类志贺氏菌毒素Ⅱ型变异体B亚单位基因的表达与鉴定

将由 Ｐ Ｃ Ｒ 扩增并克隆在ｐ Ｕ Ｃ１８ 质粒载体中的ｓｌｔⅡｅ Ｂ基因切出,并按预定的阅读框架插入表达性质粒载体 ｐ Ｇ Ｅ Ｘ６ｐ１ 中的谷胱苷肽转移酶（ Ｇ Ｓ Ｔ）基因的下游。重组质粒 ｐｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ在大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１ 中以融合蛋白的形式表达 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（命名为 Ｇ Ｓ Ｔ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ）,即 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ蛋白（７５６８ｋ Ｄ）与谷胱苷肽转移酶（２７３３５ｋ Ｄ）相连组成分子量为 ３４８８５ｋ Ｄ 的融合蛋白。通过对重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ的菌体裂解物的 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ 电泳分析,以及根据抗原抗体结合反应的免疫学特性,通过 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ 鉴定,重组大肠杆菌 Ｐ Ｐ Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ（含有重组质粒 ｐｐｓｌｔⅡｅ Ｂ的大肠杆菌 Ｂ Ｌ２１）可以大量表达融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ。根据 Ｇ Ｓ Ｔ 可与其底物谷胱苷肽结合的特性,用谷胱苷肽结合的 Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ４ Ｂ制备的亲和凝胶纯化表达产物,纯化的表达产物经 Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ,可以鉴定到分子量约为 ３５ｋ Ｄ 的蛋白条带,这与融合蛋白形式的 Ｓ Ｌ ＴⅡｅ Ｂ分子量（３４８８５ｋ Ｄ）相当。     

绿脓杆菌外毒素A受体结合亚单位基因的克隆与表达

为防治绿脓杆菌感染造成的细胞坏死及多器官衰竭，本试验克隆了含绿脓杆菌外毒素Ａ（ＰＥＡ）结合亚单位（Ⅰ区）和部分跨膜亚单位（Ⅱ区）编码３０９个氨基酸的约１０００ｂｐ的基因片段，以正确阅读框架将该片段置于原核高效表达Ｔ７启动子下游，构建了高效表达质粒ｐＥＴ－ＥＡＢ。转化宿主菌ＢＬ２１（ＤＥ３）、ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）、ＨＭ１７４（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ后，经ＩＰＴＧ诱导４ｈ，均表达了外源目的基因蛋白，其中ＢＬ２１（ＤＥ３）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ的表达量明显高于其他宿主菌。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，外源蛋白分子量约３４０００，与ＰＥＡⅠ区和部分Ⅱ区基因所编码的蛋白理论估计值相符，命名为ＰＥ３４。凝胶薄层扫描显示，ＰＥ３４含量占菌体蛋白总量的５６％。Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔｉｎｇ检测证明ＰＥ３４为所需目的蛋白     

表达大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合蛋白双价基因工程菌株的构建

重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达大肠杆菌肠毒素ＳＴ１－ＬＴＢ 融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３．２１％ ,而且已失去天然ＳＴ１肠毒素生物毒性。用从ＩＰＴＧ 诱导的工程菌中提取的包涵体或经甲醛灭活的工程菌制成抗原免疫小鼠,结果免疫小鼠至少能抵抗１．５ＭＬＤ 的大肠杆菌强毒株Ｃ８３９０２（Ｋ８８ａｃ,ＳＴ＋ ,ＬＴ＋ ）的攻击。用提取的包涵体免疫家兔后,采集的血清能够中和天然ＳＴ１肠毒素的毒性。这表明构建的工程菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）可以作为预防幼畜大肠杆菌性腹泻基因工程菌苗的候选株     

不同生理时期不同水平大豆抗营养因子对生长蛋鸡器官重的影响

不同生理时期不同水平大豆抗营养因子对生长蛋鸡器官重的影响ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＴＨＥＤＩＥＴＳＣＯＮＴＡＩＮＩＮＧＶＡＲＩＮＧＬＥＶＥＬＳＯＦＲＡＷＳＯＹＢＥＡＮＯＮＯＲＧＡＮＷＥＩＧＨＴＳＯＦＰＵＬＬＥＴＳＤＵＲＩＮＧＤＩＦＦＥＲＥＮＴＧＲＯＷＩＮＧＰ...     

