鸟氨酸脱羧酶抗酶1基因的结构和功能

鸟氨酸脱羧酶抗酶1(OAZ1)基因可通过特殊的+1移码机制翻译全长的功能蛋白.研究发现,OAZ1能与鸟氨酸脱羧酶(ODC)结合并降解ODC,负调控细胞内多胺的水平;OAZ1还能降解Cyclin D1、Cyclin E1和Smad1周期蛋白,阻滞细胞周期;此外,近年来研究表明,OAZI还具有抗肿瘤效应和调控动物繁殖的功能.抗酶抑制因子能竞争性结合ODC-OAZ1复合体中的OAZ1,从而阻止ODC降解;天门冬酰胺也能通过抑制OAZ1的翻译来调节ODC的活性.本文就OAZ1基因结构和功能的研究现状作一综述.     

多胺跨膜物质转运的机制

多胺具有调控细胞增殖、分化和凋亡的功能,可参与动物繁殖、胚胎发育以及癌症发生发展等多种生物学过程。在动物机体中,多胺稳态是通过多胺跨膜物质转运和多胺代谢途径共同维持的。溶质转运蛋白(SLC)基因家族中的SLC3A2、SLC7A1、SLC12A8、SLC22A16、SLC22A 1、SLC22A 2、SLC22A 3基因及其编码的蛋白质可参与多胺的跨膜物质转运;多胺代谢关键调控基因鸟氨酸脱羧酶(ODC)、鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ)和鸟氨酸脱羧酶抗酶抑制剂(AZIN)对多胺跨膜物质转运也具有重要的调控功能;此外,金属阳离子、细胞膜跨膜电位和p H等内环境因素也可参与多胺转运的调节。因此,本文就多胺转运蛋白、多胺代谢相关基因和蛋白质以及内环境因素调控多胺跨膜物质转运的分子调控机制作一综述,以期为阐明多胺转运调控机制的研究奠定理论基础。     

旋毛虫鸟氨酸脱羧酶对旋毛虫抗酸能力调控的研究

为探究旋毛虫体内是否存在鸟氨酸依赖性抗酸系统(AR5)及旋毛虫鸟氨酸脱羧酶(TsODC)对旋毛虫抗酸能力的调控作用，本实验分别采用p H1.5、p H2.5、p H4.5、p H6.6的培养液以及PBS (pH7.4)作为对照组分别培养0.5 h、1 h和2 h后，通过统计旋毛虫肌幼虫的存活率、采用荧光定量PCR (qPCR)和western blot，分别筛选旋毛虫肌幼虫体外最适酸处理条件。结果显示，在酸度为p H2.5培养2 h时，肌幼虫的存活率为51%(此时死亡数与存活数基本相等)及Ts ODC基因的转录和表达水平最高。因此，p H2.5培养2 h为旋毛虫肌幼虫体外最佳酸处理条件。于培养液中分别添加不同浓度的精氨酸、Ts ODC多抗血清、姜黄素和雷帕霉素，以PBS作为对照组分别培养12 h、24 h和48 h后，采用上述最佳酸处理条件处理后，通过计算肌幼虫存活率，采用q PCR检测Ts ODC基因的转录水平并初步筛选不同制剂的最佳培养浓度及时间，并在各最佳浓度和时间培养后，再经最佳酸处理条件处理，采用western blot检测Ts ODC蛋白的表达，分析各制剂对旋毛虫抗酸能力的...     

水牛BMP1基因对颗粒细胞增殖与凋亡的功能研究

本研究旨在探讨BMP1基因对体外培养水牛颗粒细胞增殖与凋亡的影响,采用qRT-PCR检测体外培养0、24、48、72和96h水牛颗粒细胞中BMP1基因的表达规律,通过在水牛颗粒细胞培养液中添加BMP1基因重组蛋白和抗BMP1抗体,观察其对体外培养水牛颗粒细胞增殖变化的影响,并应用qRT-PCR和Western blotting方法检测与细胞增殖和细胞凋亡相关因子表达的变化规律。结果显示,随着颗粒细胞体外培养时间的延长,BMP1基因的相对表达量显著上调(P0.05),96h培养组BMP1表达最高。添加BMP1重组蛋白可显著促进水牛颗粒细胞的体外增殖(P0.05),并能够显著上调细胞周期关键蛋白Cyclin D1、Cyclin D2和PCNA mRNA表达水平(P0.05),同时显著抑制了细胞凋亡信号通路中促凋亡相关因子(Fas、FasL、TNFR1、TNF-α、Cytochrome C、Apaf1、Chop、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9)mRNA表达(P0.05)。Western blotting检测结果表明,BMP1重组蛋白能够抑制Fas、Bax和Caspase-9蛋白表达,蛋白与mRNA表达一致。而添加抗BMP1抗体的试验则得出相反的结果。综上表明,BMP1基因能通过调控相关基因的表达促进体外培养水牛颗粒细胞的增殖并抑制其凋亡,在水牛卵泡发生过程中具有重要的调控功能,为阐明BMP1基因参与家畜卵泡发生的分子机制奠定基础。     

