金枪鱼鱼骨胶原肽的制备及抗氧化活性研究

为制备金枪鱼鱼骨胶原肽,并对其抗氧化活性进行研究,利用酶解、超滤、凝胶色谱和反相高效液相色谱制备抗氧化胶原肽,采用氨基酸序列分析仪测定其氨基酸序列,利用质谱(ESIMS)确定其分子量,采用羟自由基、DPPH自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基清除实验和脂质过氧化抑制实验对胶原肽抗氧化能力进行评价。结果显示,金枪鱼鱼骨胶原蛋白经胃蛋白酶和胰蛋白酶2步酶解和分离纯化得到1个十肽(TFCH-P2),经氨基酸序列分析和质谱(ESIMS)确定其氨基酸序列为Gly-Pro-Ala-Gly-Pro-Ala-Gly-Glu-Gln-Gly(GPAGPAGQEG),分子量为839.87 u([M+H]+840.68 u)。体外抗氧化实验结果表明,GPAGPAGQEG对羟自由基(EC500.18 mg/mL)、DPPH自由基(EC500.97 mg/mL)、ABTS自由基(EC500.52 mg/mL)和超氧阴离子自由基(EC500.38 mg/mL)具有良好的清除作用;GPAGPAGQEG亦显示出良好的脂质过氧化抑制作用。研究表明,胶原肽GPAGPAGQEG抗氧化活性良好,可以用于抗氧化相关的功能食品、药物或者食品添加剂。     

马氏珠母贝黏液糖蛋白分离纯化及其抗氧化活性研究

该研究采用直接醇沉法、盐提醇沉法和水提醇沉法提取马氏珠母贝(Pinctada martensii)黏液中的糖蛋白,优选直接醇沉法粗品(DAS),进一步采用Sephacryl S-200纯化获得直接醇沉纯化品(DAPS),同时测定DAS及DAPS的体外抗氧化活性。结果显示,DAS的糖和蛋白质得率均最高,且3种方法提取的糖蛋白粗品蛋白质组成无明显差异;DAPS的总糖和蛋白质质量分数分别为(22.72±0.26)%和(71.18±0.62)%,分子量主要集中在245kD;DAS和DAPS对羟自由基的清除能力显著,在0.8 mg·mL-1下两者对羟自由基的清除率均高于90%,对超氧阴离子自由基及DPPH自由基也有一定清除能力。研究结果可为探索马氏珠母贝黏液功效组分提供理论基础数据。     

尼罗罗非鱼鱼皮胶原蛋白中游离基清除肽的制备及其抗氧化活性

采用菠萝蛋白酶和Alcalase酶依次对尼罗罗非鱼皮胶原进行复合酶解.研究了该酶解产物的体外抗氧化活性.实验表明,该酶解产物具有较强的超氧阴离子/羟基自由基清除活性和还原能力.采用不同截留分子量的超滤膜将该酶解物分离成5个组分,即TGH-Ⅰ(＞10 ku),TGH-Ⅱ(10～5 ku),TGH-Ⅲ(5～3 ku),TGH-Ⅳ(3～1 ku)和TGH-Ⅴ(10 ku).其中TGH-Ⅴ组分显示出最强的超氧阴离子自由基清除活性,因此采用凝胶过滤、离子交换和反向高压液相色谱技术对该组分进一步分离纯化.纯化得到的肽具有很强的超氧阴离子自由基清除活性,其IC50值为4.6 μg·mL-1.通过质谱分析可知,该肽的分子量位于311.3～932.8 u之间.     

