静原鸡ELOVL2基因遗传多态性研究

为了探讨静原鸡极长链脂肪酸延伸酶蛋白2（elongation of very-long-chain fatty acids 2，ELOVL2）基因的遗传特性，确定核苷酸的变异位点，本研究采用PCR-SSCP及DNA测序技术对静原鸡ELOVL2基因进行多态性检测。结果显示，静原鸡ELOVL2基因外显子6无多态性，内含子2和6呈中度多态。在ELOVL2基因内含子2扩增片段上共检测到5种基因型：A₂A₂、B₂B₂、C₂C₂、D₂D₂和A₂C₂，4种等位基因：A₂、B₂、C₂和D₂，其中A₂为优势等位基因（0.62），A₂A₂基因型为优势基因型（0.54）；3个SNPs位点：g.63372228+4918G > A的转换、g.63372228+5024T > C的转换和g.63372228+4928C > A的颠换。在E2e6I6扩增片段上共检测到3种基因型：A₁A₁、B₁B₁和A₁B₁，2种等位基因：A₁和B₁，其中A₁为优势等位基因（0.67），A₁A₁基因型为优势基因型（0.54），等位基因B₁存在g.63388000+748G > C的颠换。群体遗传学分析发现，静原鸡ELOVL2基因内含子2、6遗传纯合度均较高，且偏离了Hardy-Weinberg平衡（P < 0.05）。本研究结果表明，静原鸡ELOVL2基因内含子2和6序列突变较高，且呈中度多态，表现出纯合子优势，外显子6上无突变。     

MSTN基因编辑牛肌肉转录组测序及生物信息学分析

为探究肌生长抑制素（myostatin,MSTN）基因对牛肌肉发育的具体调控机制,本研究选取同一牛场健康鲁西黄牛10头,其中通过转基因技术得到的基因编辑牛MSTN^-/-和同种非转基因野生型牛各5头。分别采集两组牛腿臀肌肉样品,利用IIlumina HiSeq高通量测序技术进行转录组测序分析,通过生物信息学方法比较两组样本间的差异表达基因,并进行GO和KEGG富集分析,最后利用实时荧光定量PCR验证转录组测序数据。结果显示,基因编辑型牛和野生型牛之间共检测到18 071个基因。在log₂|FoldChange|≥ 1.48条件下,筛选出406个差异表达基因,其中347个显著上调,59个显著下调。GO功能富集分析显示,MSTN基因编辑后显著影响915个功能类别（P<0.05）,差异基因主要参与结合、生物系统调节、免疫系统等相关功能。KEGG通路富集分析结果共涉及211个通路,差异基因主要富集在细胞黏附分子、趋化因子信号通路、细胞因子互作等信号通路上,进一步从中筛选出可能参与细胞生长、肌肉发育的差异基因（CD14、KIT、CSF1R、FBP1、DUSP4、ULBP21、PRKCB、SPN、CHAD、SRC）。实时荧光定量PCR检测结果显示,所选差异基因表达水平与转录组表达水平一致,证明测序结果的可靠性。本研究结果表明,MSTN基因发挥作用后可以介导多个下游基因表达,从而影响相关信号通路及生物学过程;同时,所筛选出的差异表达基因可作为进一步研究骨骼肌调控机制的候选靶标。     

