猪繁殖与呼吸综合征病毒辽宁分离株ORF5基因的克隆与序列分析

本试验以辽宁地区某猪场猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)发病猪病料为材料,采用RT-PCR方法特异性扩增编码猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)GP5蛋白的ORF5基因全长cDNA,结果该分离株ORF5基因编码区长603bp,可编码200个氨基酸。与美洲型代表株VR2332、欧洲型代表株LV进行同源性比较,氨基酸同源性分别为89.5%和55.7%。推测该辽宁分离株属于美洲型。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GS株非结构蛋白基因的克隆及测序

根据GenBank中猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)VR-2332毒株基因序列设计合成了9对引物,采用RT-PCR方法对PRRSV GS株的非结构蛋白基因ORF1进行了分子克隆,并对其核苷酸序列及编码氨基酸进行了分析。结果表明:ORF1全长11 882 bp,其中ORF1a核苷酸长7 512bp,编码2 503个氨基酸,ORF1b核苷酸长4 374 bp,编码1 457个氨基酸。PRRSV GS株ORF1基因与VR-2332株ORF1基因核苷酸同源性较高,其中ORF1a为89.3%,ORF1b为90.7%,而与LV株同源性相比较低,其同源性分别为54.3%和60.8%,相对ORF1a来说,ORF1b较为保守。ORF1编码的产物为2个聚合蛋白,ORF1a所编码的聚合蛋白经水解酶切割后产生6个成熟的非结构蛋白(NSP),其中NSP2变异最大,该蛋白具有耐受碱基插入、突变的能力,可能与PRRSV对组织细胞的亲嗜性有关;ORF1b编码的聚合蛋白经蛋白酶切割后,产生4个成熟的非结构蛋白。从系统发生树分析,PRRSV GS株非结构蛋白基因区域在基因型上属于北美洲型。     

PRRSV疫苗的研究进展及前景展望

正猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是单股正链RNA病毒,有囊膜,属于动脉炎病毒科动脉炎病毒属。其基因组中含有10个开放阅读框(ORFs)。ORF1a和ORF1b编码病毒复制所必需的非结构蛋白,ORFs2～7编码结构蛋白[1]。PRRSV有欧洲型和美洲型两个公认的血清型,前者又称血清1型(PRRSV-1),后者又称血清2型(PRRSV-2)。PRRSV主要感染单核巨噬细胞系统的细胞(如猪肺泡巨噬细胞)及其他来源的巨噬细胞。弱毒疫苗I     

反向遗传学在猪繁殖与呼吸综合征病毒研究中的应用

<正>反向遗传学遵循"中心法则",在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体^([1])。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链RNA病毒,基因组约为15 kb,有8个开放阅读框架(ORF),ORF1位于基因组的5′末端,编码病毒非结构蛋白,ORF2([1])。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为单股正链RNA病毒,基因组约为15 kb,有8个开放阅读框架(ORF),ORF1位于基因组的5′末端,编码病毒非结构蛋白,ORF2⁷位于基因组的3′     

河北猪繁殖与呼吸综合征病毒地方株HB-3（cz）株ORF5基因变异分析

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine Reproductive and Respiration Syndrome，PRRS）是近年来新发现的由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的一种猪传染病。PRRSV属套式病毒目动脉炎病毒科成员，基因组全长约15kb，为单股正链RNA病毒，含9个开放阅读框（ORF），其中ORF5编码病毒糖基化囊膜蛋白（E蛋白），E蛋白为PRRSV3个主要结构蛋白之一，参与体液免疫和细胞免疫，具有较高的免疫原性和中和活性。不同国家和地区分离株的ORF5基因差异较大。PRRSV有2种基因型，     

猪繁殖与呼吸综合征病毒M基因研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的严重繁殖障碍和呼吸道疾病。PRRSV为动脉炎病毒属的不分节段的单股正链RNA病毒,含有8个开放阅读框(ORFs),其中ORF6编码的非糖基化膜蛋白(M)为其优势结构蛋白,是PRRSV中较保守的蛋白,具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选基因研究和建立诊断方法。论文阐述了PRRSV M基因的研究进展,并对基于M基因工程疫苗和检测技术等进行综述。     

我国潜在的流行株：NADC34-like PRRSV

正猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,该病毒分为两个基因型(基因1型和2型)。基于ORF5基因的遗传演化分析显示,基因2型PRRSV被划分为9个系,目     

