斑点免疫结合试验对蓝氏贾第鞭毛虫感染者粪中特异性抗原的检测

应用蔗糖密度梯度离心技术从蓝氏贾第鞭毛虫感染者的粪便中分离纯化贾第虫包囊，以此包囊免疫家兔，获得免疫血清，经大肠杆茵吸收后建立斑点免疫结合试验，检测粪中贾第虫特异性抗原。以此法检测３９例贾第虫感染者粪便，有３６例出现阳性斑点，阳性检出率为９２．３％。以超声粉碎的贾第虫包囊抗原为标准，３６例阳性标本中，有３５例标本贾第虫特异性抗原蛋白含量分布在３９～６９ｎｇ／ｍＬ范围内，１例为１３８ｎｇ／ｍＬ。     

鸡包涵体肝炎病毒CELOV 株的鉴定研究

采用鸡胚有限稀释法将鸡包涵体肝炎病毒（CELOV）纯化。将纯化的CELOV在SPF鸡胚上连续传10代,对各代次的毒种均进行毒价测定,并选择不同代次进行外源病毒、抗原性等方面的系统鉴定。结果表明,不同代次的病毒毒价稳定,病毒纯净、特异,无外源病毒感染。采用不同代次病毒鸡胚尿囊液制备3批琼脂扩散试验抗原敏感、特异,用原倍、2倍稀释的抗原可以与32倍稀释的阳性血清反应,出现清晰的沉淀线。抗原不与其它病原体的阳性血清反应。用CELOV制备的琼扩抗原可用于鸡包涵体肝炎病毒感染的血清学检测。     

鸡传染性法氏囊病（IBD）琼脂扩散试验（AGP）诊断试剂的研制

用典型发病鸡的法氏囊制备抗原,以免疫鸡卵黄抗体代替阳性对照血清,研制出鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）琼脂扩散试验（ＡＧＰ）诊断试剂,用于检测免疫鸡群的ＩＢＤ抗体,指导疫苗免疫;检测发病鸡群的法氏囊组织ＩＢＤ抗原,达到确诊     

抗禽成骨髓细胞增多症病毒gs抗原家兔免疫血清的制备及其免疫球蛋白的提取

将经吐温-乙醚裂解的禽成骨髓细胞增多症病毒群特异性(gs)抗原皮内和静脉接种于家兔,制备抗血清,再经鸡组织均浆物吸收后,义以铵盐-DEAE纤维素提取IgG。以琼脂扩散反应检测IgG效价为1∶32,经聚丙烯酰胺凝胶电泳证明是单一成分。为应用ELISA检测鸡白血病gs抗原提供了纯化的抗体。     

应用间接ELISA检测鸡痘病毒抗体方法的建立

应用鸡胚成纤维细胞(CEF)扩增鸡痘病毒(Fowlpox virus,FPV)并提纯后作为抗原建立了具有较高特异性和灵敏性的间接ELISA方法.通过方阵滴定法来确定抗原最佳包被浓度为2.7μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1:100,其阳性临界值为OD≥0.113.将400份FPV免疫实验鸡血清用本方法进行检测,其阳性检出率为81.25%(325/400).此外,将该方法与琼脂扩散试验进行比较检测血清样品,结果显示本方法的灵敏度比琼脂扩散试验灵敏400～800倍,而且还有特异性强,操作简便、快速等优点.     

江汉平原—规模化猪场暴发伪狂犬病的调查研究(Ⅲ)——猪伪狂犬病毒HS-9304株的克隆纯化及检定

应用细胞培养病毒蚀斑技术,将分离的伪狂犬病毒(PrV)HS-9304株在鸡胚成纤维细胞(CEF)单层培养上覆以营养琼脂培养基,连续挑斑纯化3次,成功地获得了纯化病毒克隆株.对病毒克隆株在传代细胞上复壮增殖后进行毒价测定.接种试验动物人工造病并进行血清中和试验以及外源性污染的检定.该病毒克隆株对BHK-21细胞感染的滴度为10~(8.5)TClD_50,能使小鼠和家兔出现特异性的症状和死亡,病毒对PrV标准阳性血清的中和效价达到1:195.病毒纯净无外源性污染.     