固醇调控元件结合蛋白及其对乳脂合成的调节作用

固醇调控元件结合蛋白(SREBPs)广泛分布于哺乳动物的肝脏、白色脂肪组织、肾上腺、乳腺组织等处,与乳脂的合成关系密切,它可以调控脂类合成相关酶基因的表达.通过与日的酶基因启动子中的固醇调节元件(SRE)结合激活目的基因转录,从而调控脂类合成.SREBPs在自身合成过程中会在转录、翻译及翻译后水平上受到多重因素的调控.本文从SREBPs的结构功能、组织分布、合成调节及其与乳脂合成的关系等方面进行了综述.     

PCBP2促进口蹄疫病毒增殖的机制研究

多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)是一个能特异性结合RNA和DNA Poly(C)片段的蛋白,具有维持mRNA稳定和调节翻译的功能;同时,PCBP2能负调控VISA介导的信号转导通路,抑制Ⅰ型干扰素(IFNs)的产生。前期研究表明,PCBP2能调节口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)的增殖,但具体机制不清楚。作者对此进行了研究,发现:1)免疫共沉淀和GST pull-down试验证实,PCBP2能与FMDV结构蛋白VP0、VP2、2B、2C和3D相互作用;2)进一步用双荧光素酶报告系统试验证明,PCBP2负调控VISA介导的信号通路,并且2C、3D、VP0和2B促进PCBP2的负调控作用;3)通过Western blot试验表明,FMDV VP0蛋白能促进PCBP2对VISA的特异性降解。总之,PCBP2与FMDV VP0相互作用,促进PCBP2降解天然免疫接头蛋白VISA,抑制IFN-β的产生,从而有利于FMDV在细胞中的繁殖和生长。     

干旱胁迫对紫花苜蓿叶片和根系多胺代谢的影响

采用盆栽试验方法研究了紫花苜蓿(品种:陇东) 叶片和根系中游离态腐胺(Put)、亚精胺(Spd)、精胺(Spm)及精氨酸脱羧酶(ADC)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)、多胺氧化酶(PAO)活性的动态变化。结果表明,干旱胁迫下紫花苜蓿叶片和根系中的多胺含量增加,随着胁迫时间的延长, Put、Spd、Spm及ADC、ODC、PAO活性均呈先上升后下降的趋势,且随胁迫程度加重而增大。ADC、ODC活性与Put含量呈极显著正相关,参与了紫花苜蓿Put的合成代谢。PAO活性与Spd、Spm含量变化趋势相似且呈极显著相关关系,叶和根中多胺代谢显著相关,表明多胺代谢与紫花苜蓿抗旱性关系密切。     

高表达OAZI-1增加小鼠黑素瘤B16-F1细胞对多胺类似物CPENSpm的敏感性

目的 检测高表达OAZI-1的小鼠黑素瘤B16-F1细胞对抗癌药物多胺类似物CPENSpm敏感性的影响并探讨其作用机制.方法 高表达OAZI-1的B16-F1细胞经CPENSpm处理后,MTT法检测细胞增殖;QT-RT-PCR检测细胞内OAZI-1、ODC和OAZ的mRNA表达水平;反相高效液相色谱法检测细胞内多胺含量;化学发光法分析细胞内SMO酶活性.结果 高表达OAZI-1显著增加B16-F1细胞对CPENSpm的敏感性,QT-RT-PCR结果 显示,OAZI-1高表达增加ODCmRNA但降低OAZ mRNA水平,CPENSpm处理对ODC和OAZ的mRNA水平无进一步影响.与对照细胞相比,CPENSpm处理能更显著性地降低OAZI-1高表达细胞中的多胺含量,同时更强地诱导SMO酶的活性.结论 CPENSpm处理能在更大程度上耗竭OAZI-1高表达的B16-F1细胞中的多胺,由此对该肿瘤细胞显示出更大的细胞毒性.     

