"酸化水-超滤"一体化技术提取IBDV IgY的研究

用“酸化水-超滤”一体化技术从高免鸡卵黄中提取IgY，其提取率为92％，适宜条件是：①原始高免卵黄14倍的蒸馏水做溶剂，pH值在7．0，静置孵化温度16℃，时间72h，吸出上清；②沉淀卵黄8倍的蒸馏水做溶剂，pH值在7．00，静置孵化温度16℃、时间24h，吸出上清，合并上清，进行超滤。超滤采用分子量为30kD的滤膜，可使上清液浓缩80倍以上，IgY被完全截留，去除水分和小分子杂质达到浓缩IgY的目的。     

超滤/DEAE离子交换层析法分离纯化IgY

应用平板式膜超滤技术与DEAE离子交换层析法对卵黄免疫球蛋白（IgY）进行分离纯化。首先，卵黄液经过缓冲液稀释分离；然后，用平板式膜组件对其超滤，并且分析了各种因素对其的影响，确定分子截留量为100ku，操作压力差为0．12MPa、进料温度为30℃．pH5．2，截留液抗体回收率达到91．89％，纯度为86％。经DEAE离子交换层析得到高纯度的IgY。     

禽流感高免球蛋白的制备及应用研究

应用H9N2亚型禽流感病毒(AIV)油乳剂灭活苗6个不同剂量免疫30周龄SPF蛋鸡,通过血凝抑制(HI)和琼脂免疫扩散(AGP)试验监测血清及卵黄抗体消长规律,确定2.0 mL为最适免疫剂量。首免后第18天血清与卵黄中抗体同时升至第一高峰,此时加强免疫。二免后1周,效价达到第二高峰,用常规抽提法从高抗体滴度卵黄中提取高免球蛋白(IgY)。中和试验(NT)表明:IgY具有中和病毒感染的作用,且中和抗体滴度随HI滴度的降低而降低;给鸡肌肉注射后6 h能检测出血清的HI抗体,24 h达到峰值,维持7 d,第13天血清中HI抗体消失。104个EID50的AIV(H9N2)攻毒,同时用HI价为214的IgY的10倍系列稀释物分5组进行保护试验,确定HI价为214的IgY保护范围在100倍稀释与10倍稀释之间。IgY系列保护试验表明HI价28为完全保护的最低滴度;在攻毒的前1天及至攻毒后第5天接种IgY均能100%保护。攻毒保存期试验证明,所制得的高免球蛋白4 ℃可以保存6个月,-20 ℃可保存1年。     

鸡新城疫卵黄抗体IgY的分离提纯研究

本文对母鸡经鸡新城疫疫苗免疫接种后产生并富集在卵黄中的抗体IgY的提取纯化工艺条件进行了研究与优化，确定了去脂、提取抗体最佳工艺为：卵黄液用0．05mol／L,pH5.0的乙酸一乙酸钠缓冲液1：9倍稀释，搅拌15min，4℃静置10小时，抗体回收率为90％，去脂率为99％；该提取液用40％饱和度的硫酸铵盐析，得到的盐析液抗体回收率为82％，纯度达到69％。盐析液经截留分子量为100KD的有机陶瓷膜超滤后，截留液抗体回收率达到92％。纯度为85％。     

检测E.coliO157特异性IgY的间接ELISA方法的建立

本实验以E．coliO157免疫产蛋鸡，经四次免疫获得高免特异性卵黄抗体IgY，并以10^8～10^9 CFU／ml灭活E．coliO157为包被抗原，建立了抗E．coliO157卵黄抗体的间接ELLSA检测方法。酶标兔抗鸡最佳工作浓度为1：320。并研究了卵黄抗体不同处理方法、包被温度和时间对ELLSA检测的影响。该方法简便可靠，适于对大肠杆菌特异性抗体IgY的动态检测和大批检测。     