人雄激素受体的雄激素结合区cDNA在E.coli中的高效表达

将编码人雄激素受体（ｈＡＲ）的雄素结合区（ＬＢＤ）的ｃＤＮＡ片段（１００５ｂｐ）克隆到由Ｐ１启动子控制的硫氧还蛋白表达载体ｐＴｒｘＦｕｓ上,构建了表达质粒ｐＴｒｘＡＲ,并转化到大肠杆菌Ｇ１７２４中,经色氨酸诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,可观察到一高效表达的融合蛋白产物,此融合蛋白 分子了量与理论值相吻合,氨基酸组分分析证明了ＬＢＤ目的基因的表达。     

狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达

将狂犬病病毒糖蛋白（ＲＶｇｐ）基因ＢｇｌⅡ片段（１６７５ｂｐ）分别正向插入到原核高效表达载体ｐＥＴ－１７ｂ和ｐＥＴ－１７ｂ２（用ＳａｃⅠ－ＮｄｅⅠ缺失掉ｐＥＴ－１７ｂ６０ｂｐ含起始密码子ＡＴＧ小片段）的ＢａｍＨⅠ切点，构建重组质粒ｐＥＴ－１７ｂＲＶｇｐ和ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ。将其分别转化表达受体菌Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）和Ｅ，ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ．ＩＰＴＧ诱导表达，菌体经超声波裂解处理后ＳＤＳ－ｐＡＧＥ，染色，在分子量约６００００处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带，以抗ＲＶｇｐＭｃＡｂ进行Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ检测，表明该表达蛋白为ＲＶｇｐ。通过扫描显示，表达的ＲＶｇｐ占菌体总蛋白的１０％～１４％，其中ｐＥＴ－１７ｂ２ＲＶｇｐ在Ｅ。ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）中的表达量最高。     

青海细毛羊生化遗传多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳和火焰光度法对５０９只青海细毛羊细血液和乳汁中ＨＢ，ＥＰ－１，ＥＰ－２，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ１，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｈｐα－ＬＡ和β－ＬＧ总共１３个位点的多态性进行了研究。结果为：（１）在青海细毛羊的ＨＢ，ＫＥ，ＴＦ，ＡＭＹ２，ＥＳ，ＡＬＰ，ＲＢＣ－ＬＤＨ１，Ｈｐ，β－ＬＧ总共９个位点上发现多态性，多态性位点的比例为６９．２３％；（２）每个位点实有的平均等位     

青海藏羊血清运铁蛋白多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对青海省三角城种羊场和达日县的１９６份藏羊血样进行了血清运铁蛋白多态性的研究。结果发现：①在被检藏羊的血清运铁蛋白位点上共发现ＴＦ￣Ｉ，ＴＦ￣Ａ，ＴＦ￣Ｇ，ＴＦ￣Ｂ，ＴＦ￣Ｌ，ＴＦ￣Ｃ，ＴＦ￣Ｄ，ＴＦ￣Ｍ，ＴＦ￣Ｅ，ＴＦ￣Ｑ和ＴＦ￣Ｐ１１个等位基因，其中ＴＦＣ（０．３２４０），ＴＦ￣Ｂ（０．２６７９）和ＴＦ￣Ｄ（０．２１６８）为优势等位基因；②共发现ＴＦＩＥ，ＴＦＡＡ，ＴＦＡＢ，ＴＦＡＣ，ＴＦＡＤ，ＴＦＡＭ，ＴＦＧＢ，ＴＦＧＬ，ＴＦＧＣ，ＴＦＧＤ，ＴＦＢＢ，ＴＦＢＣ，ＴＦＢＤ，ＴＦＢＭ，ＴＦＬＣ，ＴＦＬＤ，ＴＦＬＥ，ＴＦＣＣ，ＴＦＣＤ，ＴＦＣＥ，ＴＦＣＱ，ＴＦＣＰ，ＴＦＤＤ，ＴＦＤＭ，ＴＦＤＥ和ＴＦＤＱ２６种基因型，其中ＴＦＢＣ（２０．４１％）、ＴＦＣＣ（１３．７８％）和ＴＦＢＤ（１１．７４％）为优势基因型。     