盐度对点篮子鱼的存活、生长及抗氧化防御系统的影响

在容积为500 L的圆锥形塑料缸中分别用对照(自然海水)、配制的盐度为20、10、5的海水和淡水(地下水)养殖点篮子鱼［(67.76?26.12) g］,研究了不同盐度对点篮子鱼存活、生长和抗氧化酶活性的影响。结果显示,淡水组第9天出现死亡,至第27天时死亡率达100%,其余各组未出现异常,死亡率为0%。各盐度组鱼的特定生长率未表现出显著性差异,但盐度10组鱼体重显著高于盐度20和盐度5组,与对照组无显著性差异;盐度5组全长显著低于其余各盐度组。驯化40 d后,对各组鱼鳃、肝脏、肾脏和肌肉中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、抗超氧阴离子自由基、羟自由基活性检测结果显示,除盐度5组外,盐度10、20组点篮子鱼鳃、肝脏、肾脏、肌肉中SOD、CAT、抗超氧阴离子自由基和羟自由基活性在驯化40 d后均恢复到对照组水平,组间无显著性差异;盐度5组中鱼鳃的SOD和抗超氧阴离子自由基活性显著高于盐度10和盐度20组,肝脏、肌肉和肾脏中SOD、CAT、抗超氧阴离子自由基和羟自由基活性均恢复到对照组水平。点篮子鱼不同组织中SOD和CAT酶活力在不同盐度下均以肝脏中最高,肾脏和鳃次之,肌肉中最低;抗超氧阴离子自由基活力以肝脏中最高,极显著高于其余各组织中抗超氧阴离子自由基活力(P<0.01),肌肉次之,肾脏和鳃最低;羟自由基活力以肾脏中最高,显著高于其余各组织中羟自由基活力(P<0.05);鳃次之,肝脏和肌肉中最低,结果表明盐度能影响抗氧化酶活力大小,但并未影响鱼体内酶的分布。     

二种海胆性腺的脂质组成及其抗氧化活性

为分析马粪海胆和光棘球海胆性腺的脂质组成和抗氧化活性,采用核磁共振和气相色谱—质谱技术对2种海胆性腺油脂的脂质成分和脂肪酸组成进行分析,并通过DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法和超氧阴离子自由基清除法对其脂质的抗氧化活性进行研究。结果显示,马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质均以甘油三酯和磷脂为主,胆固醇、胆固醇酯和游离脂肪酸含量较低。马粪海胆和光棘球海胆性腺总脂富含C20:4n-6和C20:5n-3,且二者总量分别占脂肪酸含量的35.88%和34.98%;同时2种海胆性腺的中性脂和极性脂的脂肪酸组成存在较大差异,中性脂以C14:0和C16:0等饱和脂肪酸为主,而极性脂以C20:4n-6和C20:5n-3等多不饱和脂肪酸为主。马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均具有较好的清除能力,DPPH自由基IC₅₀分别为2.75和1.98 mg/mL,羟基自由基IC₅₀分别为0.33和0.29 mg/mL,超氧阴离子自由基IC₅₀分别为0.33和0.31 mg/mL。研究表明,马粪海胆和光棘球海胆性腺脂质具有较高的营养价值和抗氧化活性,可作为C20:4n-6、C20:5n-3和磷脂等功能性脂质因子的重要膳食来源。     

刺参蛋白胰蛋白酶解产物生物活性的研究

用胰蛋白酶对刺参蛋白进行水解,研究其酶解液所具有的抗氧化活性及其对肠道菌群的作用。通过测定刺参蛋白酶解液清除DPPH(二苯基苦基苯肼)自由基、Feton体系产生的羟基自由基和邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基的能力。同时,研究了刺参蛋白酶解液体外对肠道菌群生长的影响。结果表明,刺参蛋白胰蛋白酶解液具有抗氧化活性和促进乳酸杆菌生长、抑制大肠杆菌和产气杆菌生长的作用。     

缢蛏蛋白组分Y3的提取及抑癌活性研究

以新鲜缢蛏Sinonovacula constrzcta为材料,经25 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5,含0.14mol/L NaCl)缓冲液提取缢蛏粗蛋白、透析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析,得到1种具有抑癌生物活性的缢蛏蛋白组分Y3.SDS-PAGE电泳测得该蛋白组分的分子量约为64 kD.采用MTT比色法检测Y3对4种肿瘤细胞增殖的影响.结果显示,Y3对Hela和BGC803细胞有明显的抑制作用,而对SKOV3和HepG2抑制作用不明显.此外,探讨了Y3对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力.结果显示,该蛋白组分清除自由基的能力很强,在浓度为100 μg/ml时,Y3对羟基自由基清除率达到92.71％.在3μg/ml下,对超氧阴离子自由基的清除率达到59.73％.     

酶水解美洲帘蛤蛋白质及产物抗氧化活性初探

采用二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基法和改进的邻苯三酚法检测了胃蛋白酶对美洲帘蛤的水解作用及其水解液的抗氧化活性,探讨了酶质量分数、底物质量分数、pH、水解时间、温度对美洲帘蛤蛋白质水解度的影响.试验结果表明,酶质量分数为5%,底物质量分数为10%.pH 1.0,酶解3 h.温度为50℃时可以获得较高的水解度,同时水解液对超氧阴离子自由基和DPPH自由基有较高的清除率.     