抗ETEC F18+菌毛特异性IgY的稳定性研究

用间接ELESA方法测定了抗F18^＋ETEC IgY对温度、酸碱度、反复冻融、渗透压、胃蛋白酶、胰蛋白酶的稳定性，并考察非还原性糖（乳糖、蔗糖）对IgY活性的影响。结果表明：60℃水浴30min效价无变化；pH4．0～11．0环境中，IgY活性改变不显著；经7次反复冻融和50％蔗糖渗透压处理，抗原结合活性也几乎未受损失；pH2．5时，该IgY对胃蛋白酶非常敏感，经胃蛋白酶37℃处理4h，效价从1：7200下降到1：450；37℃时分别经胃蛋白酶（pH4）和胰蛋白酶（pH7，5）各处理4h，效价均无变化；在胃蛋白酶的处理中，蔗糖和乳糖对该IgY具有一定的保护作用。     

AIV H5N1亚型高免卵黄抗体的制备及理化特性研究

应用禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫20周龄的高产来航蛋鸡,制备抗AIV H5N1高免卵黄抗体(IgY).在比较了3种缓冲液对IgY活性的影响后,确定采用水稀释法提取IgY.同时在模拟的胃肠内环境下对IgY的各种理化性质进行了试验.结果表明,纯化的IgY在pH 2.0和胃蛋白酶终浓度为1.5 mg/mL的环境下,以及在pH 8.0和胰蛋白酶终浓度为2.5 mg/mL的环境下,37℃作用1 h后其ELISA抗体效价均无明显下降;同时,热稳定性试验表明,IgY在60℃以下作用30 min,其ELISA抗体效价也无明显下降;中和试验测得IgY的中和效价为1:640,具有较好的中和H5N1亚型AIV的能力.以上结果表明,本试验所制备的抗禽流感H5N1亚型高免IgY具有较高的抗体效价和中和效价,同时还具有一定的耐蛋白酶消化的作用,可用于H5N1亚型禽流感的预防和治疗.     

植酸酶的高密度发酵、制备及共应用研究

从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30 L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据.对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析.得到最佳产酶条件为生长时间20 h、甲醇流加速度5 ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1 ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84 h、诱导温度26℃,酶活力可达到454 U/ml,比未优化前提高接近3倍.发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景.     

植酸酶的高密度发酵、制备及其应用研究

从甲醇添加量、诱导温度、生长时间等方面对重组酵母摇瓶发酵条件进行研究,并以此为基础探讨其在30L发酵罐上产植酸酶的条件,从而为大规模的生产提供理论依据。对发酵过程中的诱导时间,诱导期间的甲醇与甘油的流加速度和比例以及诱导pH值进行了分析。得到最佳产酶条件为生长时间20h、甲醇流加速度5ml/(L·h)、诱导期甘油流速速度1ml/(L·h)、诱导pH值为4、诱导时间84h、诱导温度26℃,酶活力可达到454U/ml,比未优化前提高接近3倍。发酵液经过超滤浓缩添加复合稳定剂制成饲料后投入到小规模草鱼养殖应用中,结果表明,在植酸酶添加量为0.08%可以替代磷酸二氢钙,证明该菌株具有大规模工业化生产的前景。     

卵黄抗体最佳灭活方法的确立

自Klemperer于1983年首次报道鸡蛋中存在抗体以来，进一步研究证明鸡蛋内的抗体主要存在于卵黄内，称为卵黄抗体（egg yolk immunoglobulins简称IgY）。卵黄抗体以IgG占优势，而IgA和IgM的含量极低。近20年来国内外学者对卵黄抗体的制备和应用做了大量的研究。由于卵黄IgG的制备成本非常低，卵黄抗体已越来越广泛地用于许多疾病的防治。但是，用于生产卵黄抗体的鸡蛋多来自普通蛋鸡，用其制备的卵黄抗体可能带有某些卵传性病原，如禽脑脊髓炎、禽白血病、网状内皮组织增生症、减蛋综合征、支原体病等。使用这些卵黄抗体，甚至是精制的IgY进行疾病防治的同时，可能造成上述疾病的传播和扩散。本试验用3种低浓度的甲醛对混有禽脑脊髓炎病毒的禽流感-H9高免卵黄抗体在不同温度下，作用不同时间，进行灭活处理，以期建立一种对卵黄抗体的有效灭活方法。     

