凋亡素研究进展

凋亡素(apoptin)是一种新近发现的可引起细胞发生凋亡的病毒蛋白.它是由鸡贫血病病毒基因组编码的一个大小约14kD的蛋白(VP3),由121个氨基酸组成,含2个富含脯氨酸的延伸区和核定位及核输出的基本氨基酸序列与信号;现有的研究表明,凋亡素与任何已知的病毒或细胞内多肽无序列同源性[1].由于其引起细胞凋亡的方式不同于已知的其它凋亡基因如:Bcl-2,p53等,因而已受到越来越广泛的关注.现就近年来对该凋亡素的研究作一综述.     

含鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因重组火鸡疱疹病毒的构建

采用PCR方法，以传染性贫血病毒(CIAV)DNA为模板，扩增并克隆了CIAV的VP1、VP2基因，并进行了序列分析。经基因修饰，将这两个基因分别加上表达元件后连接作为目的基因。通过同源重组技术，将目的基因插入到火鸡疱疹病毒(HVT)gC基因区，构建了一株含CIAV VP1、VP2基因表达单元的重组HVT(VP1VP2-rHVT)：体内、体外传代结果表明该重组病毒性状稳定。采用PCR扩增及Southem blot杂交检测，证实了CIAV VP1、VP2基因的插入。     

鸡马立克氏病DNA疫苗免疫的初步研究

扩增含MDV主要免疫基因(gB基因)的puc19质粒并制成DNA疫苗,分别以200μg和500μg总剂量肌注免疫雏鸡,1日龄和8日龄各免疫接种一次,第二次免疫后一周,进行强毒攻击。试验期间,对死亡鸡记录并剖检。试验期结束时(99日龄),所有存活鸡全部迫杀剖检。结果显示,空白质粒对照组鸡的MD阳性率分别为84.62％(11/13),两组试验组鸡分别为15.38％(2/13)和23.08％,(3/13)。试验初步证明,MD DNA疫苗有明显的免疫保护作用。     

反转录PCR扩增鸡传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因

以两个人工合成引物进行聚合酶链(PCR)反应,成功地扩增了鸡传染性支气管炎病毒(IBV)核衣壳蛋白基因(N)。PCR 扩增的模板 DNA 分别为含有 IBV N 基因cDNA 的重组质粒和病毒基因组 RNA 反转录产物.PCR扩增产物的大小与预期的相同,同时核酸序列分析的结果也与已发表的序列一致.     

鸡传染性贫血病毒VP1、VP2基因在杆状病毒表达系统中的表达

将鸡传染性贫血病毒M9905株VP1、VP2基因分别或同时克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDUAL中，然后转化到DHIOBAC感受态细胞中与Bacmid杆状病毒穿梭载体进行转座重组，最后将重组子转染Sf9昆虫细胞，得到分别或同时含VP1、VP2基因的重组杆状病毒rBacVP1、rBacVP2及rBacVP1—2。PCR扩增结果证实VP1、VP2基因重组到杆状病毒基因组中；SDS-PAGE电泳分析和间接免疫荧光试验结果表明VP1、VP2基因在重组病毒中得到了表达。     

鸡传染性喉气管炎病毒TaqMan real-time PCR检测方法的建立

为建立鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)TaqMan Real-time PCR检测方法,本研究根据GenBank中登录的ILTV gB基因序列设计了2对引物与一条特异性TaqMan探针,通过对反应体系和反应条件的优化,特异性、敏感性以及重复性试验,证明该方法在核酸含量108拷贝/μL～101拷贝/μL范围内具有良好的线性关系;能够检测初始模板中10-3EID50的病毒核酸及16拷贝的标准品;与其它相关的鸡源病毒均无交叉反应,并且批内、批间变异系数均小于2%,具有良好的重复性。该检测方法的建立为ILTV的临床检测和定量分析提供了一种快速、准确的技术手段。     

鸡马立克氏病疫苗和新城疫疫苗联合接种的免疫试验

使用马立克氏病(MD)二价苗或火鸡疱疹病毒苗(HVT)与新城疫(ND)疫苗联合免疫肉鸡和蛋鸡,MD二价苗与ND苗联合免疫组对MD的免疫力离于HVT与ND联合免疫组。各组对ND的免疫力与单独用ND苗免疫比较,没有明显差异。MD二价苗和ND死、活苗联合接种肉鸡,对ND可获终生保护,对MD保护率亦高于HVT免疫组。     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因重组火鸡疱疹病毒的构建

为构建表达禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的重组疱疹病毒(HVT),本研究将AIV A/Goose/Guangdong/3/96(H5N1)的HA基因克隆于真核表达质粒中,构建了转移载体pUAB-gpt-HA。通过同源重组及霉酚酸筛选技术,将HA基因表达盒插入到HVT US10基因区,构建了一株表达H5亚型AIV HA基因的重组病毒HVT(rHVT-US10-HA)。经PCR、间接免疫荧光、western blot及红细胞凝集试验鉴定,重组病毒能稳定表达具有生物学活性的HA蛋白。rHVT-US10-HA的构建为禽流感基因工程病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。