杭州奶牛场乳源大肠杆菌的耐药性分析

为更好防治大肠杆菌性奶牛乳房炎,笔者应用细菌分离纯化技术及PCR技术,对杭州市237份奶样进行大肠杆菌分离鉴定后,采用K-B法测定耐药表型,采用PCR方法检测Ⅰ、Ⅱ型整合酶及整合的耐药基因。结果从237份乳样中分离出大肠杆菌98株;分离菌对林可霉素,恩诺沙星,链霉素的耐药率分别为86.7%、85.7%和51.0%,多重耐药严重;其中,携带Ⅰ、Ⅱ型整合酶的菌株分别占59.2%(58/98)和4.1%(4/98);整合的耐药基因有Aad A、Aad B、APH、Dfr A以及glt B。研究结果为杭州地区开展奶牛乳房炎治疗工作提供了一定的理论基础。     

氟罗沙星对禽败血霉形体（Mycoplasma gallisepticum）病的药效研究

体外抑菌试验测得氟罗沙星（Ｆｌｅｒｏｘａｃｉｎ）对禽败血霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）的最小抑菌浓度（ＭＩＣ）为０．０１５ｍｇ／Ｌ。体内药效试验表明,氟罗沙星以２５、５０、１００ｍｇ／Ｌ饮水给药和以５、１０、１５ｍｇ／ｋｇ肌注给药（１次／ｄ）,连续用药５ｄ,对人工气囊接种禽败血霉形体培养液（０．２ｍＬ,约含１０８ｃｆｕ）的雏鸡,保护率均为１００％（３０／３０）,而感染不给药组雏鸡存活率为９３．３％（２８／３０）;相对增重率分别为９０．８％、９１．５％、９２．３％和９１．５％、９１．８％、９２．９％,显著高于感染不给药组（７３．２％）;气囊损伤分分别为２．９３、２．６２、０．９３和１．８、１．１、１．０,而感染不给药组为６．５７,差异显著（Ｐ＜０．０５）;血清玻板凝集试验阳性率分别为２０％（２／１０）、１０％（１／１０）、０（０／１０）和３０％（３／１０）、１０％（１／１０）、１０％（１／１０）,均极显著低于感染不给药组１００％（１０／１０）（Ｐ＜０．０１）。氟罗沙星不同给药途径及不同剂量间药效差异不显著。     

三种抗菌药物对仔猪黄白痢大肠杆菌MPC的测定

采用琼脂二倍稀释法使平板上接种细菌量分别为1.5×104CFU、1.2×1010CFU,测定环丙沙星、麻保沙星、多粘菌素B对仔猪黄白痢大肠杆菌的MIC、MPC,并计算SI（MPC/MIC）。试验结果表明,受试菌对多粘菌素B、麻保沙星、环丙沙星的敏感率分别为80.85%、 17.02%、12.76%,两种喹诺酮类药物已有交叉耐药产生;两种喹诺酮类药物对敏感菌的MPC为1～16μg/mL,SI为 4～32,多粘菌素B的MPC为4～16μg/mL,SI为2～8,因此认为多粘菌素B不仅抗菌活性较高,SI也低于环丙沙星、麻保沙星, 即多粘菌素B的防耐药突变能力比麻保沙星与环丙沙星要强。     

氟罗沙星的急性毒性和对鸡实验性大肠杆菌病的药效

急性毒性试验测得氟罗沙星经口染毒昆明小白鼠LD50大于5000mg/kg。药敏试验测得，氟罗沙星及环丙沙星对鸡大肠杆菌的抑菌圈分别为（32．0±1．21）mm和（33．1±1．59）mm；按25，50，100mg/L的氟罗沙星及50mg/L的环丙沙星饮水给药，连续用药3天，对鸡大肠杆菌病的保护率分别为46．7％，66．7％，96．7％，46．7％；而攻毒不给药组雏鸡死亡率为100％。     

复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘中和剂中和效果考察

采用悬液定量杀菌试验程序，对两种中和剂配方进行了中和剂鉴定试验，以便对复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘两种消毒剂的消毒效果进行评价。试验结果表明，中和剂配方Ⅰ（含3％吐温-80、0．5％硫代硫酸钠）对复方二氯异氰尿酸钠，中和剂配方Ⅲ（含3％吐温-80、0．5％亚硫酸钠、适量卵磷脂）对双季铵碘均有良好的中和效果，且末见中和剂配方Ⅰ、中和剂配方Ⅲ及其相应中和产物对指示菌金黄色葡萄球菌的生长有明显影响。因此认为，中和剂配方Ⅰ、中和剂配方Ⅲ可分别用于复方二氯异氰尿酸钠和双季铵碘消毒剂消毒效果的鉴定。     

