不同培养基继代培养球孢白僵菌对西花蓟马毒力和产孢量的影响

【目的】通过开展连续继代培养对高毒菌株产孢和毒力的影响研究,获得对西花蓟马(Frankliniella occidentalis)毒力和产孢量均高且稳定的球孢白僵菌（Beauveria bassiana）菌株,进一步提出有效防止菌株退化、优良菌株保存和改良的方法与措施,为高效菌株的规模化生产提供参考。【方法】室内条件下,采用浸虫法,用浓度为1×107个孢子/mL球孢白僵菌悬浮液处理西花蓟马初羽化成虫,分别测定28株不同来源的菌株对西花蓟马的毒力;并将筛选出的4株高毒力菌株的分生孢子分别涂布于玉米琼脂（CMA）培养基与SDAY培养基上,比较不同菌株以及不同培养基之间产孢量的差异,筛选出高产孢菌株与产孢培养基,以筛选得到的白僵菌菌株为初始菌株F0,把F0代球孢白僵菌分别接种于CMA培养基、添加蝉蜕的CMA培养基和添加西花蓟马虫尸粉的CMA培养基,分别测定经过不同培养基连续5代继代培养得到的球孢白僵菌对西花蓟马成虫的毒力,并测定产孢量。使用模型模拟分析球孢白僵菌菌株经过不同培养基继代培养后培养代数与产孢量的关系,并对不同培养基培养得到的不同培养代数的白僵菌菌株的产孢量与其对西花蓟马的致死中时（LT₅₀）进行回归分析,研究毒力与产孢量的相关关系。【结果】经过室内毒力测定,处理5 d后,菌株DZDC-9、GZGY-5、WLMQ1-8、SZ-26对西花蓟马成虫的校正累积死亡率均高于90%,LT₅₀均在3 d内,毒力显著高于其他菌株;比较高毒力菌株在两种产孢培养基上的产孢量,发现4株球孢白僵菌的产孢量存在显著差异,菌株DZDC-9的产孢量显著高于其他3株,4株菌株在CMA培养基中的产孢量均明显高于SDAY培养基。随着白僵菌菌株在CMA培养基上连续5代的继代培养,菌株对西花蓟马成虫的致病力呈现下降趋势,从第3代开始致病力显著降低,而添加蝉蜕的CMA培养基培养得到的不同培养代数的分生孢子对西花蓟马致病力则没有显著差异,添加西花蓟马虫尸粉的CMA 培养基培养得到的不同代数的分生孢子对西花蓟马致病力有一定的增强趋势;通过模型可以发现单纯以CMA培养基继代培养白僵菌的产孢量随培养代数呈现指数下降,而在培养基中添加蝉蜕或西花蓟马虫尸粉白僵菌产孢量则随培养代数呈现指数上升,蝉蜕或西花蓟马虫尸粉的添加对产孢量有一定的增强作用。白僵菌菌株产孢量与毒力存在一定正相关关系,产孢量相对较高的菌株对西花蓟马成虫的致病力相对较高,致死中时短。【结论】筛选得到一株对西花蓟马高效的白僵菌菌株DZDC-9,产孢培养基中加入蝉蜕和西花蓟马虫尸可以维持菌株生长特性,延缓毒力退化趋势;同一菌株的产孢量可以作为菌株毒力评价的一个指标。     

紫外诱变选育球孢白僵菌高产菌株

对球孢白僵菌403001进行了孢子紫外选育,获得一毒力较高、性能稳定的突变株403001-38.利用此突变株继代培养10代,得到的产孢量均高于诱变出发株,其毒力为出发菌株的2.1倍,这表明该菌株具有较好的遗传稳定性.     

