管阵列法进行筛查的全部153种化合物中的149种，另增加了47种新的化合物，使能够自动筛查识别的非法添加目标物达到196种，并明确了各化合物的最佳提取波长。结论：建立的普通高效液相色谱-二极管阵列法可自动识别兽药中非法添加目标物，方法简单、快速、成本低、效率高；通过方法移植和数据共享，可在具有同类型设备的实验室推广应用。     

UHPLC-Q/TOF MS结合HPLC-DAD定性和定量分析硫酸黏菌素可溶性粉中的未知添加物

定性和定量分析一批兽药硫酸黏菌素可溶性粉中的未知添加物。照《中国兽药典》2010年版一部对该批检品用微生物检定法进行含量测定时,发现该样品的抑菌圈为虚圈,用薄层色谱鉴别该样品,未显示与标准品溶液一致的主斑点,怀疑该样品中有处方外非法添加物。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UHPLC-Q/TOF MS)对该样品进行筛查,发现疑似添加物,并使用液相色谱-二极管阵列检测(HPLC-DAD)法进行了双重确证和含量测定。该样品中非法添加物确证为磺胺氯达嗪和甲氧苄啶,添加量分别为58.5 mg/g和13.4 mg/g。本研究通过建立筛查方法为监管部门提供技术支撑,通过分析非法添加物的可能原因为打击兽药处方外非法添加提供了思路。     

氟苯尼考注射液中非法添加二氧丙嗪的检测方法研究

建立氟苯尼考注射液中非法添加的二氧丙嗪的检测方法。对1批氟苯尼考注射液照《中国兽药典》2010版HPLC法进行含量测定时，发现未知物质峰。采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱（UHPLC-Q/TOF MS）对该批检品进行筛查，发现该添加物疑似二氧丙嗪，并采用高效液相色谱-二极管阵列检测法（HPLC-DAD）对二氧丙嗪进行定性和定量检测。结果显示，高效液相色谱法二氧丙嗪在1 ~ 100 μg/mL浓度范围内的线性良好(r=1.0000)，平均回收率为99.5％，RSD为0.3％。本方法专属性强，灵敏度高，重现性好，适用于氟苯尼考注射液中非法添加二氧丙嗪的检测。     

超高液相色谱-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中二十三种喹诺酮类和四环素类药物

为了快速筛查与确证喹诺酮类及四环素类药物,及时掌握畜禽养殖过程中抗菌药物的使用情况,本研究建立了利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱快速筛查与确证猪粪中23种常见喹诺酮类及四环素类抗菌药物的方法.建立了目标药物的质谱数据库,优化了猪粪中23种常见抗菌药物喹诺酮类和四环素类药物的前处理过程.23种目标药物在...     

兽药中非法添加物检测及风险防范技术研究

本文总结了近年来兽药中非法添加的规律,分析成因;全面梳理现有检测标准,对非法添加物检测方法的检测对象和目标药物进行统计分析,研究检测方法发展及内在联系。在非法添加物检测方法提升和风险防范方面进行思考,提出筛查与确证方法并重、进一步扩大检测方法适用性、加强高效、高通量检测技术研究、拓展非法添加物检测品种范围;加强检查与宣传、疏堵结合,全面减少非法添加风险。     

HPLC-PDA法测定兽药中非法添加四种解热镇痛抗炎类药物

建立了7种兽药中非法添加对乙酰氨基酚、安乃近、地塞米松和地塞米松磷酸钠药物的HPLC-PDA法。采用十八烷基键合硅胶为填充剂,磷酸二氢钠缓冲液（磷酸二氢钠3．0 g加水至1000 mL,加三乙胺1 mL,用氢氧化钠调pH值至7．0±0．2）-甲醇（80∶20）为流动相,梯度洗脱,二极管阵列检测器进行全扫描和240 nm波长测定,并采用峰纯度检查和光谱相似度检查辅助对照品比对方法,对四种目标分析物进行确证。结果显示,4种解热镇痛抗炎药物与其他物质峰分离良好,在测定范围内线性关系良好,平均回收率为73．5％～119．2％,RSD为0．1％～5．8％。本方法准确、可靠、重现性好,可用于兽药制剂中非法添加四种解热镇痛抗炎药物的定性和定量检测。     

液相色谱-串联质谱法在兽药残留检测中的应用

 随着兽药和药物添加剂在畜禽饲养过程中长期不合理的使用,残留在动物体内的兽药及其添加剂随着食物链进入人体,对人类的健康构成潜在威胁。加强对兽药残留的检测,对保护生态环境和人类的身体健康有着极其重要的现实意义。近年来,液相色谱—串联质谱技术以其良好的适用性、定性定量功能及高灵敏度等优点,在兽药残留的检测方面已得到了广泛应用。论文概述了液相色谱—串联质谱技术在饲料、畜产品和尿液中兽药残留以及违禁药物和有害添加剂检测的应用现状。     