转录因子互作调控鸡脂肪细胞分化研究

哺乳动物的CAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)、CAAT增强子结合蛋白β(C/EBPβ)、过氧化物酶体增殖物激活型受体γ(PPARγ)和胆固醇调节元件结合蛋白质1(SREBP1)是脂肪细胞分化调控的重要因子,鸟类脂肪细胞分化的分子调控网络目前还不清楚。本研究利用荧光素酶报告基因检测发现,C/EBPα、C/EBPβ和SREBP1过表达促进鸡PPARγ基因启动子活性(P0.05);C/EBPβ和SREBP1过表达抑制鸡C/EBPα基因启动子活性(P0.05);PPARγ过表达促进鸡FAS基因启动子的活性(P0.05),并抑制鸡LPL和AFABP基因启动子活性(P0.05),但对鸡C/EBPα基因启动子活性没有显著影响(P0.05)。本研究结果为进一步阐明鸡脂肪细胞分化的转录调控网络奠定了基础。     

环状RNA在部分家畜生长发育调控方面的研究进展

环状RNA(circularRNA,circRNA)是一类经反向剪接后、由3'末端和5'末端共价结合形成的环状非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)分子.这种非编码RNA具有组织表达特异性,因为有特殊的环状结构而不被RNA外切酶降解.随着RNA-seq在越来越多物种中的应用,circRNA的组学文章数量开始快速增长.研究结果表明,circRNA有以下五个生物学功能:与典型剪接发生竞争;充当miRNA分子的"海绵";调控基因的转录;与蛋白质结合,调控蛋白活性;翻译为蛋白质.circRNA的研究主要集中在人体医学方面,近年来,对各种家畜的研究也逐渐增多.本文综述了circRNA在羊、牛和猪生长发育方面的调控研究,以期为研究家畜组织中circRNA的功能提供理论依据与研究思路.     

苜蓿源miR168b通过靶向肉碱棕榈酰转移酶1A对奶牛乳腺上皮细胞增殖、凋亡和脂滴积累的调控研究北大核心CSCD

本试验旨在探究苜蓿源miRNAs(mtr-miRNAs)对奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)增殖和凋亡的影响。试验首先通过CCK8、5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)、流式细胞术、基因和蛋白定量等方法检测苜蓿源-miR168b(mtr-miR168b)对BMECs增殖、凋亡和周期的影响。然后,敲低mtr-miR168b靶基因肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)表达后,检测了BMECs的活力和凋亡。通过诱导转染后细胞,用氟硼二吡咯(Bodipy)染色和油红O染色检测mtr-miR168b和CPT1A基因干扰对BMECs脂滴合成的影响。结果表明:1)mtr-miR168b高表达极显著降低了BMECs活力(P<0.01)。2)mtr-miR168b高表达极显著抑制了BMECs增殖(P<0.01),延长了细胞G1~S期进程,极显著促进了细胞凋亡(P<0.01)。3)mtr-miR168b在BMECs中高表达极显著抑制了细胞增殖基因周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和细胞周期蛋白D2(Cyclin D2)的基因的表达水平(P<0.01),极显著增加了凋亡标志基因Bcl2关联X蛋白(BAX)基因的表达水平(P<0.01),极显著抑制了PCNA蛋白表达水平(P<0.01),极显著增加了BAX蛋白表达水平(P<0.01),并且mtr-miR168b显著抑制了蛋白激酶B(AKT)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达水平(P<0.05)。4)mtr-miR168b高表达抑制了BMECs中脂滴的积累。5)干扰mtr-miR168b的靶基因CPT1A,对BMECs脂滴积累也有抑制作用。综上所述,mtr-miR168b可通过抑制BMECs增殖,促进细胞凋亡,并通过靶向CPT1A基因抑制BMECs中脂滴的生成。试验结果可为mtr-miRNAs调控牛奶乳脂合成提供分子层面的技术支撑。     