集约化猪场PWD病原性大肠杆菌毒力因子分析

探索浙江省集约化猪场仔猪断奶腹泻(PWD)病原性大肠杆菌血清型和毒力因子特征,为PWD防治及耐药性研究提供资料.从10个规模化猪场以直肠棉拭子采集PWD病料,经细菌分离纯化、革兰氏染色、生化试验和小鼠致病性试验等,对病原进行鉴定.采用11种猪源大肠埃希氏茵常见O型抗原血清、应用K88及F18菌毛单因子血清对分离茵进行玻板凝集试验和PCR方法分析黏附素及肠毒素类型.分离鉴定的56株病原性大肠杆菌O抗原定型了33株,共覆盖了11种血清型,其中O149、O139、O8为优势血清型,共17株,占定型菌株的51.5%;茵毛单因子血清玻板凝集试验和PCR测得病原性大肠杆菌中产肠毒素大肠杆菌(ETEC)比例较高,占病原性大肠杆菌分离总数的67.92%(36/53),肠毒素中含STa、STb、STa+STb、LT和SL-2e分别占总检测菌株数的30.19%(16/53)、35.85%(19/53)、18.9%(10/53)、1.89%(1/53)和9.43%(5/53).黏附素类型主要有K88和F18两种,分别占总检测菌株数的24.53%(13/53)和28.30%(15/53).结果表明,浙江省PWD病原性大肠杆菌至少覆盖了包括优势血清型O149、O139、O8在内的11种血清型;大肠杆菌中以产肠毒素型为主,主要毒力因子包括黏附素F18及K88和肠毒素STa、STb、SLT-2e等.     

规模化猪场仔猪断奶腹泻大肠杆菌耐药性监测

采用WHO推荐的Kirby-Bauer法,以分离自浙江省10个规模化猪场的60株病原性大肠杆菌为材料,开展了对兽医临床上常用的21种抗菌药物的耐药性监测.结果表明,60株病原性大肠杆菌对抗菌药物已发生普遍的耐药性,其中对复方新诺明(88.3%)、氯霉素(81.0%)、链霉素(78.3%)、痢菌净(77.3%)、痢特灵(75.0%)、喹乙醇(75.0%)等的耐药性最强.对单诺沙星、环丙沙星及诺氟沙星的耐药率也很高,其耐药率分别高达78.8%、59.3%和56.7%.60株大肠杆菌共有57种耐药谱型,绝大多数为多重耐药,其中有4株可同时耐受14种抗菌药物.受检菌株中除1株外,59株均对2种或多种抗菌药物耐药:对1～3种,4～6种,7～9种,10～12种及13～15种抗菌药物耐药的分别有6株(10.0%)、11株(18.3%)、17株(28.3%)、17株(28.3%)和9株(15.0%);对8种抗菌药物耐药的菌株占比例最大(16.7%),其次是对10种抗菌药物耐药(15.0%)和对6种抗菌药物耐药(11.7%)的菌株;不同地区、不同规模化猪场的大肠杆菌菌株的耐药性存在一定差异.临床上应用时间不长的氟苯尼考耐药率已达60.9%,值得关注.     

腹泻仔猪病原性大肠埃希菌毒力因子分布与耐药性分析

为了探索仔猪大肠埃希菌性腹泻的发病机制、大肠埃希菌毒力因子变迁以及与耐药性可能存在的关系,在直肠棉拭采集浙江省规模猪场腹泻仔猪病料,经细菌分离纯化、形态学结合PCR鉴定以及小鼠致病性试验得到124株病原性大肠埃希菌基础上,应用PCR分析其毒力因子,采用K-B法及耐药性专用软件Whonet测定并分析其对抗菌药物的耐药性,最后,通过Logistic分析分离株毒力因子与耐药性的相关性。结果表明:菌毛阳性分离株(F4+和F41+)占总菌株数的7.26%(9/124),首次检测到毒力因子EAST1、PAA和AIDA-I,其中EAST1检出率高达19.68%(24/124),而PAA和AIDA-I阳性率较低,分别为4.84%(6/124)和2.42%(3/124);分离株对苯唑西林(100%)、复方新诺明(97.6%)、利福平(97.6%)、多西环素(96%)、羧苄西林(93.5%)、氨苄西林(93.5%)、阿莫西林(93.5%)耐药严重;链霉素与氨苄西林(75.45%)、恩诺沙星(65.45%)、复方新诺明(78.18%)、庆大霉素(63.64%)、多西环素(96%)、氟苯尼考(50.91%)间交叉耐药明显。分离菌株100%呈多重耐药,其中以14～16耐药最多(43.31%);阿莫西林/克拉维酸(P=0.046)和多西环素的耐药性(P=0.020)与大肠埃希菌黏附与脱落病变eae(E.coli attaching and effacing)基因显著相关,多黏菌素B(P=0.004)和氯霉素的耐药性(P=0.013)与EAST1显著相关。结合以往资料,我们认为大肠埃希菌毒力因子已发生明显改变,耐药性更趋严重,且二者之间存在相关性,需深入研究以更好制订大肠埃希菌病有效防控措施。