AFB1降解剂对肉鸡生长性能、养分代谢及AFB1在体内残留的影响

通过在含有黄曲霉毒素B₁（aflatoxin B₁,AFB₁）的肉鸡日粮中添加AFB₁降解剂,测定其对肉鸡生长性能、养分代谢及AFB₁在血液、肝脏及肌肉中残留的影响。试验选择42日龄健康AA肉鸡75只随机分为5组,每组设5个重复。A组为对照组,饲喂基础日粮,B、C、D和E组在基础日粮中分别添加400、200、400和800 μg/kg AFB₁。B组为负对照组,C、D和E组分别添加0.15% AFB₁降解剂,试验期为30 d。试验结束时,测定肉鸡的生长性能、营养物质代谢率、体内AFB₁含量及抗氧化酶活性。结果表明：与AFB₁含量相同的B组相比,D组的平均日采食量和末重分别提高了32.45%、42.46%（P < 0.05）;与B组相比,其余各组的有机物、粗蛋白质、钙和磷的代谢率均有显著提高（P < 0.05）,D组的有机物和粗蛋白质消化率分别提高了9.50%和178.75%（P < 0.05）。血液、组织中AFB₁的测定结果表明,停喂AFB₁前,C组肝脏中AFB₁含量显著低于B组（P < 0.05）,停喂AFB₁24 h后,A和C组胸肌中AFB₁含量显著低于B、D和E组（P < 0.05）,停喂AFB₁48 h后,C、D组胸肌中AFB₁含量恢复到与对照组相同的水平。与B组相比,添加0.15% AFB₁降解剂的C、D和E组,血清和肝脏中谷胱甘肽过氧化物酶和超氧化物歧化酶活力显著提高（P < 0.05）。由此可见,在含有AFB₁的日粮中添加AFB₁降解剂,可缓解AFB₁对生长的抑制,提高养分消化率,加速AFB₁在肉鸡体内的代谢,减少AFB₁对机体的损伤。     

不同精粗比对牦牛粪便菌群结构的影响

本试验旨在研究不同精粗比对牦牛粪便菌群结构的影响。选取24头体重相近、健康的3岁公牦牛，随机分成2组，分别饲喂低精粗比饲粮(35∶65,C₃₅组)和高精粗比饲粮(65∶35,C₆₅组)。预试期为15 d，试验期为90 d。运用16S rDNA高通量测序技术对粪便菌群结构变化进行分析。结果表明：1)2组共检测出1702个操作分类单元(OTU)，其中两组共有的OTU数目为1273个，占总OTU数目的74.79%;C₃₅组的物种数、Chao1指数与Shannon指数显著高于C₆₅组(P<0.05)。2)在门水平下，C₃₅组牦牛粪便中髌细菌门和蓝藻菌门极显著高于C₆₅组(P<0.01)，放线菌门显著高于C₆₅组(P<0.05);C₆₅组牦牛粪便中拟杆菌门、螺旋体门显著高于C₃₅组(P<0.05)。3) C₃₅组牦牛粪便中瘤胃球菌属极显著高于C_6...     

母鼠孕期和哺乳期连续染毒双酚A对子代雄鼠睾丸发育的影响

旨在探究双酚A (BPA)对子代雄鼠睾丸发育的影响。本研究将8周龄体重18～22 g的SPF级母鼠随机分为7组,每组4个重复,每个重复5只,A组每天给予普通蒸馏水,B组每天饮水给予0.05 mg·kg^-1 BPA,C组每天饮水给予0.5 mg·kg^-1 BPA组,D组每天饮水给予5 mg·kg^-1 BPA,E组每天饮水给予10 mg·kg^-1 BPA,F组每天饮水给予20 mg·kg^-1 BPA,G组每天饮水给予50 mg·kg^-1 BPA。F0代母鼠自怀孕起直至F1代子鼠断奶止饮水染毒BPA,F1代雄鼠于断奶(21日龄)处死。ELISA结果显示,母鼠染毒BPA剂量5 mg·kg^-1以上时,子代血清和睾丸组织BPA含量显著增加(P<0.05)。睾丸器官指数测定结果证明,染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^-1可导致子代雄鼠睾丸指数显著增大(P<0.05)。H&E染色显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于10 mg·kg^-1可导致睾丸生精小管萎缩,小管间隙变大。彗星试验结果证明,染毒BPA大于等于5 mg·kg^-1可使子代睾丸细胞核DNA损伤显著上升(P<0.05)。免疫组化结果显示,母鼠染毒BPA剂量大于等于20 mg·kg^-1时子代睾丸雄激素受体(AR)表达量显著减少(P<0.05)。转录组测序结果显示,母鼠染毒50 mg·kg^-1BPA后子代雄鼠睾丸剪切体代谢通路U5 snRNA亚基编码基因Snrnp40上调,剪切体通用蛋白组件编码基因Hnrnpu下调,导致mRNA转录后修饰第一步受阻,荧光定量PCR结果与转录组测序结果一致,证实了转录组结果。结果表明,母鼠暴露于低剂量BPA可以引起子代睾丸发育异常,其分子机制可能与剪切体进行mRNA转录后修饰第一步反应受阻有关。     