植物源性抗氧化剂在水产养殖上的研究进展

正在水产养殖中,常因集约化养殖、营养不均衡、运输条件较差等因素,引起水产动物的氧化应激,诱导各种疾病发生(李昊阳等,2013)。氧化应激是由于动物体内活性氧(ROS)、超氧阴离子等自由基累积过量,自由基的产生超过清除的速度和能力,造成氧化系统与抗氧化系统之间失衡,损伤了蛋白质、核酸和糖类等生物大分子的结构,导致动物机体组织器官或生理功能受到影响。     

4种海藻膳食纤维清除自由基的比较研究

采用羟基自由基体系、超氧阴离子自由基体系、烷基自由基引发的亚油酸氧化体系和DPPH体系对江蓠(Gracilaria)、麒麟菜(Eucheuma)、马尾藻(Sargassum)、海带(Laminaria)4种膳食纤维清除自由基的活性进行研究。结果表明，在羟基自由基体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻、海带4种膳食纤维的IC50分别为5．2mg／mL、5．5mg／mL、4．4mg／mL和4．1mg/mL；在超氧阴离子自由基体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的IC50分别为4．8mg/mL和5．3mg/mL，而马尾藻、海带膳食纤维的最高清除率分别为36％和42％；在烷基自由基引发的亚油酸氧化体系中，江蓠、麒麟菜膳食纤维的最高清除率分别为36％和26％，马尾藻、海带膳食纤维的IC50分别为4．1mg/mL和3．5mg/mL；在DlPIH体系中，江蓠、麒麟菜、马尾藻膳食纤维的最高清除率分别为31％、11％和26％，海带膳食纤维的IC50为6．2mg/mL。在各体系中，与相应的专一性阳性参照物对比，证明这4种海藻膳食纤维对自由基有一定的清除作用。     

响应面法优化末水坛紫菜蛋白酶解工艺及其酶解液抗氧化活性研究

为实现末水坛紫菜(Porphyra haitanensis)的高值化利用,研究了末水坛紫菜的蛋白酶解工艺及其酶解液的抗氧化活性。以酶解产物水解度和还原力为指标,分别采用单因素和响应面优化实验筛选出最适蛋白酶和最佳酶解工艺参数;通过测定酶解液还原力对1,1-二苯基-三硝基苯肼(DPPH)自由基、羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2^-·)的清除作用,研究了最高水解度下的酶解液的抗氧化性活性。结果表明,中性蛋白酶是6种蛋白酶中的最适用酶;最佳酶解条件为:底物质量浓度35 g·L^-1、加酶量31 200 U·g^-1、温度45℃、pH 7.6、酶解时间5 h,在此条件下坛紫菜水解度达31.37%;酶解液还原力为2.2,对DPPH、·OH和O_2^-·自由基清除率分别为56.26%、85.84%和72.73%。结果表明,中性蛋白酶可以有效水解末水坛紫菜,水解后的酶解产物具有较好的抗氧化能力和应用前景。     

不同溶氧变动模式对鲻生长、能量代谢和氧化应激的影响

为研究不同溶氧变动模式对鲻生长、能量代谢和氧化应激的影响,实验设计5种溶氧变动模式,分别为一直维持正常溶氧N处理(7.0 mg/L)、正常溶氧-低氧变动N-L处理(7.0→1.5 mg/L)、超饱和溶氧-正常溶氧变动S-N处理(14.0→1.5 mg/L)、超饱和溶氧-正常溶氧-低氧变动S-N-L处理(14.0→7.0→1.5 mg/L)和一直维持超饱和溶氧S处理(14.0 mg/L).实验选择初始体质量为(16.07 ±0.11)g的鲻,在循环水装置中养殖56 d,然后测定其特定生长率、鲻血浆、肌肉、肝脏和鳃组织的乳酸(LD)含量、过氧化物歧化酶(SOD)活力、总抗氧化能力(T-AOC)、抗超氧阴离子活力(ASOR)、丙二醛(MDA)含量、总谷胱甘肽(T-GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)和还原型谷胱甘肽的含量.测定终末体质量为(31.47 ±1.44)g鲻的耗氧率、排氨率和氧氮比.结果显示,5种溶氧变动模式对鲻生长影响显著,N、S和S-N处理的鲻特定生长率显著高于N-L和S-N-L处理.S处理的鲻排氨率和氧氮比显著高于其他处理.5种溶氧变动模式均对鲻氧化应激指标含量影响显著.研究表明,肝脏是主要氧化应激器官.经历低氧变动模式的鲻,代谢速率下降,同时需要消耗较多的物质和能量参与氧化应激,用于生长物质和能量需求减少从而导致生长速度下降.T-GSH含量与氧化压力呈负相关,在应对低氧和超饱和溶氧产生的氧化压力中起重要调节作用.     