种蛋孵化的几个关键点

温度是孵化的重要因素，在实际生产中有恒温和变温两种施温方案。恒温1～19天37．8℃．20～21天36．5～37．2℃；变温孵化则是采用前高后低的用温方式，如1～4天38．2℃，5～7天38．0℃．8～12天37．8℃．13～15天37．6℃，16～19天37．4℃，20～21天36．5．37．2℃。两种方法区别在于降温法必须是整批孵化时间，符合胚蛋对温度前高后低的要求。     

环境因素对丰年虾孵化的影响及孵化条件优化

文章采用单因素和正交试验探究各种环境因素对丰年虾孵化率影响,对丰年虾孵化条件进行优化。试验设定了5个温度梯度(24、26、28、30、32℃)、7个pH梯度(7.0、7.5、8.0、8.5、9.0、9.5、10)、7个盐度梯度(5‰、10‰、15‰、20‰、25‰、30‰、35‰)、5个时间梯度(20、22、24、26、28 h)。试验结果表明:在一定范围内,单独的温度、pH、盐度及孵化时间对丰年虾的孵化率影响显著,并且协同因素对丰年虾孵化的影响程度存在显著差异。最佳孵化率分别出现在:温度为28℃、pH为9.5、盐度为10‰、孵化时间为22 h。在同一环境下,影响孵化率的主次顺序依次为温度和盐度、孵化时间、pH。通过正交试验得出优化孵化方案,温度为30℃、pH为9.5、盐度为10‰、孵化时间为22 h,该条件下孵化率达89%。     

60Coγ射线对高免卵黄液中霉形体杀灭作用的研究

用^60Coγ射线处理高免卵黄液,研究了不同剂量、剂量率对霉形体的灭活效果和对卵黄抗体的影响。结果表明,^60Coγ射线可以完全杀灭高免卵黄液中的霉形体,霉形体在卵黄液中的灭活剂量为6．0kGy;10．OkGy以下的辐照剂量不影响卵黄液中蛋白质含量、pH值和活性氧自由基,同时不影响抗体效价。     

患肠炎病草鱼消化酶活性的研究

本文分析了健康鱼和患肠炎病草鱼淀粉酶和蛋白酶活性，其淀粉酶最适pH值均为7．2蛋白酶最适pH值分别为7．0和6．0；其淀粉酶最适温度分别为30℃和35℃，蛋白酶最适温度均为40℃，且患肠炎病草鱼蛋白酶和淀粉酶活性较健康鱼低，但pH值在5．7以下时，患病鱼的蛋白酶活性较健康鱼高，温度在28℃以下时，患病鱼的淀粉酶活性比健康鱼高。     

鸡抗幽门螺杆菌卵黄抗体的理化特性

对自制鸡抗幽门螺杆菌(Hp)高免卵黄的理化特性进行了研究,结果表明,pH值、温度对其活性的影响较明显,胃蛋白酶可加强这一作用。在pH值单独影响下,pH≤3为其敏感范围;同时存在胃蛋白酶,则其敏感范围为pH≤4。在巴氏消毒温度条件下,其具有较好的热稳定性,这对于工厂化生产卵黄抗体具有非常重要的意义。     

鸭病毒性肝炎的防治措施

1 预防措施 （1）加强饲养管理，改善环境，严格执行消毒制度，搞好环境卫生，对控制鸭病毒性肝炎的发生具有重要的意义。 （2）采用康复鸭血清、高免鸭血清及高免卵黄抗体进行免疫接种。免疫接种方法：①有母源抗体的雏鸭，在7～10日龄时肌肉注射鸭病毒性肝炎弱毒疫苗1羽份／只。②无母源抗体的雏鸭，在出壳后1日龄肌肉注射鸭病毒性肝炎弱毒疫苗1羽1形只，或高免鸭血清及高免卵黄抗体0．5毫升／只；10日龄再注射鸭病毒性肝炎弱毒疫苗1羽份／只。     