蒙药黄芩与制粒对紫花苜蓿维生素和化学成分的影响

研究制粒工艺(制粒前、后)和添加黄芩(0、0.5%、1.0%、1.5%)对紫花苜蓿的营养品质、维生素含量、大肠杆菌与霉菌数量的影响,旨在了解制粒过程中紫花苜蓿的营养品质、维生素含量和微生物数量变化规律,探讨蒙药黄芩添加剂对紫花苜蓿维生素含量的保存、稳定作用。结果表明:制粒后,紫花苜蓿维生素B₂、维生素B₅、维生素B₆含量显著降低,而维生素K₁、维生素C含量显著升高;紫花苜蓿干物质和粗脂肪含量显著增加;大肠杆菌数量显著降低。添加1.5%黄芩显著提高了紫花苜蓿维生素C、维生素B₂、维生素B₆含量,而添加0.5%~1.0%黄芩显著降低了维生素K₁含量,添加1.5%黄芩显著降低了维生素B₁含量。综合两个因素的影响考虑,添加1.5%黄芩可显著提高紫花苜蓿草颗粒维生素C、维生素B₆含量;添加1.5%黄芩和制粒能显著提高紫花苜蓿粗脂肪含量。     

蒙药红花清肝13味丸治疗CCl4诱导小鼠肠道损伤的转录组测序分析研究

[目的]筛选参与四氯化碳(CCl₄)诱导的小鼠肠道损伤以及蒙药红花清肝13味丸治疗过程的重要信号通路及基因。[方法]将18只6～8周龄、体重为20～22 g的雄性C57BL/6小鼠随机分为3组,即空白对照组(n=6)、模型组(n=6)和治疗组(n=6)。空白对照组与模型组每天灌胃1次生理盐水,剂量为10 m L/(kg·BW),连续7 d;治疗组每天灌胃1次红花清肝13味丸,剂量为616.5 mg/(kg·BW),连续14 d;最后一次灌胃4 h后,空白对照组腹腔注射橄榄油,模型组和治疗组腹腔注射CCl₄橄榄油混合物(CCl₄∶橄榄油=1∶4,V/V),剂量均为10 m L/(kg·BW)。肠道损伤处理后第2天,分别采集3组小鼠十二指肠组织,进行高通量转录组测序。利用获得的测序数据,对差异表达基因进行预测和功能分析以及KEGG信号通路富集,筛选红花清肝13味丸治疗后显著下调信号通路富集的基因群,并与红花清肝13味丸药物靶点基因进行互交分析。[结果](1)转录组测序分析表明,与空白对照组相比,模型组与治疗组分别获得了1 4...     

地衣芽孢杆菌的分离鉴定及其抑菌活性分析

为了研究不同来源的地衣芽孢杆菌对常见致病菌的抑菌效果等生物学特性，试验采用细菌形态学、生理生化、16S rRNA基因测序、系统发育树分析、牛津杯抑菌试验等检测技术，对5株不同来源(鸡粪、羊粪、牛瘤胃内容物、猪肠内容物及土壤)的地衣芽孢杆菌进行了分离鉴定及体外抑菌活性检测。结果表明：5株分离株B₁₇(鸡粪)、B₃₀(羊粪)、B₃₂(牛瘤胃内容物)、B₃₅(猪肠内容物)和B₃₈(土壤)均可在LB固体培养基上生长，其中有3株不同来源的分离株B₃₀、B₃₅和B₃₈菌落形态相同；镜检可见分离株均为革兰氏阳性杆菌、均有近中生的孢子，符合芽孢杆菌的菌体特征；生理生化特性与芽孢杆菌相符；PCR扩增均得到约为1 500 bp的目的片段;所有分离株与GenBank中的地衣芽孢杆菌在同一簇，均鉴定为地衣芽孢杆菌；在5株地衣芽孢杆菌中，除猪源地衣芽孢杆菌B₃₅外，其余4株均有抑菌作用，羊源及牛源地衣芽孢杆菌B     