ABC—Dot—ELISA检测鸡传染性支气管炎病毒

建立了ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测鸡传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的方法,其最佳反应条件是：包被液为０．０５ｍｏｌ／ＬｐＨ９．６的碳酸钠－碳酸氢钠缓冲液（ＣＢＳ）,免疫ＩＢＶ ＩｇＧ的最佳工作浓度为１：８０;抗原的最佳浓度为１：８００;封闭剂选用０．０１ｍｏｌ／Ｌ ｐＨ７．４含３０ｍＬ／Ｌ白明胶的ＰＢＳ,Ｂ－ＡｇＧ和ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２００。用ＡＢＣ－ＨＥＰ的最佳工作浓度为１：２０     

以包涵体形式表达的猪带绦虫六钩蚴重组原的复性与纯化

应用比浊法,可溶必蛋白百分比,夹心ＥＬＩＳＡ及变性与非变性ＳＤＳ－ＰＡＧＥ等方法来评价猪带绦虫六钩蚴重组抗原的不同复性条件。透析法复性,透析液为含２ｍｏｌ／Ｌ尿素,１６０℃ｍｏｌ／ＬＰＥＧ４０００,１．０ｍｍｏｌ／Ｌ－０．１ｍｍｏｌ／ＬＧＳＨ－ＧＳＳＧ的ＰＨ９．０的Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液,蛋白浓度为２－５ｍｇ＝ｍＬ,以静置缓慢透年为佳,上述条件任意缺一或快速透析,则免疫活性下降,二聚体,多聚体明显     

鸡毒支原体株间结构蛋白及其抗原性变异的比较研究

本研究以ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ技术,应用鸡毒支原体国外强毒株Ｓ６、标准株ＰＧ３１,疫苗株Ｆ,北京分离 ＢＧ４４Ｔ、ＮＢ７２特异性多克隆抗血清对以上五株及疫苗株Ｖ、北京分离株Ｃ的结构及其抗原性进行了比较结果表明ＭＧ结构蛋白及其抗原性存在着株间的多样性和一定相似性,其中以Ｆ与Ｓ６、ＢＧ４４Ｔ与ＰＧ３１、ＮＢ７２与Ｃ更为接近,可能具有同源性。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ显示出了ＭＧ株间结构蛋白微     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

新城疫病毒F48E9株病毒结构蛋白的分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，激光扫描技术，Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ和糖蛋白染色方法对新城疫病毒Ｆ４８Ｅ９株的结构蛋白进行了分析，结果表明，它具有ＮＤＶ的典型结构特征，与Ｌｓ Ｓｏｔａ毒株相比无显著差异。     

大肠杆菌肠毒素ST1-LTB融合基因的高效表达

用限制性核酸内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切含大肠杆菌肠毒素ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因的质粒ｐＸＳＬＴ１,回收０８４ｋｂ的ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因,再将载体ｐＥＴ—２８ｂ（＋）用ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅢ双酶切,然后将其与ＳＴ１—ＬＴＢ融合基因连接,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＥｃｏＲⅠ、ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ酶切反应鉴定重组子质粒,得到了理想重组质粒ｐＸＥＴＳＬＴ１。重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＳＬＴ１）经ＩＰＴＧ诱导后,其表达产物经ＳＤＳ—ＰＡＧＥ和ＥＬＩＳＡ检测,结果表明重组菌株可以高效表达ＳＴ１—ＬＴＢ融合蛋白,该融合蛋白占菌体总蛋白的３３２１％,而且无天然ＳＴ１生物毒性。     

产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）,通过培养性状观察和小鼠接种试验,证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析,ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％,ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％,其相对分子质量约３７５００;经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明,以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护,以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护,从而说明表达产物具有良好的免疫原性。     