鸡病毒性关节炎弱毒苗的研制 Ⅱ.弱毒株的免疫原性

应用具有良好安全性的鸡病毒性关节炎病毒（AVAV）弱毒JN-1株免疫1日龄肉鸡40只,分别用琼脂扩散试验、间接ELISA和中和试验（NT）检测免疫鸡血清中的AVAV抗体。中和抗体于免疫后7d开始出现,14d后全部阳转;ELISA抗体也于免疫后7d开始显示阳性,21d后全部阳转;琼脂扩散抗体于免疫后14d开始阳转,28d以后全部显示阳性。分别在免疫后7、14、21和 28d于足掌皮下用强毒攻击免疫鸡,临床保护率分别为2/10、9/10、10/ 10、10/10,病理保护率分别为0/10、7/10、9/10、10/10。体外抗病毒谱试验显示,弱毒株的免疫血清能中和AVAV J-1株、S_(1133)株、FDO株和H_(9307)株。上述实验结果表明,AVAV弱毒株具有良好的免疫原性。     

三种琼脂扩散沉淀试验诊断成年鸡马立克氏病的比较

关于鸡MD特异性诊断,琼脂扩散沉淀试验具有特异性高、方法简单易行等优点。然而以往的研究多局限于实验感染马立克氏病毒的鸡,而用琼脂扩散试验检查生产鸡群的羽囊抗原和血清抗体的报道较少。为此,     

家蚕病毒病早期诊断法的研究——Ⅰ.中肠型脓病病毒的纯化及其免疫化学试验

以凝胶过滤法简易地纯化了中肠型脓病六角形多角体病毒,紫外吸收特性符合纯度标准。将这些纯病毒粒子与佐剂混和,对家兔进行免疫注射,制得了环沉价1.6万的抗血清。通过奥氏双扩散、对流免疫电泳证明抗血清是特异性的。用10微升环沉价256的抗血清,在孔径3毫米,孔间距5毫米的琼脂板上进行对流电泳,能捡出10微升内含0.019微克的病毒粒子。在试验中还发现,这种抗血清与有些病蚕个体的抗原能在奥氏扩散中形成三条沉淀线,其中一条培育4小时即出现。通过电泳分析该抗原为病蚕特有,从扩散率看它的分子量比病毒粒子小,有可能是CPV粒子表面结构以外的其他抗原性物质——尚未装配完成的病毒某前驱体。     

不同方法对鸡胚和法氏囊中囊病病毒抗原含量的检测比较

用单抗介导的抗原捕获－酶联免疫吸附试验（AC－ELISA），琼脂扩散试验（ACP）快速诊断试纸条（ISK）对感染同株强毒或弱毒囊病病毒（IBDV）的鸡胚和鸡法氏囊中的病毒抗原效价进行了检测比较，结果表明，上述3种方法测得法氏囊中温毒IBDV抗原效价分别为10^6.0(AC-ELISA),2^-3.0(AGP)t 10^-3.0，测得鸡胚中强毒IBDV抗原效价依次为10^-1.0,0和0。强毒株接种鸡胚后，只有第1代鸡胚组织可被AC－ELISA测到低效价的IBDV抗原，而第2代以后则未能测到病毒抗原，弱毒疫苗株IBDV感染鸡后，法氏囊中可测到低效价抗原，但感染鸡胚后则无可测性病毒抗原。     

鸡病毒性关节炎琼脂扩散抗原制备方法的比较及应用

将呼肠孤病毒U.Conn.S1133株接种鸡胚和鸡胚成纤维细胞,采用PEG6000浓缩鸡胚尿囊液,饱和硫酸铵沉淀尿囊液和细胞上清液三种方法,制备的抗原均具有良好的特异性和敏感性,适于鸡只个体或鸡群检查。三种抗原在检出率上虽无差异,但细胞上清液制备的抗原在效价、沉淀线的清晰度方面优于其它两种抗原。用琼脂扩散试验对免疫后3周、11周、31周的祖代鸡进行抗体检测,检出率分别为100%、95%、90%,抗体效价最高达1:64。进口种鸡177份血样的检出率为49.2%。调查上海地区12个鸡群,阳性群9个,污染率在3.4%—53.7%。表明上海地区有本病污染。     

广东山东和福建三省鸡卡氏住白细胞虫病流行病学调查

通过免疫脂扩散试验和血液涂片检查,对广东,山东和福建省的２３个鸡场进行了鸡卡氏住白细胞虫病调查。在抽样检查的４２５只鸡中,３１只鸡血液涂片查出该虫体型子或配子体,２９只鸡血清抗体阳性,总检出率为１４．１％,广东,山东,福建省检出率分别为１０．３％,１２．６％和２４．５％,血液涂片检查结果,青年鸡的检出率明显高于成年鸡;免疫琼脂扩散试验检测时,成年鸡的阳性率则显著高于青年鸡。     