西北地区4种优质饲草的肉牛体外瘤胃发酵性能研究

本试验选用黄土高丘陵沟壑区推广应用的玉米、燕麦、苜蓿裹包青贮及苜蓿干草为试验材料,旨在研究其在肉牛体外瘤胃发酵性能及组合效应,为其科学应用提供技术支持。将4种优质饲草按干物质基础组成7种不同比例组合,即C₁(50%玉米青贮+50%燕麦青贮)、C₂(50%玉米青贮+50%苜蓿青贮)、C₃(80%玉米青贮+20%苜蓿干草)、C₄(50%燕麦青贮+50%苜蓿干草)、C₅(70%玉米青贮+10%燕麦青贮+20%苜蓿青贮)、C₆(65%玉米青贮+15%燕麦青贮+25%苜蓿青贮)和C₇(50%玉米青贮+20%燕麦青贮+30%苜蓿青贮)共构成11种发酵底物。结果表明:4种单一饲料在各时间点的产气量(GP)玉米青贮最高,苜蓿青贮最低(P<0.05);7种组合不同时间点产气特点为,C₃的GP最高,C₄最低(P<0.05)。4种单一饲料的快速降解部分产气量(a)和产气速率常数(c)分别为玉米青贮和苜蓿干草最高,与其他单一饲料存在显著差异(P<0.05);7种组合中的a和c均以C₂最高;慢速降解部分产气量(b)和潜在产气量(a+b)均以C₃最高,亦均显著高于其他组合(P<0.05)。体外发酵48 h后,4种单一饲料中玉米青贮的干物质消失率(DMD)显著高于其他3种(P<0.05);培养液的pH介于6.27~6.72,且各组间差异显著(P<0.05);氨态氮(NH₃-N)浓度燕麦青贮最高(P<0.05)。7种组合的DMDC₂显著低于C₅和C₇(P<0.05);pH介于6.40~6.69,其中C₃显著低于其他6种(P<0.05);NH₃-N的浓度C₁与C₂显著高于其他5种(P<0.05)。4种单一粗饲料的总挥发性脂肪酸(TVFA)为玉米青贮显著高于苜蓿青贮和干草(P<0.05);7种组合培养48 h后,培养液的TVFA浓度C₂和C₄显著低于C₅和C₆(P<0.05)。综上,玉米青贮的体外发酵GP、DMD、TVFA及乙酸浓度均最高;苜蓿青贮的体外发酵GP较低,发酵速度慢;不同组合的综合组合效应值(MFAEI)均为正值,由高到低依次为C₄、C₂、C₅、C₁、C₃、C₆、C₇。     

饲粮维生素B1添加水平对产蛋期种鹅繁殖性能、血清生殖激素指标、肠道组织形态及盲肠菌群结构的影响

本试验旨在研究饲粮维生素B₁添加水平对产蛋期种鹅繁殖性能、血清生殖激素指标、肠道组织形态及盲肠菌群结构的影响。试验选用150只体况相近的34周龄五龙鹅种鹅，随机分为6组，每组5个重复，每个重复5只鹅(1公4母)。各组维生素B₁添加水平分别为0(对照组)、1、2、3、4、5 mg/kg。预试期1周，正试期10周。结果表明：1)各组之间种蛋合格率、种蛋受精率、种蛋孵化率差异不显著(P>0.05)。2)各组之间血清催乳素、促黄体生成素、雌二醇、睾酮含量差异不显著(P>0.05)。2 mg/kg维生素B₁组血清孕酮含量显著高于对照组和1、3、4、5 mg/kg维生素B₁组(P<0.05),2、3 mg/kg维生素B₁组血清促卵泡素含量显著高于对照组(P<0.05)。3)2 mg/kg维生素B₁组空肠和回肠绒毛高度/隐窝深度显著高于对照组和5 mg/kg维生素B₁组(P<0.05)。4)2 mg/kg维生素B     

