环介导恒温扩增技术在动物病原检测中的应用

环介导恒温扩增技术(LAMP)是一种新型核酸扩增技术,是依赖于靶目标上6个区域的4条引物和一种具有链置换活性的DNA聚合酶Bst的作用,在60 ℃～65 ℃恒温条件下1 h之内即可完成的基因扩增技术.该技术虽然起步较晚,但发展迅速,目前在很多领域的研究和应用已经取得很大进展.论文从技术原理、引物设计、反应机制和特点等方面了介绍了环介导恒温扩增技术,并就该技术在动物细菌性病原微生物、病毒和寄生虫检测中的应用做了介绍.     

非典型牛海绵状脑病研究进展

非典型牛海绵状脑病为新发现的一种朊病毒病,通常发生于老牛,与典型牛海绵状脑病在病理表型、分子表型和生物表型方面不同。本文结合已发表的文献,对非典型牛海绵状脑病的发现、病原特性、流行病学、检测、发病机理、动物模型研究和实验感染等方面的最新研究进展进行了概述,以期增强人们对该病的认识,并为我国防控该病提供借鉴。     

我国地方品种牛PrPc基因序列多态性分析

牛海绵状脑病(BSE)俗称疯牛病,自1985年首次在英国发现以来,其研究就受到世界各国的高度重视[1]。BSE病原是一种朊病毒,与羊痒病(Scraipe)、人新型变异型克雅氏症(vC JD)、鹿慢性消耗性疾病(CW D)相同,是一种神经退化性疾病,引起患病动物的意识障碍和运动功能衰退直至死亡[1~3]     

在前临床期检测金仓鼠羊痒病淋巴结中病理型朊蛋白PrP（Sc）

12只雌性5周龄金仓鼠腹腔注射50μL羊痒病（SCRAPIE）263K株10%的脑组织匀浆。在临床前期,感染后第2、4、6、8、10、12周和临床末期第20周,金仓鼠被分别处死,取大脑、淋巴组织、脾脏、肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织,进行蛋白质免疫印迹杂交实验检测朊病毒病理型朊蛋白PrPSc。研究结果显示在临床前期,通过改进后的纯化技术,我们能够检测出淋巴组织和脾脏组织中的PrPSc,但是在肾脏、肝脏、心脏和肌肉等组织中仍然没有检测到PrPSc。     

牛朊蛋白和酵母朊毒体结构域融合蛋白的原核表达及其单克隆抗体的制备

利用DNA重组技术将酵母Ure2p朊蛋白结构域(UPD)基因插入牛朊蛋白(BPrP)表达质粒pET-PrP中,构建原核表达载体pET-PrP-UPD.阳性质粒转化宿主菌BL21 (DE3),在IPTG诱导下获得高效表达.Westernblot检测表明表达的重组蛋白与单克隆抗体6H4呈现特异性反应,且纯化的PrP-UPD融合蛋白在体外具有聚集成淀粉样纤维、抵抗蛋白酶K消化等朊毒体的结构特点.利用纯化的PrP-UPD免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经克隆和筛选,获得3株稳定分泌抗重组PrP单抗的杂交瘤细胞,分别命名为1G3、3A4、4D1,其中1G3分泌的单抗能识别细胞型牛朊蛋白,其Ig亚类为IgG2b,腹水ELISA效价为1×105,Western blot表明该单抗具有较强的特异性.     

多种动物共患传染病诊断的国家标准、行业标准与国际标准的比较及适用性评估

<正>1前言OIE的诊断标准体系完善、内容科学,有分布于全球150多个参考实验室作为技术后盾,这些诊断技术代表了全世界兽医工作的最高水平,科学性、实用性和先进性都很强,是世界各国在兽医技术能力建设上所参照的国际标准。     

饲料中牛羊源性成分PCR方法定性检测能力验证计划的实施和结果研究

"饲料中牛羊源性成分PCR方法定性检测"是由国家认证认可监督管理委员会(CNCA)组织的A类能力验证计划.通过对本次能力验证计划的实施和对结果的分析研究,了解了国内饲料中牛羊源性成分PCR检测领域的整体水平以及各实验室在检测中存在的差异.     

口蹄疫和水疱性口炎检测方法研究进展

口蹄疫(Foot-and-mouth disease,FMD)与水疱性口炎(Vesicular stomatitis,VS)在临床症状上十分相似,无法通过临床诊断进行区分,因此用实验室方法对两种疾病进行鉴别诊断和病毒分型就变得十分重要。此外,动物可能由于易感性较低或者获得部分免疫导致无症状或症状不明显,因此需要建立多种检测方法以对临床病例进行确诊,鉴别感染后康复动物以及无明显临床症状的病例。     

牛肉中疯牛病特殊风险物质荧光RT-PCR检测方法的建立

本研究建立了检测牛肉中疯牛病特殊风险物质（主要是中枢神经组织）标记物GFAP mRNA的荧光RT-PCR检测技术。试验结果表明：该技术具有良好的种属特异性和组织特异性，只能从牛源和羊源的中枢神经组织中检测到GFAP，猪源和禽源检测结果为阴性，而且只有脑和脊髓等中枢神经组织产生阳性反应，其他内脏组织以及不同部位牛肉检测结果均为阴性；敏感性检测结果表明，该方法最低检测限达到0.001%以下；稳定性试验结果表明，100°C 加热处理30min对检测结果无明显影响，中枢神经组织在30°C以上室温可以稳定存放4天， 在4°C可以稳定冷藏2周，检测结果仍然为阳性。该结果显示，所建立的荧光RT-PCR技术用于牛肉中疯牛病特殊风险物质的检测具有特异性强、敏感性高、稳定性好及快速方便等优点，适合于在日常检测工作中推广使用。     

金黄地鼠羊瘙痒病病理性朊蛋白标准物质的研制

选择25只羊痒病金黄地鼠标准毒株GSH263K临床末期的脑组织,经一系列离心洗涤纯化和蛋白酶K处理,获得高纯度的病理性朊蛋白。高纯度的病理性朊蛋白经80%甲酸灭活处理和真空离心干燥制备为待检标准物质,待检标准物质均匀性检验和稳定性检验其结果符合国家标准物质技术规范的要求。