猪微卫星多态性两种检测方法的比较研究

 为了确定一种安全、有效的检测猪微卫星多态性的实验方法,采用两种电泳和两种染色方法对大白猪基因组DNA进行了6个微卫星座位的PCR扩增,并将扩增产物在2.5%的琼脂糖凝胶上电泳,EB染色,然后又在8%的聚丙烯酰胺凝胶上电泳,AgNO₃染色。结果表明两种方法检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在差异,8%的聚丙烯酰胺凝胶电泳在区分微小差异片段能力上明显优于2.5%的琼脂糖凝胶电泳。     

两种检测扁桃基因组RAPD扩增产物方法的比较分析

通过2;(w/v)的琼脂糖凝胶和8;(w/v)的聚丙烯酰胺凝胶电泳对扁桃品种基因组DNA的RAPD检测.结果表明:8;(w/v)聚丙烯酰胺凝胶优于2;(w/v)琼脂糖凝胶,主要表现在,8;聚丙烯酰胺凝胶对长度相差100 bp以下的DNA分子的分离较2;的琼脂糖凝胶电泳效果好;且8;聚丙烯酰胺凝胶的分辨范围广,在线性DNA分子(0.1～2.0 kb)范围内也能得到很好的分离效果;用8;的聚丙烯酰胺凝胶分离扁桃品种基因组DNA的RAPD扩增结果,表现出在扁桃品种间DNA水平上差异大,运用此方法提高了扁桃品种的鉴别能力.     

核桃RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特点

1.3%琼脂糖凝胶和5%聚丙烯酰胺凝胶电泳对核桃RAPD扩增产物检测的结果表明,5%聚丙烯酰胺凝胶对RAPD扩增产物的分离效果较1.3%琼脂糖凝胶好。根据两者的电泳结果构建了树状聚类图,聚类结果大致相同,两种电泳方法都能正确地反映出品种间的遗传关系。通过挑选20个片段进行克隆,发现20条序列都来自核桃基因组。其中,编码蛋白基因的序列为5条,占所克隆片段的25%。     

桃RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特征分析

以16个桃品种为试验材料,选用11个碱基引物以及严格筛选PCR退火温度的RAPD技术,对琼脂糖凝胶及聚丙烯酰胺凝胶电泳检测的RAPD、PCR扩增产物进行比较.结果表明,聚丙烯酰胺凝胶电泳检测出的总谱带及多态性谱带数均高于琼脂糖凝胶,前者不存在或少存在共迁移性的现象.随机选取19个片段,发现其中有6条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,同时可扩增编码蛋白的基因片段,能够较全面客观地反映不同桃品种遗传上的差异.     

黄瓜SRAP-PCR反应体系的建立

为了建立黄瓜适宜的SRAP(相关序列多态性)反应体系,以长形白皮少刺黄瓜B-2-2和圆形白皮黄瓜Y-3为材料,分析了不同来源的Taq酶及其浓度、Mg2 浓度、dNTP浓度、DNA模板浓度、引物浓度对扩增结果的影响,并比较了琼脂糖凝胶和变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明,在12.5μL反应体系中,Taq酶适用Takara酶,其最适用量为0.5U;DNA模板最适浓度为30 ng,Mg2 最适浓度为2.0 mmol/L,引物最适浓度为0.96μmol/L,dNTP最适浓度为200μmol/L。6%的变性聚丙烯酰胺电泳检测扩增产物效果比琼脂糖检测效果好。用不同黄瓜材料的基因组DNA两次SRAP-PCR扩增,6对引物均能扩增出清晰且重复性好的谱带。因而建立的黄瓜SRAP反应体系稳定可靠。     

香蕉SSR反应体系的优化

以香蕉品种AAcv Rose为试材,研究了香蕉SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增结果的影响,并比较了聚丙烯酰胺凝胶及琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物多态性的差异。结果表明:在20μL的反应体系中,各成分的最适用量分别为TaqDNA酶0.5U/mL;Mg2 2.5mmol/L;引物0.4μmol/L;模板DNA20～40ng/μL;dNTPs0.1mmol/L。利用24个香蕉品种验证此反应体系,80g/L的非变性聚丙稀酰胺凝胶电泳检测结果显示,扩增产物在150～300bp之间,不同品种间DNA谱带具有多态性。聚丙稀酰胺凝胶电泳检测的DNA多态性高于琼脂糖。     