ZBED6基因敲除猪肾脏转录组分析

【目的】 探究锌指BED结构域结合蛋白6(zinc finger BED domain-containing protein 6,ZBED6)基因敲除对猪肾脏组织基因转录表达的影响,并解析ZBED6基因调控猪肾脏代谢的靶基因及其通路。【方法】 对8月龄ZBED6基因敲除巴马香猪(ZBED6 KO)和同月龄野生型巴马香猪(WT)的肾脏组织(n=3)进行总RNA提取,利用实时荧光定量PCR检测胰岛素样生长因子2(insulin-like growth factor 2,IGF2)和差异基因的表达量;以Illumina Hiseq高通量测序技术对ZBED6 KO和WT猪肾脏组织mRNA进行转录组测序(RNA-Seq),用猪Sus scrofa 11.1作为参考基因组序列,通过生物信息学软件TopHat、Cufflink、Cuffmerge和Cuffdiff对测序数据进行分析,筛选ZBED6 KO和WT猪肾脏组织中的差异表达基因,对差异表达基因进行层次聚类和KEGG通路富集分析,并通过实时荧光定量PCR验证RNA-Seq结果中差异表达基因的可靠性。【结果】 实时荧光定量PCR结果显示,ZBED6 KO猪肾脏IGF2基因mRNA表达量显著高于WT猪(P<0.05)。测序共获得78 G数据量,每个样本比对率在87.3%以上,测序质量良好;ZBED6 KO和WT猪肾脏组织之间共检测到25 213个基因,以调整后P<0.05和log₂|FoldChange|>2为筛选标准,得到299个差异表达基因,其中上调的基因103个,下调的基因199个。热图和主成分分析(PCA)结果显示,ZBED6 KO和WT组猪肾脏基因组内表达模式相似,组间表达模式不同;KEGG通路富集分析显示,差异基因主要参与视黄醇及疾病代谢相关通路。ZBED6基因敲除后,其中有9个差异表达基因(CYP2C42、AOX1、ENSSSCG00000036274、RDH16、CYP2A19、ENSSSCG00000022724、CYP26B1、CYP1A1、RDH5)被富集到视黄醇代谢通路中,可能参与调控猪肾脏代谢平衡。实时荧光定量PCR检测发现,7个差异表达基因(CYP2C42、AOX1、RDH16、CYP2A19、CYP26B1、CYP1A1、RDH5)的表达模式与RNA-Seq分析结果一致,证实RNA-Seq结果的可靠性。【结论】 本试验利用RNA-Seq技术分析了ZBED6基因敲除对巴马香猪肾脏代谢的影响,其通过调控肾脏多个下游基因表达,从而影响其代谢相关信号通路,试验结果为阐明ZBED6基因功能提供了材料。     

基于转录组测序的油酸诱导延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化差异表达基因的分析

本研究旨在研究油酸(OA)引起延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化途径的分子调控机制。对从12日龄延边牛中分离得到的骨骼肌卫星细胞进行体外培养,加入不同浓度OA的诱导分化培养液,进行分化处理,试验设1个空白对照组[CON组,5%马血清(HS)],3个不同浓度OA诱导组:OAL组(5%HS+50μmol/L OA)、OAM组(5%HS+100μmol/L OA)、OAH组(5%HS+200μmol/L OA),诱导96 h后,对延边牛骨骼肌卫星细胞进行了转录组测序及分析。结果表明:共得到13 951条单基因,对4个组差异表达基因进行比较发现,与CON组相比,OAL组有3 412个差异表达基因,OAM组有1 045个差异表达基因,OAH组有1 428个差异表达基因,各组之间共有278个差异表达基因。GO富集分析显示,差异基因参与了多种生物过程,包括代谢过程、细胞过程、生物调节过程等;在分子功能类别上,大多数的基因功能与结合活性、转录调节活性、催化活性等相关;在细胞组分范畴内,大部分的基因被富集到细胞、细胞器、膜等。KEGG富集分析表明,差异表达基因主要富集通路为单磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路、过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路、脂肪酸代谢通路、脂肪酸降解通路等。不同浓度OA差异基因荧光定量PCR结果显示,所选的5个差异基因与转录组测序结果基本一致,表明了测序结果的可靠性。本试验完成了OA诱导延边牛骨骼肌卫星细胞成脂分化的转录组测序分析,获取差异基因的功能注释信息,初步揭示了OA诱导牛骨骼肌卫星细胞成脂分化的潜在基因和通路。     

