缢蛏蛋白组分Y3的提取及抑癌活性研究

以新鲜缢蛏Sinonovacula constrzcta为材料,经25 mmol/L Tris-HCl(pH 7.5,含0.14mol/L NaCl)缓冲液提取缢蛏粗蛋白、透析、DEAE离子交换层析、Sepharose CL-6B凝胶层析,得到1种具有抑癌生物活性的缢蛏蛋白组分Y3.SDS-PAGE电泳测得该蛋白组分的分子量约为64 kD.采用MTT比色法检测Y3对4种肿瘤细胞增殖的影响.结果显示,Y3对Hela和BGC803细胞有明显的抑制作用,而对SKOV3和HepG2抑制作用不明显.此外,探讨了Y3对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除能力.结果显示,该蛋白组分清除自由基的能力很强,在浓度为100 μg/ml时,Y3对羟基自由基清除率达到92.71％.在3μg/ml下,对超氧阴离子自由基的清除率达到59.73％.     

缢蛏蛋白肽制备工艺优化及其清除羟自由基作用

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过Sephadex G-15凝胶层析测定其分子质量分布。结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6mg/ml、加酶量3%、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60%,IC50值为1.89mg/ml,蛋白肽中80%以上是分子质量小于1500Da的小分子肽。     

蜈蚣藻多糖纯化及抗氧化作用的研究

采用热水浸提法提取蜈蚣藻多糖,通过对超氧阴离子（·O2-）、羟基自由基（·OH）清除效果的研究,评价了蜈蚣藻多糖的体外抗氧化活性,以及对蛋白脱除率和多糖损失率的分析,比较了TCA法和Sevage法脱蛋白的效果,利用Sephadex G-150柱纯化蜈蚣藻多糖,并分析了其部分理化性质和相对分子质量分布.结果表明,蜈蚣藻多糖对·OH清除率的IC50为4.62 mg/mL,对·O2-清除率的IC50为0.62mg/mL,具有体外抗氧化效果;Sevage法脱蛋白效果优于TCA法,蛋白脱除率达85.55％,多糖损失率为15.93％;蜈蚣藻多糖是一种以多糖为主、含有糖蛋白的复合物,其相对分子量的分布范围在3.5×105 ～1.2 ×105 Da.     

Optimization of the preparation of bioactive peptides from Sinonovacula constricta and its hydroxyl free radical scavenging activity

以缢蛏为试验材料,采用羟自由基清除率为评价指标,从胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶和中性蛋白酶5种蛋白酶中筛选最适水解用酶,在单因素试验基础上使用响应面法优化酶解工艺条件,考察缢蛏蛋白肽的羟自由基清除能力并通过SephadexG-15凝胶层析测定其分子质量分布.结果表明,碱性蛋白酶酶解制备的缢蛏蛋白肽清除羟自由基能力明显强于其他蛋白酶,优化后的碱性蛋白酶水解缢蛏蛋白工艺条件为底物浓度6 mg/ml、加酶量3％、pH8.0、温度55℃、酶解时间4h,蛋白肽的羟自由基清除率为76.60％,IC50值为1.89 mg/ml,蛋白肽中80％以上是分子质量小于1500 Da的小分子肽.     

刺参肠、性腺酶解多肽体外抗氧化作用研究

刺参（Apostichopus japonicus）肠和性腺是刺参加工过程中的副产物,为丰富其高值化利用的基础理论,研究了刺参肠、性腺酶解过程中可溶性蛋白和氨基酸态氮质量浓度变化,分析了酶解多肽对11-二苯基苦基苯肼（DPPH·）、羟基自由基（·OH）和超氧阴离子自由基（O2^-·）的体外清除效果。结果显示,刺参肠和性腺经生物酶水解后,水解度分别为53.63%和63.40%,酶解液中可溶性蛋白质量浓度分别为4.62 mg·mL-1和5.01 mg·mL-1,氨基酸态氮质量浓度分别为0.43 mg·mL-1和0.56 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽清除DPPH·的半抑制质量浓度（IC50）分别为3.31 mg·mL-1和0.88 mg·mL-1,清除·OH的IC50分别为9.53 mg·mL-1和8.81 mg·mL-1,清除O-2·的IC50分别为6.42 mg·mL-1和3.22 mg·mL-1。刺参肠和刺参性腺酶解多肽具有一定的体外抗氧化效果,应用前景广阔。     