鸡大肝和大脾病的流行病学初步调查

对两个鸡场发病鸡群的病理剖检发现，病鸡和死亡鸡肝、脾异常肿大，为正常体积的３￣４倍，肝重为体重的１３．８３％、脾重为体重的１．８７％。病鸡临床上无特异症状。用鸡大肝和大脾病（ＢＬＳ）标准抗原和阳性血清通过琼脂扩散试验对早期发病鸡群进行调查，鸡场Ｉ血清抗体阳性检出率为３／１０，抗原阳性检出率为６／３９；鸡场未查出抗原。证实我国已存在ＢＬＳ病。     

猪IL-10基因的原核表达纯化及功能鉴定

为进一步研究猪IL-10及其生物活性,本研究将猪IL-10基因克隆至原核表达载体p GEX-4T-1,并成功获得其重组蛋白。用IPTG诱导重组蛋白表达,通过GST-亲和柱层析对重组蛋白进行纯化,将纯化的重组蛋白处理猪肺泡巨噬细胞,显著抑制PRRSV感染诱导的IL-12表达,将重组蛋白免疫家兔以制备抗血清,然后利用双向琼脂扩散方法、Western Blot试验对抗血清效价、特异性等生物活性进行了检测。结果表明,该抗血清具有较高的抗体效价和很好的特异性,可以作为IL-10特异性抗体用于今后的试验研究。     

兔出血症病毒VP60蛋白的原核表达及检测方法初步应用

VP60是免出血症病毒（RHDV）的主要结构蛋白，也是免疫原性蛋白，与诱导抗病毒免疫反应直接相关，因而也是检测用首选抗原。本实验在原核系统pPRoEX^TMHTa中表达了VP60基因，经SDS—PAGE电泳中可见表达带。Western blot鉴定结果表明，重组蛋白可被RHD阳性血清特异性识别，具有相应的抗原性。将表达蛋白经SDS—PAGE电泳切胶纯化后免疫BALB／c小鼠，免疫血清经全病毒ELISA检测，效价可达1：3200-1：6400，经琼脂扩散试验检测效价为1：16。重组蛋白纯化、复性后，作为包被抗原初步建立了间接ELISA方法，并检测了48份免血清样品，与全病毒间接ELSIA试剂盒检测结果相同。实验结果表明．用原核系统表达的VP60蛋白．可以作为RHD新型诊断试剂的候选抗原。     

用琼脂扩散试验检测鸡呼肠孤病毒抗体

本试验建立了用免疫琼脂扩散试验(AGP)检测鸡呼肠孤病毒(CRV)抗体的方法,并对南京某鸡场鸡群CRV抗体的分布进行了调查,结果表明该鸡场CRV抗体检出率高达51.8%,其中祖代鸡与父母代种鸡的阳性率均为100%,而雏鸡为0,其余鸡介于两者之间。试验结果显示AGP不适宜于检查低滴度的抗体,但作为检测鸡群的群抗体水平是易于推广应用的。     

应用琼脂扩散试验诊断禽脑脊髓炎的研究

应用琼脂扩散试验证明,制备的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗原具有良好的抗原特异性。人工感染AEV后10天的鸡血清,100％呈现阳性反应。感染后120天,抗体效价仍可达到1∶64。该抗原与鸡支气管炎、新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎及腺病毒等感染鸡的血清均不发生交叉反应。     

纸膜免疫金银染色诊断马立克氏病的研究

本研究建立的纸膜免疫金银染色法(P-IGSS)诊断马立克氏病(MD),既可检测抗原,又可检测抗体.检测抗原的灵敏度为0.39μg/点,检测抗体的灵敏度为1.4μg/点.P-IGSS 和琼脂扩散试验(AGP)对抗体检出率分别为42.44%和37.78%,对羽髓抗原检出率分别为96.67%和90%.与9种鸡传染病阳性血清和3种鸡传染病抗原不发生交叉反应.     

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体

以纯化的禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条（immunochromatographic strip, ICS）。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验（AGP）。特异性试验证实，禽流感的ICS试验与新城疫（ND）、传染性支气管炎（IBV）、鸡传染性法氏囊病（IBD）及减蛋综合症（EDS-76）均无交叉反应。同时，用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，两者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。     

应用琼脂扩散试验检查鸡霍乱的试验报告

应用超声波裂解器将培养的禽霍乱菌裂解,制成禽霍乱琼脂扩散抗原,对键康鸡检出率为0/150,弱毒菌苗免疫鸡为42/42,强毒灭活苗免疫鸡为20/20,人工感染耐过鸡为39/39;对鸡新城疫、喉气管炎等8种病鸡的血清均为阴性反应,对鸡,猪和兔源不同菌株感染鸡的血清均发生交叉反应。结果证明,用本法制备的琼扩抗原具有较高的特异性和敏感性。