牛基因组DNA两种提取方法的比较研究

研究哺乳动物基因组DNA的水煮抽提法，并将传统的酚仿抽提法和水煮法进行比较，水煮法即通过对细胞的煮沸和冷却，使细胞破裂、蛋白变性，从而获得用于PCR扩增的模板DNA的方法。通过电泳分析和PCR扩增检测了所提取基因组DNA的完整性、可行性。检测时采用3对引物对2种方法提取的DNA进行了PCR扩增，同时对冷冻保存的基因组DNA也进行了扩增检测。结果表明：水煮法提取基因组DNA是一种快速、简便、经济、高效的方法。     

影响荷斯坦奶牛产犊间隔的因素及其研究进展

产犊间隔（calving internal,CI）又称胎间距,即两次产犊间的时间间隔,能够综合反映奶牛发情、配种、妊娠和产犊等繁殖性能,是衡量奶牛繁殖性能的一个重要指标,同时也是影响奶牛产奶量和产犊数量的重要因素,对奶牛养殖经济效益具有直接影响。最新研究显示,适宜产犊间隔与牛群泌乳能力相关,泌乳能力越高,适宜产犊间隔应越长。但是,即使中国规模化牛场产奶量已经有了大幅提升,中国大多数牧场还在追求更短的产犊间隔。为此,作者对影响荷斯坦奶牛产犊间隔的因素及其研究进展进行概述,并简要阐述了产犊间隔对牛场经济效益的影响,以期为中国荷斯坦奶牛养殖确定适宜产犊间隔提供一定的借鉴和理论依据。     

不同冷冻方法对牛体外胚胎ATP含量与ROS水平的影响

【目的】探讨冷冻保存对牛体外生产胚胎能量代谢、有氧代谢造成的影响。【方法】采用常规法或玻璃化法（open pulled straw,OPS法）冷冻保存牛体外受精（in vitro fertilization,IVF）囊胚和体细胞核移植（somatic cell nuclear transfer,SCNT）囊胚,利用ATP Bioluminescence Assay Kit HS II 和 GENMED ROS Assay Kit检测了冷冻-解冻后囊胚ATP含量和ROS水平。【结果】（1）IVF和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后存活率（（93.25±5.17）%和（77.56±3.52）%）均显著高于常规冷冻法（（81.25±4.98）%和（49.41±2.24）%）（P＜0.05）;（2）IVF囊胚和SCNT囊胚OPS法冷冻-解冻后ATP含量（（0.63±0.05）和（0.33±0.02）pmol）均显著高于常规冷冻法（（0.45±0.03）和（0.22±0.01）pmol）（P＜0.05）;但是均显著低于相应的IVF或SCNT新鲜囊胚（（0.76±0.04）和（0.40±0.02）pmol）（P＜0.05）;（3）玻璃化冷冻IVF囊胚、SCNT囊胚ROS水平（（74.34±4.24）和（43.21±3.35）cps）高于新鲜IVF囊胚（（48.52±2.65）cps）、SCNT囊胚（（27.36±2.23）cps）（P＜0.05）,常规冷冻组则与此相反（（35.61±4.32）和（16.56±2.52）cps）（P＜0.05）。【结论】玻璃化冷冻较适用于牛IVF、SCNT囊胚冷冻保存;玻璃化冷冻和常规冷冻均显著影响牛IVF囊胚、SCNT囊胚中ATP含量和ROS水平。     