罗非鱼活性肽分离及抗氧化能力研究

利用正交试验L9(34),以清除超氧自由基能力为指标,分别对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶水解罗非鱼肉的水解条件进行优化,并对最佳清除率下的两种酶解物进行Sephadex G-50凝胶柱分离,检测了各组分对超氧自由基清除率及活性肽分子量分布情况.结果表明:中性蛋白酶在45 ℃、酶的质量分数2.0%、水解105 min及肉水比1∶3的水解条件下对超氧自由基有较好清除作用;木瓜蛋白酶在60 ℃、酶的质量分数2.0%、时间150 min及肉水比1∶2的水解条件下对超氧自由基有较好清除效果.木瓜蛋白酶酶解物在分子量为660 Da的多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率,中性蛋白酶酶产物在分子量为1320 Da多肽洗脱峰具有最大超氧自由基清除率.     

不同方法纯化的尼罗罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐的理化特性

研究罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐(CH-0)及乙醇纯化(CH-Ⅰ)与透析纯化组分(CH-Ⅱ)的理化特性及体外自由基的清除能力,为多肽螯合盐的纯化研究提供理论基础。结果表明,CH-0的蛋白质含量(干基计)为71.86%,CH-Ⅰ和CH-Ⅱ分别为75.94%与78.83%;CH-0的锌含量为16.08%,CH-Ⅰ和CH-Ⅱ分别为14.49%与12.20%;凝胶层析结果显示,CH-Ⅰ、CH-Ⅱ与CH-0相比,有3个相同的主吸收峰,且大分子与小分子杂峰减少;氨基酸分析结果表明CH-Ⅱ中的Asp、Glu、Gly、Lys、Arg和His的含量均高于CH-Ⅰ,且都高于CH-0,与透析纯化相比,乙醇纯化必需氨基酸与支链氨基酸损失较大;CH-0、CH-Ⅰ和CH-Ⅱ对羟基自由基与DPPH自由基的清除率随浓度增强而增强,以IC50值计,CH-Ⅰ、CH-Ⅱ比CH-0的清除能力分别提高了8.92%、24.01%与38.06%、46.13%。罗非鱼下脚料,蛋白酶解物(EH10K)有较好的超氧阴离子自由基清除能力,浓度为10.00 mg/m L时清除率为69.27%,而CH-0、CH-Ⅰ与CH-Ⅱ则显示了负清除作用。纯化方法对罗非鱼下脚料蛋白酶解物锌螯合盐的理化特性有影响。     

低分子量海带岩藻聚糖硫酸酯的清除活性氧自由基和体内抗氧化作用

用化学发光分析法研究了3种低分子量涨带岩藻聚糖硫酸酯（LMWF－M，LMWF－I，LMWF－IV）体外清除超氧阴离子自基基（O2^-)及羟基自同基（．OH）的作用，并观察了LMWF－M对高脂血症大鼠的抗氧化作用，结果表明阴离子分量海带岩藻聚糖硫酸酯组分均有清除活性氧自由基的能力，随体系中LMWF浓度的增加，其清除活氧自由基的能力增强，LMWF－I清除自同基的能力最强，它对O2^-的IC50为0.044mg.mL^-1,对.OH的IC50为0.062mg.mL^-1,，LWMF－M能显著降低高脂血症大鼠箅清和组织中LPO含量（P＜0．01），增强SOD活力（P＜0．01）.     

胰蛋白酶水解文蛤蛋白制备抗氧化小肽实验研究

采用胰蛋白酶水解文蛤蛋白以羟自由基清除率为指标制备抗氧化小分子肽。结果表明：胰蛋白酶解液G-15凝胶层析的分离组分在第3管有最大吸收峰,且在2个检测波长下,两者出现峰的位置基本一致。但不同洗脱峰对应的羟自由基清除率差异较大,最大羟自由基清除率为59%。可见最大洗脱峰与最大羟自由基清除率并无一致性。利用Tricine-SDS -PAGE聚丙烯凝胶电泳对各洗脱峰抗氧化小肽进行分离纯度检测表明第4管纯度佳,但其羟自由基清除率只有25%、分子量为460。     