白僵菌菌株退化与培养条件关系及其控制技术

通过对 1 0个菌株在 5种培养基上继代培养情况检测 ,探讨了不同培养基对菌种稳定性、产孢量和毒力的影响 ,结果显示 ,菌落局变的分离株多表现为菌落生长速率增加 ,产孢能力下降 ,对寄主害虫毒力降低趋势 .经过比较 ,以营养贫乏的 PDA培养基培养容易产生变异 ,以含虫尸、蛋白胨加 PDA培养基 (CPPDA)培养最为稳定 ,表明氮源是影响变异的主要因子 ,但菌株变异主要决定于本身的遗传物质 ;并提出了控制菌种退化的有效措施     

继代培养球孢白僵菌对斜纹夜蛾幼虫毒力和产孢量的影响及菌株复壮研究

【目的】明确球孢白僵菌(Beauveria bassiana)在连续继代培养过程中对斜纹夜蛾(Spodoptera litura)二龄幼虫毒力、产孢量的影响,并进行菌种复壮研究,为进一步利用球孢白僵菌对斜纹夜蛾的生物防治提供参考。【方法】将球孢白僵菌SCAUJH19继代培养10代,得到F₁～F₁₀代菌株并测定产孢量。采用浸虫法分别用F₁～F₁₀代菌株处理斜纹夜蛾二龄幼虫,测定其对斜纹夜蛾二龄幼虫的毒力;建立模型分析球孢白僵菌继代培养代数、毒力与产孢量的关系及毒力退化规律。采用活虫复壮法对F₄、F₆、F₈、F₁₀代菌株进行复壮,比较复壮前后对斜纹夜蛾二龄幼虫的毒力效果,并测定产孢量。【结果】球孢白僵菌F₁～F₅代菌株对二龄斜纹夜蛾幼虫毒力无显著差异,处理7 d时校正死亡率为42.44%～45.22%,而F₆、F₈、F_1...     

红枣黑斑病链格孢属真菌的生物学特性

为研究新疆红枣中链格孢毒素的产生规律，对从南疆不同枣园黑斑病‘骏枣’中分离纯化的10株链格孢属真菌（5株链格孢菌和5株细极链格孢菌）的菌落生长速率、产孢量、孢子萌发率、菌苔致病力、毒素产生种类及含量等生物学特性进行研究，结果表明：（1）各菌株在红枣培养基上的生长速率、产孢量等都优于PDA培养基，但是产毒种类及含量却普遍低于PDA培养基；（2）在红枣培养基和PDA培养基上，链格孢菌（Alternaria alternata）均比细极链格孢菌（Alternaria tenuissima）的生长速率更快、产毒种类及含量更多；（3）综合考虑产孢量、孢子萌发率和致病力，JZAa05为优势菌株。     

球孢白僵菌不同分离株生物学特性及对茶丽纹象甲成虫的杀虫活性研究

测定了从球孢白僵菌侵染的茶丽纹象甲虫尸上分离的8个分离株的生长速率、产孢量和孢子萌发率等生物学性状,以及对茶丽纹象甲成虫的杀虫活性,旨在筛选出感染该虫的高致病力菌株.结果表明:在萨氏培养基(SDAY)上,8个分离株从菌落形态上可分为菌丝型和孢子型两类.其中,菌丝型菌株XJBb3001和XJBb3007生长速率最快,但菌...     

辽宁北部玉米螟白僵茵高致病性菌株筛选

采集并分离来源于辽宁北部7个市县的7株野生球孢白僵菌菌株,比较了各菌株产孢量、萌发率和孢子的生长速率生物学指标及对玉米螟3龄幼虫毒力水平进行测试,筛选对玉米螟高致病性的白僵菌菌株。试验结果表明：不同菌株间存在较大的差异,综合各项生物学特性指标数据,筛选出生物学特性表现优良的高致病性菌株1株,即TL3菌株。TL3菌株产孢量达到18．35×107个／cm2,14h的萌发率为93．29％,营养生长量为2．64mm／d。通过对玉米螟3龄幼虫毒力的测定,死亡率达到了98．33％。各项生物学特性指标均显著优于生产上广泛应用的对照（CK）菌株。     

培养基营养条件对棉铃红粉病菌菌丝生长和孢子形成的影响

鉴定了安徽省棉铃红粉病的病原菌为粉红单端孢菌[Trichotheciumroseum(Pers.)Link],研究了不同培养基、碳源、氮源对该菌生长速率及产孢量的影响。结果表明,该菌在马铃薯淀粉培养基上生长最好,产孢量在PDA培养基上最高;该菌在以甘油为碳源的培养基上生长最快,产孢量最高;在以蛋白胨为氮源的培养基上生长最快,产孢量最高。     