牦牛Cyclin D1基因的克隆及IGF-I对其在睾丸支持细胞表达的影响

本研究旨在克隆牦牛(Bos grunniens)Cyclin D1基因的CDS序列,分析其生物学特性,研究胰岛素样生长因子-I(Insulin-like growth factor-I,IGF-I)对Cyclin D1mRNA和蛋白在睾丸支持细胞(Sertoli cell,SC)中表达的影响。采集5~8月龄健康牦牛的睾丸样品进行SC的分离培养,用RT-PCR技术克隆牦牛Cyclin D1基因,用ORF Finder、MEGA7.0和DNAMAN对其进行生物信息学分析,并采用免疫荧光染色技术对Cyclin D1蛋白在SC中的表达进行定位分析。向体外培养的SC中加入不同浓度(0(对照组)、25、50、100、150ng·mL~(-1))的IGF-I,采用实时定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹法检测Cyclin D1基因和蛋白的表达。结果表明:1)牦牛Cyclin D1基因(GenBank登录号:KY 420723)与其他物种的同源性均较高。2)Cyclin D1蛋白在SC胞核中高表达,为核蛋白。3)浓度为25和150ng·mL~(-1)IGF-I,Cyclin D1mRNA表达量与对照组差异不显著(P0.05),浓度为50和100ng·mL~(-1)IGF-I时,Cyclin D1mRNA表达量显著高于其他各组(P0.05);IGF-I浓度为100ng·mL~(-1),Cyclin D1蛋白表达量与对照组差异不显著(P0.05),25、50和150ng·mL~(-1) IGF-I组Cyclin D1蛋白表达量显著高于对照组(P0.05);IGF-I浓度为50ng·mL~(-1)时,Cyclin D1mRNA和蛋白表达量均为最高,分别为对照组的1.65和1.20倍。综上表明,Cyclin D1基因在进化过程中高度保守;IGF-I可调控SC中Cyclin D1的表达,其最佳作用浓度为50ng·mL~(-1)。     

microRNA调控胆固醇代谢研究进展

microRNA(miRNA)是一种非编码蛋白的短序列RNA,通过与靶基因靶标区的序列互补配对,抑制mRNA翻译或直接降解mRNA,对靶基因表达起负调控作用。胆固醇是合成机体生理活性物质的重要原料,也是构成细胞膜的主要成分。近年来,关于miRNA调控胆固醇代谢相关研究被重视和报导。本文就miRNA对动物胆固醇代谢调控相关研究进行综述。     

基于转录组学研究双酚A对猪睾丸支持细胞炎症和氨基酸代谢通路的影响

旨在研究猪睾丸支持细胞(ST)暴露于环境雌激素双酚A(BPA)不同时间后的基因表达谱变化。本研究将猪ST细胞设为C、B两组，每组设置3个重复，C组为空白对照组，B组细胞暴露于50μmol·L^-1浓度的BPA。BPA暴露6、24 h后，收集C₆、B₆、C₂₄、B₂₄组细胞总RNA样品，构建测序文库，通过双端150 bp测序方法进行高通量转录组测序。对组装数据进行功能注释、差异基因分析以及GO和KEGG富集分析。通过Real-time PCR方法对关键差异基因表达进行验证。BPA暴露24 h后差异基因数量(6 928个)较BPA暴露6 h差异基因数量(3 940个)明显增加。编码分泌型磷蛋白1的SPP1基因在BPA暴露6 h后表达增加，但在BPA暴露24 h后表达降低。管腔结合蛋白编码基因BIP、泛素B编码基因UBB、泛素C编码基因UBC、鸟氨酸脱羧酶1编码基因ODC1表达量在BPA暴露6和24 h后均显著上调。富集分析结果表明，BPA暴露6 h后，TNF信号通路富集差异倍数最高，...     