利用SRAP鉴定西藏冬虫夏草的真伪初探

通过SRAP分子标记对来源于西藏的5个野生冬虫夏草的真伪和产地进行了初步区分，结果表明：利用改良CTAB法能对5个供试材料中的4个进行DNA提取且含量和纯度能达到分析要求；利用8对SRAP引物对总DNA进行PCR扩增后分别进行琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳，多态性位点分别为86．20％和87．30％；聚类分析表明利用琼脂糖电泳就能区别西藏不同来源的冬虫夏草。     

固原黄牛系统地位的研究

以系统随机整群抽样调查六盘山区固原黄牛群体毛色和外部形态特征，用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测了该群体６个血液蛋白位点的多态性。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定了技术基础。     

仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系的优化

[目的]优化仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳体系。[方法]以25份仁用杏和3份食用杏为材料,利用微卫星标记结合非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术筛选出多态性高、可重复的SSR位点。并比较不同因子对电泳体系的影响,探索仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系。[结果]仁用杏微卫星非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的优化体系为：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为6%,丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的比例为29∶1,1000V下电泳2～3h,0.1%AgNO3染色15min后显影。[结论]该优化体系为仁用杏资源微卫星标记遗传分析奠定技术基础。     

利用Agilent 2100 Bioanalyzer检测食源致病性沙门氏菌

探讨Agilent 2100 Bioanalyzer芯片分析系统在检测食源致病性沙门氏菌的应用.根据致病性沙门氏菌的致病基因invA设计特异性引物扩增出致病性沙门氏菌特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的准确度、重复性和灵敏度.Bioanalyzer的准确度和重复性比琼脂糖凝胶电泳高,Bioanalyzer的准确度在95%以上,琼脂糖凝胶电泳仅为85%;Bioanalyzer的检测灵敏度也比琼脂糖凝胶电泳高.Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对食源性致病菌进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和鉴定,具有重要的推广价值.     

巴东木莲雌蕊柱头蛋白的提取与双向电泳分离

优化巴东木莲雌蕊柱头蛋白的提取方法,并用双向电泳方法分离提取蛋白,得到分辨率高和重复性较好的双向电泳图谱.在考马斯亮蓝R-250染色胶上,开花前柱头蛋白有858个蛋白点,开花后的聚合雌蕊柱头有865个蛋白点.有1个蛋白点只在开花前柱头蛋白中表达,3个蛋白点只在开花后的聚合雌蕊柱头中表达.为分析花粉和柱头间的识别奠定基础.     

鸡毒支原体DNA提取和纯化的研究

本文报道了鸡毒支原体ＤＮＡ提取和纯化过程。应用不同方法自鸡毒支原体培养物中共提取１０批鸡毒支原体ＤＮＡ。ＤＮＡ片段大小均一,在琼脂糖凝胶电泳中呈一条带,ＤＮＡ溶液的ＯＤ２６０／ＯＤ２８０接近１．８。用限制性核酸内场酶ＢａｍＨＩ切割,呈清晰的ＤＮＡ条带。     

枇杷RAPD扩增产物的不同电泳检测及其序列特征分析

为了更好地将RAPD技术应用于枇杷品种资源的鉴定以及遗传基础的研究,在选用11个碱基引物以及严格筛选PCR退火温度的最新RAPD技术优化的基础上,以16个枇杷品种为试验材料,对琼脂糖凝胶以及聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测的RAPD PCR扩增产物效果进行比较。结果表明,聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳检测出的总谱带数以及多态性谱带数均高于琼脂糖凝胶。根据两种电泳系统获得的标记信息进行枇杷品种遗传聚类分析,结果表明PAGE电泳的分析结果与枇杷的分类情况更为一致。随机对挑选的38个片段进行克隆与测序,发现37个片段都是对应引物的RAPD扩增产物,其中有6条是编码蛋白的基因片段,说明RAPD不仅扩增基因组上的非编码蛋白序列,而且可以扩增编码蛋白的基因片段,是能够揭示枇杷品种间基因组信息异同的理想的DNA标记技术。     

牛精子蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定初步研究

通过建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为从蛋白质水平研究精子生理机能奠定技术基础;采用改进的热TRIzol法裂解精子细胞制备蛋白,应用双向凝胶电泳(2-DE)分离牛精子蛋白,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定蛋白质点.得到了重复性较好的牛精子2-DE图谱,质谱鉴定16个蛋白质点.建立牛精子双向电泳-质谱鉴定研究平台,为后续牛精子X、Y差异蛋白点的检测和分析奠定了理论和技术基础.     