抗猪流行性腹泻病毒变异株卵黄抗体的制备、纯化及其活性影响因素的研究

为制备抗猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus，PEDV）变异株卵黄抗体并探索卵黄抗体的纯化方法，本试验采用灭活的PEDV变异株CH/JX01全病毒免疫蛋鸡，收集免疫后所产的鸡蛋，分别用水稀释法、PEG-6000法和水稀释-硫酸铵二次沉淀法对鸡蛋中IgY进行提纯，然后运用间接ELISA和Western blotting方法鉴定和比较3种方法的提纯效果，获得可用于规模化生产的提纯方法；同时研究不同温度、pH条件下抗体活性，寻找对提纯IgY活性具有保护作用的物质。结果显示，本试验成功制备了抗PEDV变异株的卵黄抗体。浓度检测结果表明，水稀释法提取的IgY浓度最高，为6.204 mg/mL；PEG-6000方法提纯的IgY浓度次之，为4.673 mg/mL；水稀释-硫酸铵二次沉淀法IgY浓度最低，为3.359 mg/mL。间接ELISA检测结果表明，水稀释-硫酸铵二次沉淀法提纯的IgY效价最高，为1：12 800；其次是PEG-6000，为1：6 400；而水稀释法最低，为1：1 600。综合3种方法所提纯的卵黄抗体浓度与效价，发现水稀释-硫酸铵二次沉淀法的提纯效果优于其他两种方法。活性影响因素试验结果表明，提纯的IgY在37~60℃活性稳定；pH为4.0~11.0时具有良好的活性；在酸性条件下，20%硫糖铝对IgY活性具有较好的保护作用。本试验结果将为卵黄抗体的大规模生产运用与储存提供了有效的参考依据。     

猪血红蛋白酶解工艺参数优化

本试验采用酶法水解猪血红蛋白．选择水解猪血红蛋白的最优蛋白酶,并确定其最佳水解条件（包括加水倍数、酶添加比例、pH值、温度、反应时间以及沉淀血红素的pH值）。结果表明,最佳水解条件为加水倍数的2．0倍、酶添加比例4‰、pH8．5、水解温度56℃、水解时间为12h,水解后喷雾干燥产品的氨基酸总含量高达85．67％．     

鸡传染性支气管炎病毒血凝抑制试验抗原的研制

为应用血凝抑制(HI)试验检验鸡传染性支气管炎疫苗免疫效力(血清、卵黄抗体水平),建立了鸡传染性支气管炎病毒HI试验抗原的制备方法。该方法是通过选取抗原谱最广的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)M41株,经SPF鸡胚增殖培养36h后无菌收取鸡胚尿囊液,4℃、12 000r/min离心10min,上清用聚乙二醇(PEG)20000浓缩100倍;兔源A型产气荚膜梭菌中国标准株(C57-1株)37℃增殖培养18h,4℃、12 000r/min离心10min取上清,经PEG 20000透析袋浓缩5倍后通过0.20μm滤膜过滤除菌,然后将IBV液和A型产气荚膜梭菌菌液(含α毒素)二者按一定比例混合后经37℃恒温振荡感作2h,4℃经48h后制成。经大量试验表明,制备的IBV HI试验抗原效价高、稳定性好,可替代进口抗原应用于鸡群IBV疫苗免疫后血清抗体及卵黄抗体的HI效价检测。     

不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响

为研究提高卵黄液除脂率和卵黄抗体的纯度,建立适合大量生产卵黄抗体的工艺,比较了不同除脂条件对卵黄液除脂率及卵黄抗体纯度的影响。最终确定卵黄液与醋酸盐体积比为1：8、pH值调至5．2、2～8℃沉淀15h（过夜）时,除脂的效果最理想,且蛋白的纯度高,适合大量提取卵黄抗体。