猪繁殖与呼吸综合征病毒JX0708株的分离鉴定及其Nsp2基因的遗传变异分析

采集江西省某猪场疑似猪繁殖与呼吸综合征病料,RT-PCR检测可扩增出PRRSV ORF7特异性片段,序列分析发现其与美洲型毒株序列一致性达93.9%以上,与欧洲型毒株仅为69.8%。将采集的脑和肺脏处理后接种Marc-145细胞盲传,在盲传的细胞中可扩增到PRRSV ORF7特异性片段,传至第6代时出现明显的细胞病变;将该毒株NSP2非结构蛋白基因测序分析,发现其编码的氨基酸与国内近年来分离的高致病性PRRSV毒株有较高的同源性,与美洲型代表株VR-2332相比缺失第482位和533-561位共30个氨基酸;纯化病毒并进行电镜观察,可见典型的PRRSV病毒粒子。第8代的细胞毒回归30日龄仔猪,可观察到猪繁殖与呼吸综合征典型症状和病理变化。这表明已成功地分离到1株美洲型PRRSV变异株,命名为JX0708株。     

广东省猪繁殖与呼吸综合征病毒的限制性片段长度多态性分析

猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）属动脉炎病毒科动脉炎病毒属成员,包含7个开放阅读框（ORFs）,目前有两个血清型,即欧洲型和美洲型,而美洲型毒株又可分为多个亚型。其中ORF1a和ORF1b编码病毒的多聚酶,ORFs2—6编码膜蛋白,ORF7编码病毒的非糖基化核衣壳蛋白。在所有结构蛋白中,GP5被认为是最重要的结构蛋白。GP5或GP5编码的M同源蛋白被认为介导了病毒进入和吸附到靶细胞。除此之外,GP5的中和性抗原决定簇位于其胞外区的中间区域。早期的研究表明,ORF5是PRRSV基因组中功能变异最大的一个区域,其异源性不仅发生在美洲株,欧洲株也证实了其较大的变异。ORF5的遗传多样性与RNA病毒的RNA多聚酶的变异是一致的,且病毒的选择性压力使病毒更能在宿主细胞中扩散。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒与免疫抑制(续)

2 PRRSV 对细胞的影响 2．1 PRRSV 引发的细胞凋亡近来研究发现由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)ORF5编码的糖蛋白 GP5在 cos—1细胞表达时能诱导体外培养的细胞发生细胞凋亡。Sur 等(1997,1998)研究发现     

猪繁殖与呼吸综合征病毒E蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的高度接触性传染病,主要引起母猪繁殖障碍,表现为妊娠后期流产、死胎、木乃伊胎及弱仔。E蛋白是由ORF2b编码的一个非糖基化结构蛋白,分子质量约10 ku,具有影响病毒复制的作用,促使病毒粒子脱壳,但对病毒的装配不起作用,认为具有离子通道蛋白活性。作者就E蛋白的特性、亚细胞定位和拓扑结构、离子通道活性作一综述。     

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒主要结构蛋白基因在持续感染中的遗传变异分析

猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒(PRRSV)属套式病毒目、动脉炎病毒科、动脉炎病毒属的成员.PRRSV基因组全长约15 kb,为不分节段的单股正链RNA病毒,含9个开放阅读框(ORF),每个ORF都和前一个ORF有部分重叠,其中ORF5、ORF6和ORF7编码病毒的主要结构蛋白.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因的变异及其基因工程疫苗研究进展

ORF5基因编码的E蛋白是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的主要结构蛋白,糖基化的囊膜蛋白E蛋白具有良好的免疫原性,能够代替PRRSV诱导机体产生免疫应答,产生保护性中和抗体,是研发基因工程疫苗的优良候选基因之一,在防控PRRS方面有着重要的意义。目前PRRS的流行毒株存在着广泛的变异,尤其是稳定性较差的ORF5基因的变异给PRRSV的检测和防控带来很大的困难。本文就国内外学者对ORF5基因的变异情况以及基于PRRSV ORF5基因在基因工程疫苗方面的研究进展作了综述。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒的分子生物学研究进展

猪繁殖与呼吸综合征是目前养猪业中一种严重的病毒性传染病,引起猪严重繁殖障碍和呼吸道疾病。该病的病原体属于动脉炎病毒属,是一种不分节段的单股正链RNA病毒,含有8 个开放阅读框(ORFs),ORF1 编码非结构蛋白,ORF2~ORF7 编码结构蛋白。其中ORF7 编码的核衣壳(N)蛋白和ORF6编码的非糖基化基质(M)蛋白为优势结构蛋白。猪繁殖与呼吸综合征病毒基因组存在广泛的遗传变异性,M蛋白和N蛋白在所有的毒株之间相对比较保守,可作为血清学诊断的靶抗原。文章就猪繁殖与呼吸综合征病毒在分子生物学方面的研究情况做作一综述。     