黄鳝皮肤黏液抗菌肽的分离纯化及其部分特性研究

以黄鳝皮肤黏液为材料,通过Sephadex G-50凝胶层析和DEAE Sepharose Fast Flow离子交换层析,分离纯化了具有抗菌和镇痛活性的多肽MAS-Ⅳ-4,用Tricine-SDS-PAGE测得其分子量为10.4 kD,用显微熔点仪测得其熔点为208～211℃.用抑菌圈法测定其抑菌活性,结果表明,MAS-Ⅳ-4对嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌有较强的抑菌效果.此外,每只注射0.75 ml以上的MAS-Ⅳ-4样品液能显著提高小白鼠的痛阈值.MAS-Ⅳ-4还具有微弱的溶血活性和丝氨酸蛋白酶抑制活性.     

响应面法对缢蛏粗多糖提取工艺的优化

以秦皇岛海域的缢蛏为原料,通过不同提取方法的比较,确定超声辅助酶解提取法为较优的多糖提取方法,并通过响应面法对缢蛏多糖提取工艺进行优化。试验结果表明,原料超声预处理30min后再进行酶解提取,在添加3.99%的木瓜蛋白酶、50.9℃、酶提8.94h条件下缢蛏多糖提取量达9.41mg/g(鲜)。该方法对研究海水贝类多糖功能性产品原料的选取及产品的开发与应用有重要意义。     

超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜多糖及其抗氧化活性的研究

该试验比较了超声波法、过氧化氢法、超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜(Porphyra haitanensis)多糖的效果,最后以1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率为指标,通过单因素和正交试验优化了超声波辅助过氧化氢法降解坛紫菜多糖的工艺。对比了降解前后多糖的抗氧化活性,并分析了其与分子量、结构特征及理化性质等的相关性。结果表明,在过氧化氢体积分数10%、温度65℃、超声波辅助2.5 h条件下,该多糖降解前后DPPH自由基清除率的半抑制浓度(Half maximal inhibitory concentration,IC50)由9.37 mg·mL^-1降为1.71 mg·mL^-1;凝胶渗透色谱结果显示分子量由大于670 kD降为235835 D;傅里叶红外光谱表明多糖特征吸收峰依旧存在;高效液相色谱分析发现单糖组成大致相同,糖醛酸质量分数有所降低;理化性质显示硫酸基质量分数增高,3,6-内醚半乳糖质量分数明显降低。因而超声波辅助过氧化氢法可较好地降解坛紫菜多糖,并可改善理化性质及结构特征进而增强抗氧化活性,为低分子量多糖的制备及构效关系分析提供依据。     

乳山寨滩涂缢蛏半人工采苗的研究

为解决北方沿海缢蛏养殖的苗种问题，在乳山寨滩涂建立缢蛏半人工采苗场，对苗坪适时进行翻耕平整，加强培育管理，１９９３年４ｈ采苗场共采蛏苗８７７０万粒，平均２２１５粒／，平均壳长２．５ｃｍ；１９９４年４０ｈ采苗场共采蛏苗５亿粒，平均１４２８粒／，平均壳长２ｃｍ。结果发现，附苗前翻松平整的苗坪附苗数量远高于未翻松平整的苗坪。山东沿海移养缢蛏性腺于９月中旬至１０月上旬进入成熟期，１０月上、中旬开始放散     

CMC在缢蛏涂覆保鲜上的应用研究

采用羧甲基纤维素钠（CMC）作为缢蛏（Sinonovacula constricta）保鲜涂覆胶,在5℃下保藏7 d,以缢蛏的活泼度、成活率、水分蒸发量及挂胶量等为指标对其保鲜效果进行评价。试验结果表明,采用CMC保鲜胶涂覆的缢蛏,5℃下7 d的成活率为100%,而对照组的成活率为60%,涂膜处理能降低水分蒸发速度,保鲜效果显著。     