黄缘盒龟肉的酶解工艺优化及其体外抗氧化活性研究

龟类不仅营养价值高,而且具有潜在的药用价值,通过研究龟肉酶解产物的功能特性,可以科学认识其营养保健功能.以黄缘盒龟肉为原料,羟自由基清除率为指标,碱性蛋白酶为水解酶,通过正交试验L9(34)得到制备抗氧化肽的最佳酶解条件为pH值8.0、酶解温度55℃、料液比1.5∶20 g/mL、加酶量(酶/底物,E/S)3.0％、酶解时间3h,酶解液对羟自由基清除率达到82.08％.酶解产物体外抗氧化活性的结果表明,酶解产物对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基和过氧化氢均有较好的清除作用,还具一定的还原能力、亚铁离子螯合能力和亚油酸自氧化抑制能力.总体而言,黄缘盒龟酶解产物在不同的体外抗氧化体系中均表现出一定的抗氧化效果,具有良好的开发利用前景.     

鳕鱼鱼鳔抗氧化肽制备工艺研究

本研究以鳕鱼(Gadus morhua)鱼鳔为原料,选用6种不同蛋白酶对其进行酶解,通过比较酶解液的水解度与对DPPH自由基的清除能力,筛选出最佳蛋白酶为复合蛋白酶。通过单因素实验与响应面优化实验,确定最佳提取工艺：酶解时间为6 h、pH为7.21、温度为58.56℃、酶添加量为200 U/ml。研究结果显示,DPPH自由基清除率为61.1%,与理论值62.0%接近。鳕鱼鱼鳔肽体外清除自由基能力实验发现,酶解产物对羟基自由基与超氧阴离子自由基具有一定的清除能力,同时,具有较好的亚铁离子螯合能力。体外模拟胃肠消化后多肽的抗氧化活性变化,结果显示,体外模拟消化产物水解度有增加,对自由基的清除能力与亚铁离子螯合能力有一定的下降,其可能原因为,经模拟胃肠消化后多肽的结构发生一定的变化,导致了抗氧化活性的变化。     

缢蛏多糖的提取及抗氧化作用研究

以新鲜缢蛏的碎肉为材料,加水配制成一定比例的匀浆,利用超声波提取法对缢蛏碎肉匀浆进行多糖的提取。利用蒽酮—硫酸法对多糖得率进行计算。将得到的多糖粗品通过DEAE离子交换层析及G-75凝胶层析进一步分离纯化。通过邻苯三酚自氧化体系和Fenton体系测定所得样品的抗氧化能力。结果表明:利用超声波提取多糖的提取率为19.93%。多糖粗品通过DEAE离子交换柱,得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为43.89%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为57.80%。峰2对超氧阴离子的清除能率为57.80%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为77.83%。将DEAE峰2进行G-75凝胶层析得到2个峰,峰1对超氧阴离子的清除能率为83.08%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为94.76%。峰2对超氧阴离子的清除能率为74.41%,质量浓度为1 mg/ml时,对.OH清除率为52.41%。     

海芦笋黄酮的抗氧化作用及对CCl4致小鼠急性肝损伤的保护作用

为深入探究海芦笋黄酮的活性作用,研究海芦笋黄酮在体外的抗氧化作用及其对CCl_4导致的小鼠急性肝损伤的预防保护作用。通过分析海芦笋黄酮对4种自由基(DPPH自由基、ABTS自由基、羟基自由基及超氧阴离子自由基)的清除能力反映海芦笋黄酮的体外抗氧化能力。将海芦笋黄酮分为低、中、高3个剂量[75、150、300 mg/(kg·d)]对小鼠连续灌胃8 d,通过腹腔注射CCl_4建立小鼠急性肝损伤模型,测定海芦笋黄酮对血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)的活性以及肝脏组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽(GSH)水平的影响,观察肝脏病理变化。结果显示,在体外抗氧化实验中,海芦笋黄酮对4种自由基都有良好的清除效果。在CCl_4急性肝损伤模型中,与模型组对比,各剂量海芦笋黄酮均能使血清中ALT、AST、ALP酶活性、肝脏MDA含量显著降低;使肝脏SOD活性、GSH含量显著增加。海芦笋黄酮中、高剂量组与模型组相比,肝脏CAT活性显著升高。肝脏切片结果显示各剂量组肝组织损伤情况有不同程度改善。海芦笋黄酮对由CCl_4引起的小鼠急性肝损伤具有一定程度的预防保护作用,其急性肝损伤保护机制可能与黄酮对脂质过氧化程度的削弱、机体抗氧化能力的提高有关。     