口蹄疫病毒3C蛋白酶结构与功能及应用研究进展

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶是FMDV基因组编码中具有酶学活性的病毒产物之一,在FMDV编码蛋白的成熟和子代病毒在宿主细胞体内大量扩增中发挥着重要作用。3C蛋白酶能剪切多聚蛋白,降解特定的蛋白质,是宿主细胞中重要的毒力因子。3C蛋白酶能调控蛋白的转录和翻译,使宿主细胞内的干扰素等多种抗病毒基因低水平表达,使FMDV逃避宿主的天然免疫。论文主要综述了FMDV 3C蛋白酶的结构、生物学功能,并介绍了其在研制新型疫苗中的应用,以期为今后FMDV 3C蛋白酶的研究、新型疫苗的研发提供参考。     

HuR的功能及其对肌肉生长发育的调控作用

RNA结合蛋白HuR(human antigen R)，又被称为类胚胎致死性异常视觉基因1(ELAV like RNA binding protein 1, ELAV1)，是一种在机体各组织中广泛表达的重要RNA结合蛋白，其通过调控mRNA前体剪接、多聚腺苷酸化，以及mRNA稳定性与翻译效率等方式参与机体各项生命活动。研究表明，RNA结合蛋白参与了肌肉生长发育调控，其中HuR主要通过影响靶mRNAs的稳定性和翻译参与调控肌生成与肌肉疾病的发生。本文结合近年来HuR的相关研究，从HuR的生物学特性、主要功能与作用方式、在肌肉生长发育及肌肉疾病中的调控作用等方面展开综述，以期为进一步研究HuR在肌肉生长发育调控中的作用提供参考。     

玉米赤霉烯酮降解酶在枯草芽孢杆菌中的表达及其对母猪繁殖性能的影响

本试验旨在建立玉米赤霉烯酮(ZEN)降解酶基因ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达体系,确定其产物的生物降解活性及对母猪繁殖性能的作用。克隆ZEN-jjm基因,经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后连接至p HT01表达载体中,构建重组质粒;转化枯草芽孢杆菌,通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析ZEN-jjm蛋白表达水平。高效液相色谱法(HPLC)检测表达的ZEN-jjm蛋白降解ZEN的活性。通过对母猪的繁殖性能的评价,确定ZEN降解酶降解ZEN对母猪繁殖性能的影响。双酶切和测序结果表明:ZEN-jjm成功插入p HT01中,SDSPAGE表明获得1株高效表达目的蛋白的重组枯草芽孢杆菌,其大小约为29 ku。HPLC结果表明表达的ZEN-jjm蛋白能有效地降解ZEN;表达的ZEN-jjm蛋白能显著缓解ZEN对繁殖母猪的毒害作用(P0.05)。综上:1)本研究成功构建了表达ZEN-jjm在枯草芽孢杆菌中的表达载体,并在枯草芽孢杆菌中得到了表达。2)表达的ZEN-jjm蛋白具有降解ZEN的生物活性。3)在饲粮中添加ZEN-jjm蛋白能显著降低ZEN对母猪能繁殖性能的危害。     

慢病毒与microRNA研究进展

正MicroRNA (miRNA)作为一类重要的调控分子广泛存在于动植物体内并且对调控基因表达有着重要的作用。mi RNA是一类高度保守且长度为18～25个核苷酸(nt)的小分子,它不编码蛋白质但却可以通过与蛋白编码基因的m RNA互补结合调控基因的表达。在植物中,通过完全配对结合靶基因而裂解靶m RNA;动物中,通过与靶基因不完全配对结合而抑制蛋白质的翻译。1993年首次在线虫体内发现mi RNA编码基因-lin-4基因,其编码的22 nt     

microRNA调控动物发育的研究进展

 microRNAs是一类长度约22 nt的内源性非编码小RNA分子，它能够通过与靶基因3'非翻译区结合从而抑制靶基因的翻译或降解靶基因。microRNAs无论是在单细胞还是多细胞的真核生物中都广泛存在，并对生物体的细胞周期及个体发育过程进行调控。论文对microRNAs分子及其对动物的神经、心脏、皮肤、毛发和肌肉发育等方面的研究进展作一综述，以期为深入研究调控动物发育的各种microRNAs的功能奠定基础。     

衣康酸生物学功能的研究进展

衣康酸是聚合物产业的基础化工产品之一,通过微生物发酵方式实现可再生原材料的生产。哺乳动物体内的衣康酸生物合成途径直到最近才被揭示出来,即三羧酸(TCA)循环中间产物顺乌头酸在顺乌头酸脱羧酶(CAD)/免疫响应基因1蛋白(IRG1)作用下生成衣康酸。生成的衣康酸具有抑制磷酸果糖激酶2(PFK2)和琥珀酸脱氢酶(SDH)活性的作用。此外,衣康酸也具有抗菌、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗病毒、营养代谢调控等生物学功能。因此,本文主要就衣康酸的生物学功能最新进展进行综述。