继代培养对球孢白僵菌抗旱力的影响

检测了球孢白僵菌继代培养中菌落局变产生的分离株在不同湿度下分生孢子的发芽率,结果显示继代培养能增强菌株的抗旱力,但菌株生活力减弱。     

一种稻瘟病菌培养产孢培养基的配制与效比分析

[目的]筛选产孢效果好、成本低、操作简便的培养基。[方法]采用稻秸浸出液与PDA培养基为主要成分配制6组不同培养基,比较其稻瘟病菌的培养产孢情况。[结果]配组稻秸浸出液∶PDA培养基=1∶1具有最快的培养速率和最大的产孢量,并且与燕麦片培养基和大麦粒培养基相比在产孢效率和经济成本上也更具有优势。[结论]该新型培养基在水稻稻瘟病菌致病性与水稻品种抗瘟性鉴定研究中具有较高的应用价值。     

球孢白僵菌胞外蛋白酶产生水平及其与毒力关系的研究

检测了球孢白僵菌不同类型分离株的胞外蛋白酶产生水平,总体显示出继代培养将降低菌株胞外蛋白酶活性,胞外蛋白酶产生水平与菌株毒力有一定的协同性,但相关不显著。     

白僵菌酯酶同工酶、脂肪酸与其毒力的关系

研究了２９株白僵菌以及同一菌株不同世代的酯酶同工酶、脂肪酸与其对马尾松毛虫毒力的关系,结果表明,同一菌株不同世代的酯酶酶谱虽然相同,但其活性却随着继代数的增加而依次减弱,而且酶活性的这种变化与其对马尾松毛虫毒力的变化表现出了明显的一致性。不同菌株酯酶同工酶酶谱的差异也与菌株的毒力表现出了相关性,其中靠近阳极的几条主酶带与菌株的毒力密切相关。不同菌株以及不同世代的脂肪酸组分及含量与其毒力没有相关性。     

白僵菌菌种退化及其控制

以菌落局交作为球孢白僵菌菌种变异的标志,研究了２个野生型菌株及由其分离的８个单孢株在继代培养中的变异现象。同时探讨了８种培养基,６种氮源,１５种碳源,８种ｐＨ,不同温、湿度、先照平时菌种稳定性、产孢量、毒力的影响。结果显示：白僵菌的变异主要受控于菌株本身的遗传物质。常见的８种培养基以营养贫乏的ＰＤＡ、ＳＤＡ、ＣＭＡ最易发生变异,ＳＤＡＹ较稳定;氮源是影响菌落局变的最主要因子,在供试的６种氖源中,动物性氮源较植物性氮稳定,蛋白胨最优,植物性氮源中麦麸稳定性优于米糠、黄豆粉;碳源（除菊糖外）、Ｃ／Ｎ、ｐＨ对菌株稳定性影响不明显;低温、低湿、全光照下引起的变异最低。     

不同培养基对辣椒疫霉致病力的影响

辣椒疫霉的菌落形态、生长速率、产生孢子囊的能力、致病力的强弱与培养基种类有很大关系。其中在燕麦片培养基上生长最快 ,致病力也最强 ,但致病力的强弱与菌丝生长速率没有关系 ;菌株在同一培养基 (营养条件 )下生活一定时间后 ,其致病力强弱发生了分化 ,认为营养条件是影响辣椒疫霉致病力分化的因素之一     

Immunization as a factor affecting the course of septicemic anthrax

Immunization of guinea pigs with alum-precipitated antigen increased resistance approximately 1600 times. The growth rate of Bacillus anthracis, in the septicemic phase, was the same in both normal and immunized animals; however, the number of bacilli per milliliter of blood at death was decreased by 75 percent in immunized animals. Neither the enhancement of virulence by treatment with egg yolk nor the size of the challenge dose affected the growth rate or the number of bacilli per milliliter of blood at death. Mean time to death for the treatments tested varied from approximately 20 to 100 hours. Nonimmunized animals challenged with a strain of low virulence had a terminal number of bacilli per milliliter of blood and a growth rate in the blood the same as that for the highly virulent strain     