马-牛无透明带卵异种克隆的研究

 【目的】开展异种克隆,为濒危动物的保护、细胞核重编程与核质互作研究提供新途径。【方法】以马耳成纤维细胞为供体,牛卵母细胞为受体,采用无透明带手工克隆方法构建异种胚胎,比较不同的激活液、培养液、体细胞同期方式、核移植方法对马-牛异种克隆胚胎体外发育的影响。【结果】（1）A23187 + 6-DMAP联合激活获得的克隆胚胎发育较好,囊胚率2.60%;（2）克隆胚胎于mCR1aa中的卵裂率和桑葚率显著高于CR1aa和SOF（83.65%vs 77.49%,74.87%;22.36%vs19.37%,18.98%,P＜0.05）,且发育到囊胚（2.72%）,CR1aa与SOF间无显著差异;（3）供体细胞经血清饥饿或接触抑制处理后,获得的异种克隆胚的融合率、卵裂率、桑葚率和囊胚率无显著差异;（4）无透明带手工克隆法的融合率显著高于显微注射法（90.33% vs 72.94%）,卵裂率、桑葚率和囊胚率无显著差异;（5）马-牛异种克隆胚与牛同种克隆胚比较,融合率和卵裂率无差别,桑葚率和囊胚率有显著差异（21.78%vs63.52%;2.71%vs37.48%）。【结论】牛卵母细胞能支持马体细胞去分化,进行核重编程。但由于二者的物种距离较远,异种克隆胚胎的发育能力远低于同种克隆胚胎。     

哺乳动物胚胎分割技术研究进展

胚胎分割是指将哺乳动物的胚胎采用手术或非手术的方法从子宫或输卵管中取出，人为的利用机械或化学方法将其分割成2个或多个部分，分割后的每个部分在适宜的条件下进行体外培养、移植回受体子宫或输卵管（或不经过培养直接移植），可从1枚胚胎获得2个或多个基因型和表型一致的后代。胚胎分割技术可用于扩增可用的优良胚胎的数目和生产同卵双胎、同卵多胎的克隆动物，可用于濒危动物的保护，也可为早期胚胎遗传疾病的检查和性别鉴定等技术提供一种活体组织检查的方法。作者将介绍胚胎分割的研究进展、技术方法及其相关问题。     

牛活体采集卵母细胞的超声波技术

牛活体采集卵母细胞的超声波技术朱化彬罗应荣（中国农业科学院畜牧研究所北京１０００９４）通过超数排卵技术虽然可以得到比自然发情状态下多的胚胎,但是超数排卵效果很不稳定。近十几年来,卵母细胞体外成熟（ＩＶＭ）,体外受精（ＩＶＦ）以及受精后胚胎的体外培养（...     

热滞蛋白在低温冷冻保存卵母细胞和胚胎中的作用

近来一些短期或长期保存卵母细胞和胚胎的研究结果表明，热滞蛋白或称抗冻蛋白，在低温和超低温下，能与细胞膜相互作用，保护卵母细胞和胚胎，热滞蛋白的这种保护作用与其浓度和种类有关，在玻璃化快速冷冻中，所需ＴＨＰｓ的最低浓度为４０ｍｇ／ｍｌ，而在慢速冷冻或低温短期保存（１－４天）胚胎中，其适宜浓度范围为０．１－１ｍｇ／ｍｌ，所需浓度取决于ＴＨＰｓ的咎类。ＴＨＰｓ与玻璃化液相互作用，稳定玻璃化液；同时也与细     

鲁西黄牛体细胞克隆保种技术的研究

以体外培养的鲁西黄牛耳皮肤成纤维细胞作核供体，研究利用体细胞克隆技术保存我国地方黄牛优良品种的技术方法。通过组织块培养法建立的鲁西黄牛（1♂，4♀）成纤维细胞系，作为核移植供体细胞，利用屠宰场母牛卵巢卵母细胞经体外培养成熟后作为核受体进行核移植，试验结果表明：重构胚的融合率为62．5％（242／387），分裂率为63．6％（154／242），体外培养第7天囊胚发育率为42．9％（66／154）。体外培养第7天的囊胚的内细胞团细胞（ICM）与滋养层细胞数平均为37和47，ICM占44．2％。体外发育到7d的囊胚新鲜胚胎的移植妊娠率（新鲜胚胎）移植受体10头，60d妊娠率为20％（2／10）。