中国大陆地区的3.5亚系PRRSV起源于中国台湾地区的3.2亚系

正猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)是引起猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)的病原,该病毒分为两个基因型,以LV株为代表的欧洲型(基因1型)和以VR2332株为代表的美洲型(基因2型)。根据ORF5基因,基因2型PRRSV被划分为9个系,目前,在中国已检测到5个系,包括1,3,5,8和9系。1998年,中国台湾报道首株3系PRRSVMD-001。2004年,中国香港检测到3系PRRSV,并且在遗传进化树上形成了一个独立的分支。2005年,中国大陆检测到的第一株3系PRRSV FJ-1。2010年以后,     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的猪的传染病,对养猪业危害很大.GP5蛋白是PRRSV ORF5基因编码的一个糖基化的囊膜蛋白,具有较好的免疫原性,能够诱导产生中和抗体.因此,GP5蛋白在PRRSV的致病性、诊断、预防与控制等方面研究中具有重要意义,是研制基因工程疫苗的最佳候选基因.近年来对GP5蛋白的研究取得了重要的进展,现就GP5蛋白的特征、免疫作用及疫苗等方面做一综述.     

PRRS弱毒疫苗毒株与野毒株的分子遗传学差异

猪繁殖-呼吸综合征(PRRS)是近年来新发现的一种严重危害养猪业的病毒性传染病,其主要特征是:引起繁殖母猪的生殖障碍与仔猪的呼吸道症状.故命名为猪繁殖-呼吸综合征.该病病原为PRRS病毒(PRRSV),于1991年为荷兰学者Wensvoort等最先分离到.根据其基因组的结构及转录调控机制的特点,将其归于动脉炎病毒科.随后的研究表明,其为一种有囊膜的单股正链RNA病毒,根据病毒的基因组组成特征及抗原性差异,可将其分为两种基因型:即以VR-2332株为代表的北美洲型和以LV株为代表的欧洲型.其基因组的共同特点是,都含有8个开放阅读框架(ORF),其所编码的蛋白也都相同[1].即ORF1(包括ORF1a和ORF1b)编码病毒的复制酶,ORF2～6编码病毒的囊膜蛋白,ORF7则编码高度保守的核衣壳蛋白.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2研究进展

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是目前世界上对养猪业带来重大经济损失的一种传染性疾病,PRRSV是该病病原,一种具有包膜的单股正链RNA病毒,0RF1a,ORF1b编码该病毒非结构蛋白(Nsps)其编码的ORF1a,ORF1 ab两个具有病毒的复制酶和RNA聚合酶功能的多聚蛋白pp1a和pp1b在蛋白水解酶裂解作用下产生至少12个推测的非结构蛋白Nsp1～Nsp12[1].Nsp2作为PRRSV最大的非结构蛋白,具有高变异特性及多种生物学特性且应用广泛,在病毒研究中,Nsp2一直是研究热点,本文就PRRSV的非结构蛋白Nsp2分子生物学特性、免疫学功能及其应用做一简要综述.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒蛋白质研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)是一种折叠的正义RNA病毒,属于动脉炎病毒科(Arteriviridae),尼多病毒目(Nidovirales)。除了动脉炎病毒科,尼多病毒目还包括冠状病毒科(Coronaviruses)。15.1~15.2 kb长的PRRSV基因组通过互相重叠的开放性阅读框编码蛋白质。ORF1a翻译过程中产生pp1a多聚蛋白。ORF1b表达产生了 pp1ab多聚蛋白。pp1a和pp1ab经病毒蛋白酶处理后又生成了14个非结构蛋白。一些非结构蛋白为蛋白酶(NSP1、NSP1β、NSP2和NSP4)、RNA-依赖性RNA聚合酶(NSP9)、解旋酶(NSP10)和核酸内切酶(NSP11)。ORFs2-5编码GP2-GP5,ORF6编码M,ORF7编码N蛋白。ORF2b完全包括在ORF2内,表达小的非糖基化E或2b蛋白。相当一部分的囊膜蛋白是nidoviruses所特有的,所有的结构蛋白都是感染所必需的。     

携带PCV-2 ORF2的感染性PRRSV克隆在Marc-145细胞表达的研究

为解析猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)删除外源基因的机制,以北美株PRRSV感染性克隆pAPRRS为平台进行反向遗传操作,构建在PRRSV全长基因组上同时包含其Nsp2区域缺失108nt及其ORF1与ORF2间插入猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2的全长cDNA pDCPV,将pDCPV转染Marc-145细胞,获得拯救病毒vDCPV。鉴定vDCPV的遗传稳定性发现,vDCPV比先前发表的只在PRRSV ORF1与ORF2间插入PCV-2ORF2获得的拯救病毒vCPV更具有遗传稳定性,这提示PRRSV删除外源序列的最主要机制是插入外源序列后导致基因组过长,由此可能影响N蛋白与基因组作用及其他结构蛋白包装过程。IFA结果显示,vDCPVP能微弱表达PCV-2cap蛋白。