添加麦麸和乳酸菌对川西北高寒地区燕麦裹包青贮品质和有氧稳定性的影响

川西北高寒地区燕麦收获时含水量较高，环境温度较低，燕麦青贮品质不佳。本文为提高燕麦青贮品质，研究了自选乳酸菌发酵生物学特性，评价了麦麸和自选乳酸菌菌株对燕麦裹包青贮品质和有氧稳定性的影响，采用双因素试验设计：因素A,A₀:0%麦麸；A₁:30%麦麸；因素B,B₀:对照；B₁:Lactobacillus plantarum 160 (LP160);B₂:Lactobacillus brevis 248 (LB248);B₃:商业菌。每个裹包50 kg,每个处理3个重复。结果表明，自选菌株LP160和LB248在模拟冻融(20℃/-5℃)条件下生长迅速、产酸快。燕麦裹包青贮60 d后，添加麦麸后青贮干物质、粗蛋白、可溶性碳水化合物、乳酸显著增加(P<0.01),添加乳酸菌后青贮pH和氨态氮显著降低(P<0.01),其中A₀B₁组发酵品质最优，A₁B₁组营养品质最...     

桦褐孔菌提取物对黄曲霉素B1暴露小鼠肝损伤的缓解作用

【目的】探究桦褐孔菌提取物(IOE)对黄曲霉毒素B₁(AFB₁)暴露小鼠肝损伤的保护作用及机制。【方法】选取30只6周龄、体重相近的SPF级雄性C57BL/6小鼠,随机分为5组,对照组连续灌胃蒸馏水10 d; AFB₁组第1～7天连续灌胃蒸馏水,第8～10天连续灌胃2 mg/kg AFB₁;不同浓度IOE组第1～7天分别连续灌胃25、50和100 mg/kg IOE,第8～10天各组均连续灌胃2 mg/kg AFB₁,灌胃剂量均为0.2 mL,每天1次。试验结束后对小鼠称重并采集血液、肝脏组织,统计肝脏指数;通过苏木精-伊红(HE)染色观察肝脏组织病理变化;利用流式细胞仪分析肝脏细胞凋亡情况。通过细胞毒性试验,筛选AFB₁诱导AML12细胞损伤最适条件,并以此建立肝损伤模型,给予不同浓度IOE进行干预,利用CCK-8法测定细胞活力,确定IOE防治AFB₁诱导AML12细胞损伤的剂量范围。使用ELISA法检测血清和细胞中炎性因子白细胞介...     

转录组解析白三叶根际溶磷菌株RW8的解磷机制

采用转录组测序的方法分析了白三叶根际溶磷菌RW8在含有难溶磷(A组)、可溶磷(B组)与无磷(C组)培养条件下差异基因表达。以可溶磷为对照,在难溶磷条件下,分别检测到4782个基因在RW8中上调表达,447个基因下调表达;在无磷组中,共检测到3630个基因上调表达,209个基因下调表达。GO基因注释发现RW8在A组和C组中的差异基因聚类基本相同。生物学过程主要聚类在代谢过程、细胞过程、单细胞过程、刺激应答、定位以及生物反应调节;细胞组分主要聚类在细胞组分、细胞膜、膜组分与高分子配合体等;分子功能主要聚类在催化活性、结合功能与转运功能。代谢途径分析发现2-α-氧代羧、α-亚麻酸、五碳二元酸、脂肪酸、甘氨酸-丝氨酸-蛋氨酸以及缬氨酸-亮氨酸-异亮氨酸等代谢途径的基因显著被富集。挑选10个差异基因并用荧光定量检测其在A、B、C 3种不同培养条件下的基因表达,发现所有挑选基因的表达变化与转录组结果变化趋势相同。液相色谱检测有机酸组成及含量,发现在A组和C组中乳酸、琥珀酸与柠檬酸显著高于B组,富马酸与苹果酸的含量在C组中显著升高, A组与B组差异不显著;α-酮戊二酸的含量在A组中显著增高, B组和C组差异不显著。     