缢蛏选育系F5的生长优势比较及育种效应分析

以6个缢蛏(Sinonovacula constricta)自然群体(浙江象山群体、浙江乐清群体、福建霞浦群体、福建长乐群体、江苏射阳群体和上海崇明群体)为材料,构建基础群体F_0,采用群体选育方法进行多代连续选育(选择强度2.063),比较了选育系F_5与对照群体的生长差异,并估计F_5的选择反应、现实遗传力和遗传获得。结果表明,F_5的卵径及受精率与对照组无显著差异(P0.05),但F_5的变态率、存活率及后期壳长生长明显优于对照组(P0.05);7~360日龄F_5壳长的选择反应、现实遗传力与遗传获得的变化范围分别为0.30~0.78,0.14~0.37和4.83%~42.18%,平均为(0.49±0.06),(0.23±0.08)和(26.49±11.73)%。研究结果表明,对缢蛏的连续多代选育是有效的,可以明显提高其存活能力和主要经济性状。     

缢蛏在-40℃冻藏过程中的质量变化

测定缢蛏可食用部分的挥发性盐基氮、游离脂肪酸、盐溶性蛋白、巯基及感官评定等指标,研究缢蛏在-40℃冻藏过程中的质量变化。试验结果表明,缢蛏各部位的挥发性盐基氮含量随着贮藏时间的延长而增加,缢蛏整体挥发性盐基氮含量在26周时达到17.7 mg/100 g,超过15 g/100 g的国家卫生标准;游离脂肪酸含量逐渐增加;感官评分逐渐下降,贮藏前5个月仍处于可接受阶段;缢蛏各部位的肌原纤维蛋白的溶出量和巯基含量均呈下降趋势,且在贮藏前14周下降较慢。缢蛏在-40℃冻藏条件下可贮藏5个月。     

植物多糖的提取方法和工艺

多糖的生物活性倍受关注,其提取方法及工艺已成为目前研究焦点之一。在植物多糖提取的研究中采用了许多不同的方法,包括溶剂提取法、酸提法、碱提法、酶解法、超滤法、超声波强化法、微波法。本文对这些方法在不同多糖提取上的运用进行综述,以期为该领域的生产和研究工作者提供参考。     

Culture possibilities of the razor clam Ensis arcuatus (Pharidae: Bivalvia)

This study investigated razor clam Ensis arcuatus culture from larval rearing to commercial size to assess it's aquaculture potential. Broodstock was spawned several times in hatchery facilities to demonstrate that larval availability is not a constraint for hatchery production. Larval culture lasted 20 days, showing an average survival of 14.35%. The razor clam seed reached a size of 28.5 mm at 4 months. Seed culture is feasible; however, it is constrained by the fact that razor clams need to be buried. Higher survival was observed when culturing razor clam seed with a substrate (82–83%), irrespective of the substrate grain size, while containers held without a substrate showed a significantly lower survival (56.5%). We showed that it is possible to rear E. arcuatus juveniles in bottles, with survival as high as 94–95% being achieved. The length increase of the hatchery‐produced E. arcuatus over 600 days was described by the equation Ln L=4.5+(?141.17/t), where L is length in mm and t is time in days. On‐growing showed adequate survival rates and it took 2–3 years to reach commercial size.     

两种微藻多糖的性质及结构特征的研究

利用冻融破碎、乙醇沉淀及凝胶层析等手段从培养至平衡期后的扁藻和螺旋藻细胞内提取分离出不同级分的多糖,对其理化性质和结构特征进行了研究和对比分析。结果表明,同一乙醇体积分数范围沉淀的扁藻多糖的分子量比螺旋藻多糖的分子量略大,并且多糖中结合的蛋白质比螺旋藻多糖结合的蛋白质略高;但扁藻多糖的糖基含量、溶解度和相对黏度却低于螺旋藻多糖。红外光谱结果表明螺旋藻多糖和扁藻多糖中均含有硫酸基,后者还含有氨基。这些结果说明不同微藻多糖及同一微藻的不同级分多糖,其组成不相同,而且扁藻多糖比螺旋藻多糖更复杂。所得结果为2种微藻多糖的实际应用提供了理论和试验基础。     

贝类多糖的生物活性及其制备技术研究进展

针对近年来国内外关于贝类多糖的研究现状,论述其增强免疫力、抗肿瘤、抗衰老等多种生物活性,并综述超声波辅助水提法、柱层析法等多种制备技术的研究进展,最后展望贝类多糖的发展趋势和市场前景。