香菇病毒对香菇菌丝生长和漆酶活性的影响

利用电镜观察检测到不正常生长的香菇菌丝中存在大量直径约30 nm的球状病毒,进一步酶解和电泳检测确定病毒的核酸为单链RNA。采用尖端生长点传代技术,经过3代传代,得到不含病毒的香菇菌株,该菌株在固体和液体培养基中的生长速度都远远高于带有病毒的菌株。脱除病毒的菌株在液体发酵中产漆酶的量也明显高于带有病毒的菌株,说明该香菇病毒对香菇的生长和产酶生理过程有明显的抑制作用。     

甜菜夜蛾优良球孢白僵菌菌株的筛选

测定初筛获得的6个球孢白僵菌菌株的毒力、产孢量、萌发率、胞外蛋白酶活性及菌株生长速度等多个生物、生态学指标,从专业角度构建最优序列,经灰色分析和不同菌株毒力效价显著性比较,筛选出了两株具有较大生产潜力的优良菌株BD-B015和BD-B038,对甜菜夜蛾的校正死亡率分别为88.33%和86.70%,僵虫率分别为86.67%和85.27%。     

尖孢镰刀菌异核体及其不同核型分离子的孢子萌发时期同工酶分析

在获得尖孢镰刀菌棉花萎蔫专化型异核体菌株及其3个稳定的不同核型分离子的基础上，选择孢子萌发时期的幼嫩菌丝制备粗酶提取液，采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法进行了7种同工酶分析。结果表明，酯酶和乳酸脱氢酶电泳图谱在4个样品中完全一致；没有致病能力的菌株在葡萄糖－6磷酸脱氢酶在苹果酸脱氢酶的表达量高于致病力强的菌株；致病力强的菌株没有乙醇脱氢酶的表达。在4个样品中都没有检测到苹果酸酶和过氧化氢酶。     

10种常用杀菌剂对水稻纹枯病菌的敏感性及其协同作用

【目的】筛选出对水稻纹枯病菌具有较好协同作用的药剂组合,为田间防治水稻纹枯病和开发增效组合制剂提供理论依据。【方法】以水稻纹枯病菌为材料,采用菌丝生长速率法测定10种常用杀菌剂原药（包括嘧菌酯、啶氧菌酯和吡唑醚菌酯等8种甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂,丙环唑和苯醚甲环唑2种三唑类杀菌剂）对水稻纹枯病菌的毒力,及丙环唑·肟菌酯组合对水稻纹枯病菌的协同作用;采用电导率法、可溶性蛋白试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒和过氧化物酶（POD）试剂盒等评价杀菌剂组合对水稻纹枯病菌生理生化特性的影响。2019年8月进行田间试验,评价250 g/L丙环唑EC、50%肟菌酯WDG及组合（250 g/L丙环唑EC与50%肟菌酯WDG有效质量比1:5）对水稻纹枯病的田间防治效果。【结果】10种杀菌剂原药对水稻纹枯病菌均有较高的毒力,EC₅₀为0.20～1.61 μg/mL,除唑菌酯和醚菌酯对纹枯病菌的毒力相对较弱外,其余8种杀菌剂对纹枯病菌菌丝生长均具有较好的抑制作用,EC₅₀均小于1.00 μg/mL,以吡唑醚菌酯的毒力作用最强,EC₅₀为0.20 μg/mL。丙环唑原药与肟菌酯原药按有效质量比1:10、1:5和5:1组合时对水稻纹枯病菌均具有较好的协同作用,其中以1:5组合时协同作用较明显,EC₅₀为0.24 μg/mL,共毒系数（CTC）为393.41;用该组合处理水稻纹枯病菌后,能提高病菌细胞膜的通透性,明显抑制蛋白的合成,降低SOD和POD活性。田间喷施250 g/L丙环唑EC与50%肟菌酯WDG组合后21 d,对水稻纹枯病的田间防治效果达94.08%,高于单剂250 g/L丙环唑EC（88.79%）和50%肟菌酯WDG（92.72%）处理。【结论】丙环唑·肟菌酯对水稻纹枯病菌具有较好的协同作用,对水稻纹枯病具有较好的防治效果,且可极大减少药剂使用量,具有开发成水稻纹枯病增效组合制剂的潜力。