基于微流控芯片电泳的番茄黄化曲叶病毒快速检测

【目的】探索微流控芯片电泳方法在PCR产物检测方面的效果,并建立针对番茄黄化曲叶病毒（Tomato yellow leaf curl virus,TYLCV）的微流控芯片电泳检测方法,弥补琼脂糖凝胶电泳方法在试剂消耗、所用时间、安全性方面的缺陷。【方法】通过对TYLCV的基因组进行分析后,在该基因组中相对稳定的位置设计引物,同时兼顾引用已被研究者研究过的引物,对这些选择的引物进行特异性、稳定性、灵敏度等方面的验证,筛选出用于后续试验的引物。选择DNA标准物φX174/BsuR I(Hae Ⅲ) marker,分别进行琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳,对二者在耗材、耗时和灵敏度方面进行比较,确定微流控芯片电泳在核酸检测方面的应用价值。利用筛选出的其中1对引物对番茄叶片的实际样品进行PCR扩增,随后通过微流控芯片电泳对其进行检测,以此探讨微流控芯片电泳在病毒检测方面的检测效果。【结果】共筛选出14对TYLCV备用引物,其中2对引自文献,12对为本文设计,每对引物均可满足微流控芯片检测要求。选择其中1对引物TYLCV-T作为随后的研究对象。利用琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳对DNA标准物检测,结果表明微流控芯片电泳在耗时方面不足琼脂糖凝胶电泳的1/10,约为13 min,试剂消耗为琼脂糖凝胶电泳的1/8,检测灵敏度方面至少比琼脂糖凝胶电泳高103倍,根据DNA标准物原液浓度计算可知,微流控芯片电泳至少可准确检测到浓度为5×10-6 μg?μL-1的核酸样品。利用微流控芯片电泳对TYLCV-T扩增的TYLCV PCR产物进行检测,将检测峰值图与DNA标准物的峰值图时间比较,就可判断出产物峰的大小范围。【结论】筛选出的关于TYLCV的备用引物可作为进一步研究微流控芯片技术在该病毒检测方面的基础;通过将琼脂糖凝胶电泳和微流控芯片电泳进行比较,确立了后者在核酸检测方面的应用价值;通过微流控芯片电泳对TYLCV PCR产物的检测,建立了基于微流控芯片电泳的TYLCV快速检测方法,为TYLCV的快速检测提供新的技术支持。     

用CTAB和SDS法简单快速提取拉曼被孢霉DNA的通用方法

在植物及微生物DNA提取方法的基础上,提出了一种分别用CTAB和SDS试剂简单、快速、安全、优质提取拉曼被孢霉DNA的通用步骤。该方法提取时间短、效率高、产品较纯,通过紫外分光光度计检测和凝胶电泳分析,提取的DNA分子量可达21.2 kb以上,其纯度可直接用于PCR扩增等分子生物学方面的研究。     

用银染方法分析RAPD产物

本文介绍了采用聚丙烯酰胺凝胶分离ＲＡＰＤ产物，以及凝胶银染技术。与传统的溴化乙锭染色法相比，银染法染色灵敏而清晰，具有广泛的推广应用价值。     

我国部分地方鸡种血浆蛋白质(酶)多态性分析

采用垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳和淀粉凝胶电泳法，检测我国12个地方鸡种淀粉酶、酯酶、运铁蛋白及碱性磷酸酶等4种血浆蛋白质(酶)结构基因座的多态性。12个地方鸡种中所测的4个座位均表现出多态。根据检测座位的基因频率，计算群体平均基因杂合度。并用模糊聚类法对所研究的12个地方鸡种进行聚类。结果表明：泰和乌骨鸡和白耳鸡在λ为0．996时首先聚在一起，然后再与狼山鸡、仙居鸡、河南斗鸡、萧山鸡、固始鸡和藏鸡等依次聚为一大类，表明泰和乌骨鸡和白耳鸡有较近的亲缘关系，而北京油鸡与其他鸡种距离较远。