干扰lnc23后牛骨骼肌卫星细胞转录组测序的生物信息学分析

试验旨在分析lnc23在调控牛骨骼肌卫星细胞分化过程中转录组水平的变化,筛选出可能参与调节骨骼肌卫星细胞生长的调控通路及相关mRNAs。采用第二代测序技术（next-generation sequencing,NGS）基于Illumia hiSeq测序平台对成功构建的lnc23抑制模型及相应对照组的牛骨骼肌卫星细胞进行转录组测序,将数据整理、过滤及评估后,通过生物信息学方法分析样品间基因转录差异表达,对这些差异基因进行GO和KEGG富集分析,并应用实时荧光定量PCR技术对转录组数据结果进行验证。结果显示,转录组测序共鉴定到19 358个基因,筛选到1 297个差异表达基因,其中上调856个,下调441个。差异基因的GO功能分析共包括细胞组分、分子功能和生物学过程3大类222个分支,其中有大量的差异基因与催化活性、分子功能调节、信号转导、生物黏附、新陈代谢相关。KEGG分析显示,差异基因共涉及190个通路,显著富集在PI3K-Akt、P53、TNF、RIG-Ⅰ样受体、神经活性配体受体互作、细胞因子互作等信号通路上,进一步从中筛选出可能参与细胞生长、肌肉发育过程的差异基因,如CCNA2、RRM2、IL-6、MYL2等。实时荧光定量PCR结果显示,所选的11个差异基因中有9个与转录组测序结果变化一致,表明了测序结果的可靠性。本试验完成了干扰lnc23及其对照后牛骨骼肌卫星细胞的转录组测序分析,获取差异基因的功能注释信息,初步揭示lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞分化的潜在基因和通路,为深入探究lnc23调控牛骨骼肌卫星细胞的分化机制打下良好的基础。     

1株青海牦牛腹泻产气荚膜梭菌基因分型及cpa基因生物信息学分析

为了解1株从青海玉树地区牦牛腹泻中分离的牦牛源产气荚膜梭菌Qinghai-1的分子型和cpa基因编码蛋白的生物信息，首先利用16S rDNA扩增、毒素基因检测、MLST分型、基因克隆等分子生物学方法对菌株毒素基因和管家基因进行分析，随后通过对cpa基因双向高通量测序、生物软件分析等生物信息学方法对其编码的α毒素蛋白的一级结构、二级结构、三级结构、蛋白特殊区域、B细胞线性抗原表位及蛋白互作关系进行分析。结果显示，Qinghai-1菌株分型毒素仅含有α毒素，各管家基因的等位基因序号依次为colA:9、groEL:96、sodA:91、plc:44、gyrB:67、sigK:55、pgk:8、nadA:16;cpa基因全长1 197 bp,共编码398个氨基酸，与丹麦鸡源(EU839784.1)分离株plc基因差异性较小；其编码的α毒素蛋白分子式为C₂₀₃₆H₃₀₆₁N₅₃₃O₆₃₁S₁₂,相对分子质量为45.5 ku, pI=5.68,脂肪指数：61.36,不稳定指数：19.88,...     