荒漠猫血液蛋白质和酶多态性的研究

采用聚丙烯酰胺凝胶电泳法对５只荒漠猫（Ｆｅｌｉｓｂｉｅｔｉ）血液中的血红蛋白（ＨＢ），运铁蛋白（ＴＦ），亲血色蛋白（Ｈｐ）以及乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），淀粉酶（ＡＭＹ），酯酶（ＥＳ）和碱性磷酸酶（ＡＬＰ）的多态性进行了研究。结果发现，被检荒漠猫的ＴＦ，Ｈｐ，ＲＢＣ－ＬＤＨ，Ｓ－ＥＳ和Ｓ－ＡＬＰ共５个基因座存在多态性，ＨＢ，ＲＢＣ－ＡＭＹ，Ｓ－ＡＭＹ，Ｓ－ＬＤＨ，ＲＢＣ－ＥＳ和ＲＢＣ－ＡＬＰ共６个基因座为单态，表明荒漠猫的血液蛋白质和酶具有颇大的遗传变异性     

甘肃省鸡的14种传染病血清学调查

应用血清学方法对甘肃省６４个县（市、区）１４２个鸡场鸡的１４种传染病进行了调查，结果ＩＢＤ阳性率为３６．３４％，ＭＤ为２８．４７％，ＮＤ为３４．８２％，ＩＢ为３４．８２％，ＥＤＳ－７６为７．２０％，ＲＥＯ为１８．９６％，ＡＡＩ为２１．０６％，ＡＬ为４．４４％，ＭＧＧ为３８．７１％，ＦＣ为１８．０１％，ＰＤ为２３．２７％，ＩＣ为３１．１２％，ＡＣ为３６．３５％，表明甘肃省普遍存在着上述１４种病的感染     

大肠杆菌K99和F41菌毛抗原的不同缓冲液热处理提取方法比较 …

本试验用Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ缓冲液（Ｔ）、ＰＢＳ缓冲液（Ｐ）、生理盐水（Ｓ）和２Ｍ尿素ＰＢＳ缓冲液（Ｕ）以热处理的方法提取大肠杆菌Ｋ９９和Ｆ４１菌毛抗原,并用硫酸铵盐析纯化Ｋ９９以及用１Ｎ醋酸滴定和氯化镁沉淀分别纯化Ｆ４１。根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳和蛋白质含量测定结果,四种缓冲液对Ｋ９９的提取量依次是Ｕ〉Ｓ〉Ｐ,而Ｔ检不出Ｋ９９;对Ｆ４１的提取量依次是Ｕ〉Ｔ〉Ｐ〉Ｓ。Ｋ９９纯化后取得了满意的纯化结果,     

柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)BJ株SO7重组抗原的免疫试验

将柔嫩艾美耳球虫（Ｅｉｍｅｒｉａ ｔｅｎｅｌｌａ）ＢＪ株Ｓ０７基因插入ｐＴｈｉｏＨｉｓＢ载体中,构建了１个表达载体,命名为ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７。将此表达载体转入大肠杆菌ＤＨ５ａ,经ＴＰＴＧ诱导表达后,用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测表达产物。结果表明,含ｐＴｈｉｏＨｉｓＳ０７质粒原工程菌具有明显的表达产物,表达效率为１７．１％。用超声波粉碎仪裂解含重组抗原的工程菌,加入钾加矾作佐剂,用２个剂量（１０、１０     

不同大豆加工产品对早期断奶仔猪饲用价值的研究

２１日龄平均体重的５．８５ｋｇ的断奶仔猪３２头,按随机区组设计分２组,分别饲喂豆粕（ＳＢＭ）和膨化全脂大豆（ＥＦＳ）型日粮。试验结果表明：０～１４ｄ间,ＳＢＭ组平均日增重（ＡＤＧ）和平均日采食量（ＡＤＦＩ）分别比ＥＦＳ组显著提高４５．９％和２５．８％（Ｐ〈０．０５）;１５～２８ｄ间,ＳＢＭ组ＡＤＧ比ＥＦＳ组显著提高７．７％（Ｐ〈０．０５）。全期试验（０～２８ｄ）ＳＢＭ组ＡＤＧ和ＡＤＦＩ分别比ＥＦＳ