几种海藻多糖抗氧化活性及体外抗脂质过氧化作用的研究

为了探讨不同海藻多糖抗氧化活性的差异,对琼枝(Betaphycus gelatinae)、石莼(Ulva lactuca)、匍枝马尾藻(Sargassum polycystum)、南方团扇藻(Padina australis)和棒叶蕨藻(Caulerpa sertularioides)的粗多糖的自由基清除及脂质过氧化抑制能力进行了研究。结果表明,5种海藻多糖的抗氧化活性存在明显的差异性,南方团扇藻和匍枝马尾藻多糖具有较强的还原力,对超氧阴离子和羟自由基均有较强的清除活性,其中南方团扇藻多糖对超氧阴离子清除活性较强[半抑制浓度(IC_(50))为(262.00±24.60)μg·m L~(-1)],明显高于匍枝马尾藻多糖[IC_(50)=(458.00±18.70)μg·m L~(-1)],对羟自由基的清除活性[IC_(50)=(388.00±45.29)μg·m L~(-1)]与匍枝马尾藻多糖相近[IC_(50)=(312.04±37.42)μg·m L~(-1)],匍枝马尾藻多糖对DPPH的清除能力[IC_(50)=(95.80±7.48)μg·m L~(-1)]显著高于其他4种海藻多糖,而南方团扇藻多糖对DPPH的清除能力较差[IC_(50)=(726.00±54.90)μg·m L~(-1)]。通过体外抗脂质过氧化作用研究发现,南方团扇藻多糖对肝细胞膜脂质氧化有较高的抑制能力[IC_(50)=(283.67±44.14)μg·m L~(-1)],并且对过氧化氢诱导的红细胞溶解有一定的保护能力[IC_(50)=(335.50±22.47)μg·m L~(-1)]。     

响应面优化沙蚕抗氧化物的超高压提取及其抗氧化活性研究

为了探讨超高压提取条件对沙蚕提取物中总酚含量的影响,采用超高压提取技术对双齿围沙蚕的抗氧化活性物质进行提取,比较不同提取条件(料液比、提取压力、提取时间及提取温度)对沙蚕提取物中总酚含量的影响,在单因素试验的基础上,采用3因素3水平的2次响应面法优化超高压提取工艺参数。结果表明,超高压提取沙蚕总酚的最佳工艺参数为:料液比1∶40(m/v,g/m L),提取压力378.72 MPa,提取时间28 min,提取温度20℃,在此提取条件下沙蚕提取物的总酚含量为8.39μg/mg干基,其清除超氧阴离子自由基、羟自由基及DPPH自由基的IC50(半数抑制浓度)分别为40.13、212.41及2.00 mg/mL。沙蚕超高压提取物具有很强的抗氧化活性。     

水产加工废弃物发酵法制备抗氧化肽的研究

以水产加工废弃物小黄鱼头与鱼骨、日本鼓虾虾皮为原料,接种蛋白酶产生菌ZS2发酵后,以紫外分光光度法和邻苯三酚自氧化法测定不同发酵时间发酵液抗氧化活性及其肽含量。结果表明,两种原料发酵一段时间后,肽的含量趋于稳定,15g左右的样品发酵后肽的含量维持在1600μg／ml左右;发酵液对超氧阴离子的清除效果在开始发酵30小时内处于较低水平,到发酵后期,随着时间的延长,发酵液对超氧阴离子的清除能力显著增强,鱼头鱼骨发酵液的抑制率超过50％;日本鼓虾发酵液对超氧阴离子的清除效果更为显著,抑制率在发酵102小时时超过80％。     

超氧化物歧化酶(SOD)的研究概况

超氧化物歧化酶是一种广泛存在于动物、植物、微生物中的金属酶,是生物体内抗氧化酶系中主要成员之一,按其结合的金属离子可分为Fe-SOD、Mn-SOD、CuZn-SOD三种,它们催化超氧阴离子自由基O2-·发生歧化反应,从而清除O2-·,因而它能防御氧毒性,增强机体抗辐射损伤能力,防衰老。本文对SOD的发现和分类,分布和定位,结构,理化性质,生理功能以及SOD应用前景进行了综述。