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多重PCR技术具体指的是一种分子诊断技术,通过该技术的应用可以在同一个反应体系中在同一时间内进行多个目的片段的扩增,具备有特异,敏感,快捷等众多优势,非常适合在大量的临床样本中展开快速检测.本文讲述了多重PCR技术的一些技术原理,以及进猪病检测中多重PCR技术的具体应用进行了分析. 相似文献
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多重荧光定量PCR技术可以利用一次反应,同时检测、鉴别出多种病原体,在临床混合感染的诊断上具有独特优势和很高的实用价值。与实时荧光定量PCR技术结合,可以定量拷贝数、省去PCR后处理,减少交叉污染,整个检测过程耗时短、准确、高效、特异。因此本文对多重荧光定量PCR技术的分类及各种方法的优缺点做了简要概述,并对近年来多重荧光定量PCR在动物中的应用概况及其研究进展,如在动物性食品卫生中的应用、细菌病诊断、病毒病诊断、饲料中动物源性成分的检测、抗性基因检测及肿瘤早期诊断等有关方面进行概述,旨在为该技术的进一步开发应用提供理论参考。 相似文献
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核酸检测技术是目前动物疫病诊断和食品安全监测的重要手段。多重核酸检测技术可同时检测多种病原,具有通量高、损耗低的优势,在疫病诊断和食品安全监测等领域的应用越来越广泛。目前已研发出多种多重核酸检测技术,包括聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)多病原核酸检测技术、环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)多病原核酸检测技术、生物芯片多病原核酸检测技术、高通量测序多病原核酸检测技术等。由于检测原理不同,不同方法之间的检测性能存在较大差异。本文通过概述基于PCR/RT-PCR、LAMP/RT-LAMP、生物芯片、高通量测序建立的多重核酸检测技术,全面分析其在动物疫病诊断和食品安全监测领域中的特点和具体应用策略,以期推进病原检测技术的创新和发展,为动物疫病诊断及食品安全监测提供技术支持。 相似文献
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动物产品中牛、羊源性成分多重PCR检测方法的建立 总被引:16,自引:2,他引:14
以肉骨粉、鱼粉、猪肉干和鱼肉干为研究对象,异硫氰酸胍法提取总DNA,18S rDNA片段的扩增结果表明提取到的DNA中不存在抑制PCR的物质。应用梯度PCR技术对牛、羊源性成分检测的退火温度进行了优化,在单一PCR检测技术的基础上分别进行了18S rDNA片段和牛、羊源性成分的多重PCR分析,得到了预期的结果。试验表明,本文建立的多重PCR方法具有快速、简便、准确等特点,对动物产品牛、羊源性成分检测具有重要意义。 相似文献
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肠毒素大肠杆菌((Ent erot oxi geni c E.col i,ETEC)是引起犊牛腹泻的主要病原之一。本试验建立了多重PCR检测ETEC毒力因子F41菌毛、K99菌毛和STa、LT肠毒素相关基因的技术方法。试验对影响PCR扩增的dNTP、引物浓度以及退火温度等因素进行优化,确定了多重PCR的特异性和灵敏性。结果表明:所建立的多重PCR方法快速、特异、灵敏,在2.5h-3h内就可以完成,为致犊牛腹泻肠毒素大肠杆菌的快速准确检测提供另一种选择。 相似文献
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多重PCR检测猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪流感病毒 总被引:12,自引:4,他引:8
应用Primer3.0和Omega2.0,根据猪伪狂犬病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪流感病毒(SIV)保守基因设计了3对多重PCR引物,建立PRRSV,SIV和PRV单项PCR检测方法,并在优化单项PCR反应条件(引物浓度、Mg2 浓度、退火温度等)基础上,初步建立了PRRSV-PRV-SIV多重PCR检测方法,并分别用多重PCR和单项PCR/RT-PCR检测10份临床病料,两者符合率为96.6%,表明该多重PCR检测方法有较高的敏感度,可以用于临床病料的检测。 相似文献
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PCR在畜禽疫病诊断上的应用及研究进展 总被引:4,自引:0,他引:4
PCR技术是一门非常实用的分子生物学新技术。其特点在于敏感性强、特异性高。它在兽医临床诊断中尤其适用于那些培养困难和抗原性复杂的细菌的检测鉴定 ;诊断在基因上具有同源相似性的多重病毒感染 ;并应用于研究支原体 ,螺旋体等其它致病微生物引起的疾病。PCR技术敏感性极高 ,因此在实际操作中容易出现假阳性现象 ,同时存在产物不易纯化 ,操作步骤繁琐、耗时较多等缺陷 ,针对这些问题 ,最近出现了固相 PCR、PCR-EL ISA液相杂交技术、实时 Taq Man-PCR技术、PCR基因芯片、DNA芯片 ,这些 PCR技术新的进展有效的克服了 PCR技术的不足。随着研究的深入 ,未来PCR技术将会作为实验室常规的检测技术广泛应用于诊断病原、肿瘤细胞监测、基因表达、遗传病检测 相似文献
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《上海畜牧兽医通讯》2017,(5)
根据GenBank中猪细小病毒(PPV)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒2型(PCV2)3种病原体的基因保守序列,分别设计了3对检测引物。在建立各病毒单项PCR技术的基础上,用这3对引物对人为混合的样品中的PPV、PRV和PCV2的DNA模板进行多重PCR扩增和多重PCR反应条件的优化,结果同时得到3条与试验设计相符的251bp(PPV)、375bp(PRV)和493bp(PCV2)特异性条带。对20份自然感染病猪样品的检测结果表明,该多重PCR检测结果与单项PCR检测对比检测试验的符合率为100%,表明建立的多重PCR检测方法具有特异、快速、准确的特点,可同时鉴别诊断这3种病毒。 相似文献