奶及奶制品中兽药残留高通量检测方法研究进展

在生产中兽药的滥用可能导致牛奶中的兽药残留并对消费者健康造成风险。由于兽药种类较多,单一检测效率较低,而高通量检测技术可以一次性检测多种兽药残留,省时省力,因此成为当前研究的热点。在样品前处理方面,分散固相萃取技术（如QuEChERS方法）由于其简单、快速、成本低等特点,广泛应用于样品净化过程;另一方面,超高效液相色谱串联质谱由于其分离快、灵敏度与准确度高等特点,展示出比高效液相色谱法更好的分析能力和应用前景。随着新技术的应用和新仪器的使用,兽药残留检测在前处理效率、仪器灵敏度和高通量检测方面发展迅速。作者结合近些年发表的文献,综述了奶及奶制品中兽药残留前处理技术（液液萃取法、固相萃取法、QuEChERS和盐析支持液液萃取）和高通量检测技术（高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用、超高效液相色谱串联质谱和液相色谱-飞行时间质谱法）,为今后相关检测研究提供参考。     

Advances in High-throughput Detection of Veterinary Drug Residues in Milk and Dairy Products

The abuse of veterinary drugs in production may lead to veterinary drug residues in milk and pose a risk to consumer health.As the kinds of veterinary drugs are too many,the detection method for single target presents low efficiency.Whereas the high-throughput detection technology can detect various veterinary drug residues simultaneously,with time and labor saving,and become a research hot spot.In the aspect of sample pretreatment,dispersed solid phase extraction techniques,such as QuEChERS method,are widely used in sample purification due to its features of simplicity,rapidity and low cost.On the other hand,because of its characteristics of fast separation,high sensitivity and accuracy,ultra-high performance liquid chromatography (UPLC) tandem mass spectrometry (MS) has shown better analytical performance and application prospect than high performance liquid chromatography (HPLC).With the application of new technologies and instruments,veterinary drug residue detection has developed rapidly in terms of pretreatment efficiency,instrument sensitivity and high-throughput detection.In this paper,based on recent literatures and publications,the pretreatment techniques and high-throughput detection technology of veterinary drug residues in milk and dairy products were reviewed,to provide a reference for future research.The pretreatment techniques introduced liquid-liquid extraction (LLE),solid phase extraction (SPE),QuEChERS and salting out support liquid extraction,while the high-throughput detection technology included high-performance liquid chromatography (HPLC),liquid chromatography-mass spectrometry (LC-MS),ultra-high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry (UHPLC-MS) and liquid chromatography-time of flight mass spectrometry (LC-TOF-MS).     

Perceived constraints to private veterinary practice in India

We used an exploratory study in two districts of West Bengal State, India to find out the constraints of private veterinary practice. Privatization of veterinary services is being seen as an alternative to government-sponsored veterinary services to livestock. In December 2000 to February 2001, 50 private veterinary practitioners were interviewed from the districts. Their opinion was that weak regulations about competition from illegal practitioners and the use of veterinary drugs, competition by animal-health technicians (who are likely to charge less than veterinarians), absence of efficient diagnostic-laboratory support, and lack of commercial livestock farming were the main constraints faced.     

TLC及UPLC-MS/MS法检测中兽药散剂中磺胺类药物

对5种磺胺类药物采用硅胶GF254板为固定相,以正丁醇-浓氨水(15∶3)为展开剂,用薄层色谱初步筛选中药散剂中是否非法添加了磺胺类药物。采用超高效液相-串联质谱分析,鉴别中药散剂中非法添加磺胺类药物分离良好,无干扰峰,可用于确证中兽药散剂中是否非法添加磺胺类药物。     

对兽药违法案件中货值金额计算的思考

选取货值金额计算有争议的兽药违法典型案例,对货值金额计算的价格及数量确定依据条例条款分析审议,提出货值金额按标价计算等价格确定方法、已售数量争议的界定方法等数值确定方案的建议,以期为兽药规范执法提供参考。     

兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展

因不合理或违规使用兽药, 导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留, 继而危害人类健康、破坏生态环境。因此, 兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力, 根据其特性已发开了不同的检测方法, 如免疫分析法、受体检测法及生物传感器法等方法, 广泛用于生物医药的研究。由于分子识别元件是分析的主体, 影响分析的选择性, 因此不同识别元件与兽药相互作用的机制越来越受到人们的重视。随着计算机技术的发展, 同源建模和分子对接广泛用于残留检测技术, 主要用于药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等生物分子之间相互作用的研究。笔者重点介绍了单链抗体(ScFv)、受体和适配体3种识别元件与兽药小分子之间的互作机制, 主要分析生物识别元件与兽药结合部位形成的氢键、疏水性及关键氨基酸或碱基, 在分子水平上探究药物与识别元件的机理和规律, 从而找出影响识别元件与药物结合的关键因素, 并对3种识别元件进行了总结, 以期为全面了解识别机制和体外进化, 制备出亲和力更广的ScFv、受体、适配体提供理论支撑, 为后续药物残留检测技术和药物开发奠定基础。