湖羊在西北寒旱地区行为学和生理指标的观测

为了研究西北寒冷干旱气候条件下湖羊的行为和生理指标变化,进而为西北地区湖羊引种提供数据支持和理论依据,本试验选用12只(公、母各半)舍饲周岁湖羊,通过近红外摄像技术研究了不同季节(A因子,A₁夏季,A₂冬季)、性别(B因子,B₁♂,B₂♀)和不同时段(C因子,C₁昼,C₂夜)条件下湖羊的采食、饮水、反刍、卧息等行为。结果表明,季节因子(A因子)对湖羊采食、卧息、反刍等行为均有极显著影响(P<0.01);性别因子(B因子)仅对湖羊采食和卧息行为有显著影响(P<0.05);昼夜因子(C因子)对湖羊的卧息行为有显著影响(P<0.05),对其采食和反刍行为有极显著影响(P<0.01)。季节和性别的交互作用对湖羊采食行为有显著影响(P<0.05),对反刍行为有极显著影响(P<0.01)。其余因子间交互作用对湖羊行为学无显著影响。试验羊体温、心跳、呼吸频率和血常规等生理指标均在正常范围内。以上结果说明湖羊在当地表现出了良好的适应性,在西北地区引种湖羊可行。     

猪成纤维细胞敲减卵泡抑素基因后的生物信息学分析

在哺乳动物中,卵泡抑素（follistatin,FST）不仅参与生殖调控,还与肌肉生长、脂肪沉积等显著相关。为了探究该基因在成纤维细胞中的生物学功能,本研究利用二代测序技术对敲减FST基因的猪成纤维细胞进行转录组测序,筛选差异表达基因,并利用在线生物学软件对差异基因进行GO功能注释及生物学通路富集分析。结果发现,敲减FST基因后共有370个基因显著上调,287个基因显著下调。与细胞增殖、凋亡相关的HOXA6、PARP14、ZBP1、NDUFB9、RAB13、FAM83D、THBS1和BTF3基因以及与疾病相关的ZNF354C、RNF213、IFIT1、CCL5和VPS13C基因均发生了显著变化。这些差异基因共得到51个GO功能注释,生物过程分类下的生物调节、细胞过程、代谢过程、单一生物过程和细胞组分分类下的细胞器、细胞区域、细胞及分子功能分类下的黏合条目下聚集的差异基因数量最多,均>200个。共发现12条显著富集的通路,包括3条与细胞增殖相关的通路（p53信号通路、细胞周期和真核生物中核糖体的生物发生）,4条与疾病相关的通路（阿尔茨海默氏病、沙门氏菌感染、亨廷顿病和非小细胞肺癌）,2条与肌肉收缩相关的通路（血管平滑肌收缩和心肌收缩）以及泛素介导的蛋白水解作用、肌动蛋白细胞骨架的调节和缝隙连接通路。以上研究结果表明,在成纤维细胞中敲减FST基因后,与细胞增殖分化和部分疾病相关的基因和生物学通路被显著富集,暗示FST基因在成纤维细胞的创伤修复过程中发挥重要的作用。     

多年生黑麦草细胞分裂素信号通路B类ARR转录因子LpARR10的耐镉功能分析

镉（Cd）是矿区重金属污染的主要元素之一，严重限制了植物的生长、发育。细胞分裂素（CTK）能够缓解镉对植物的毒害，但具体机制尚不清楚。本研究克隆了多年生黑麦草CTK信号通路基因LpARR10，该基因具有6个外显子，编码598个氨基酸。进化分析表明，LpARR10与拟南芥B类ARR转录因子（B-ARRs）聚为一组，其中与AtARR10和AtARR12的亲缘关系较近。氨基酸序列分析结果显示，LpARR10具有B-ARRs典型的磷酸受体结构域、磷酸化和金属离子结合位点。表达模式分析表明，CTK（25 μmol·L^-1 6-BA）和Cd（200 μmol·L^-1 CdCl₂）处理0.5、2、6、12、24和48 h均显著提高了黑麦草根部LpARR10的表达；而在叶片中，LpARR10的表达仅在CTK和Cd处理2和6 h后显著升高。过量表达LpARR10转基因和野生型拟南芥在无Cd的MS培养基上生长10 d后，根长和鲜重没有显著差异；而在含有Cd（180 μmol·L^-1 CdCl₂）的MS培养基中，过量表达转基因株系的根长和鲜重显著高于野生型对照。综上，LpARR10在细胞分裂素调控的植物耐镉机理中发挥重要作用。