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为了检验多重PCR技术在沙门菌毒力鉴定中的临床应用效果,评价沙门菌在陕西关中地区的流行情况,从该地区多家养殖场分离获得19株细菌,分别利用生化试验与小鼠攻毒试验和多重PCR技术鉴定和检验了沙门菌及其毒力。结果表明,多重PCR技术对分离沙门菌的鉴定结果和生化试验鉴定结果一致,符合率达100%;毒力质粒携带情况与小鼠攻毒结果一致;同时鉴定出陕西省多家养殖场中存在携带毒力基因菌株,值得关注其对畜禽养殖的潜在威胁。多重PCR技术能够快速、简便、灵敏度高和特异性强的鉴定沙门菌,并可鉴定出其毒力,可以用于致病性沙门菌的流行病学检测,值得在兽医临床和畜产品沙门菌污染的检测中推广应用。 相似文献
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根据GenBank中已发表的猪细小病毒(porcine parvovirus,PPV)、猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)和猪圆环病毒2型 (porcine circovirus type 2,PCV2)基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PPV 的VP2、PRV的 gD、和PCV2的ORF2基因为各病毒的诊断靶序列,设计特异性引物,在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了3种病毒的多重PCR技术,可同时扩增PPV 313 bp、 PRV 217 bp和PCV2 447 bp的特异性片段。用多重PCR技术与单项PCR技术对比检测试验证明两者的符合率为100%,表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可同时鉴别诊断这3种病毒。从10个发病猪场和门诊病例的病猪采集的211份样品,用建立的多重PCR检测方法,检出PPV阳性42份,阳性率为19.91%;PRV阳性26份,阳性率为12.32%;PCV2阳性56份,阳性率为26.54%;2种以上病毒混合感染25份,混合感染阳性率为11.85%。检测结果表明,山西省猪群已感染这3种疫病。 相似文献
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多重PCR/RT—PCR技术检测PRRSV、PPV、PRV和PCV-2 总被引:2,自引:1,他引:1
根椐GenBank中已发表的猪蓝耳病毒(PRRSV)、猪细小病毒(PPV)、伪狂犬病毒(PRV)和猪圆环病毒Ⅱ型(PCV-2)等4种病毒基因序列,对各病毒基因区进行同源性分析,确定PRRSV M和N、PPV VP2、PRV gD、PCV-2ORF2基因的保守区为各病毒的诊断靶序列.在建立各病毒单项PCR技术的基础上,优化多重PCR反应条件,建立了4种病毒的四重PCR技术,可同时扩增PRRSV的660 bp(北美株),PPV的313 bp,PRV的217 bp,PCV-2的447 bp的特异性片段.用82份临床病料对本研究多重PCR技术和单项PCR/RT-PCR技术进行对比验证,结果显示,两者的总符合率为93%以上.表明建立的多重PCR检测方法,具有特异、快速、准确的特点,可用于对这4种病毒的同时检测和鉴别诊断. 相似文献
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多重PCR方法检测锦鲤疱疹病毒基因 总被引:1,自引:0,他引:1
根据对已报道的PCR检测方法灵敏性评价,以常用KHV病毒PCR检测的目的基因KHVSphI片段(AY568590)、KHV5/9(AF411803)和KHVTK基因(AJ535112)作为靶基因,设计并选择3对特异性引物建立的多重PCR检测体系用于KHV病毒多基因的检测。本研究建立的多重PCR体系具有较高的特异性,能够特异性扩增出KHVSphI片段290bp、KHV5/9片段484bp和KHVTK基因片段409bp,对锦鲤和鲤鱼的另外一种病毒性病原鲤春毒血症病毒检测结果为阴性。多重KHV病毒PCR体系检测KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段单一模板的检测下限分别为:10fg、100fg和100fg,在相同模板浓度的情况下,KHVSphI、KHV5/9和KHVTK基因片段同时被检出的检测下限为100fg。对KHV病毒感染组织的检测结果表明,多重KHV病毒PCR检测结果与常规PCR检测结果基本吻合,在多重PCR检测体系中KHVTK基因片段检测的灵敏度高于检验检疫行业标准方法。结果表明,多重KHV病毒PCR检测方法能够快速、准确和灵敏地检测KHV病毒基因。 相似文献
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本研究旨在建立多重Real-time PCR方法检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪圆环病毒2型(PCV2)、猪伪狂犬病毒(PRV)和猪细小病毒(PPV).根据GenBank数据库中PRRSV、PCV2、PRV、和PPV的核苷酸序列设计特异性引物和探针,通过优化反应条件,检测系列稀释的纯化阳性质粒,建立检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的单项和多重Real-time PCR方法.灵敏度和特异性试验结果表明,无论是单项和多重Real-time PCR检测,该方法都具有高度特异性,与其它病原检测无明显交叉反应;对4种病毒的最低检测量为<101拷贝或1 TCID50,检测灵敏度比常规PCR高100倍.对40份临床样本进行检测,多重Real-time PCR检测结果和单项Real-time PCR检测结果完全一致.建立的同时检测PRRSV、PCV2、PRV和PPV的多重Real-time PCR方法具有快速、灵敏、特异、重复性好和能对样品进行定量检测等优点. 相似文献
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