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小鼠腔前卵泡卵母细胞的采集和体外成熟 总被引:4,自引:0,他引:4
酶消化配合机械分离,采集10日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞-颗粒细胞复合体(OGCs),以自制的胶原膜为底物,在MEM培养液中培养10d,卵母细胞-颗粒细胞复合体由110.5±18.6μm增长到184.4±60.6μm,卵母细胞由56.25±2.0μm增长到82.0±10.5μm.36.7%的OGCs具有5层以上颗粒细胞,其中9.1%放出第一极体。 相似文献
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酶消化配合机械分离,采集10日龄小鼠腔前卵泡中的卵母细胞一颗粒细胞复合作(OGCs),以自制的胶原膜为底物,在 MEM培养液中培养 10 d.卵母细胞-颗粒细胞复合体由 110. 5±18. 6 μm增长到 184.4±60. 6 μm,卵母细胞由 56. 25±2. 0 μm增长到 82. 0±10. 5μm.36.7%的OGC.具有5层以上颗粒细胞,其中9.1%放出第一极体。 相似文献
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牛卵母细胞体外成熟及体外受精的研究 总被引:19,自引:0,他引:19
本研究分析了卵巢不同性周期阶段(卵泡期、黄体期)、外源激素(FSH、LH、雌激素)和不同卵泡液浓度(10%,20%,30%)对卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,卵巢的不同性周期阶段对卵母细胞体外成熟的影响不大(639%和587%);成熟培养基中添加FSH(10mg/L),LH(5mg/L)和同时添加LH、雌二醇(1mg/L),可以促进卵母细胞的体外成熟,成熟率分别为630%,640%,691%;卵泡液(10%,20%,30%)代替血清,其成熟率分别为507%,576%,519%,20%bFF效果最好。本研究对精子的两种处理方法进行了比较,发现在相同精子密度条件下(1×106~2×106个/mL),Percol液处理精子的受精率(471%)显著低于上浮法处理精子的受精率(571%)(P<005)。 相似文献
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重组牛生长激素对山羊卵泡卵母细胞体外成熟的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
将307枚A、B级卵丘-卵母细胞复合体(COC)分别培养于:改良TCM199+FSH(10μg/ml)+LH(20μg/ml)+20%NCS(A液)、A液+重组牛生长激素(rbGH)15ng/ml、改良TCM199+hCG(20μg/ml)+rbGH+20%NCS三种培养基中,获得531%、679%和635%的成熟率。结果表明,rbGH对山羊卵泡卵母细胞的体外成熟是有益的。 相似文献
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猪卵母细胞的体外成熟 总被引:5,自引:0,他引:5
取自猪卵巢含卵丘细胞且胞质均匀的,胞质不均匀和不含卵丘细胞质均匀3类卵母细胞,台盘蓝染色的存活率分别为100%,10%和40%,3差异极显。A,B,C,D4种培养液养的成熟率分别为16.2%,61.5%,55.2%,41.5%,差异极显。E,CF3种培养液培养的成熟率分别为35.5%,47.8%,52.6%,在E培养液中加入PMSG和E2能显地提高成熟率。C液与卵泡液(加入2×10^-^6 相似文献
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三实验应用组织切片法探讨了体内正常生理条件下昆明白小鼠卵巢内卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系。初情期前小鼠注射孕马血清促性腺激素,48h后注射人绒毛膜促性腺激素,于注射HCG后不同时间取出卵巢进行组织切片。注射HCG后1h,卵丘细胞开始扩展,此时卵母细胞核膜完整,即未发生生发泡破裂;注射HCG后3h,大部分大有腔卵泡中卵母细胞发生GVBD,此时卵丘处于2级扩展状态。卵丘完全扩展发生在注射HCG后9h, 相似文献
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为了探寻胚胎移植中所需卵母细胞的来源途径,对不同龄小鼠腔前卵泡进行了分离采集,比较了腔前卵泡的不同分离方法,并对其进行了体外培养。结果表明,2-4mg/mL胶原酶的处理有利于腔前卵泡的分离,且对卵泡早期培养无不利影响;10日龄至1年龄小鼠的腔前卵泡,具有相同的体外生长发育与成熟的能力。 相似文献
9.
小鼠腔前卵泡体外发育和体外排卵的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
为探明小鼠腔前卵泡体外发育及体外排卵的特征和规律性 ,为利用卵巢资源奠定基础 ,采用机械方法分离未成熟小鼠腔前卵泡进行体外培养 .以 α- MEM加亚硒酸钠、维生素 C,L-谷氨酰胺、丙酮酸钠为基础培养液 ,分组添加 10 %的 2种不同来源的血清和 1μg/ m L FSH.在多卵泡培养体系中 ,培养 9~ 10 d,每天观察其体外发育情况 ,测定卵泡和卵母细胞大小 .培养结束时 ,用 h CG进行体外诱导排卵 .结果表明 :体外培养过程中 ,腔前卵泡贴附培养皿底 ,相互聚集粘附形成团状结构 ,在细胞铺层微滴培养中 ,卵泡呈单个生长 ,并发育形成卵泡腔或腔样结构 ;经9d体外培养 ,小鼠腔前卵泡达到排卵前大小 (>40 0 μm) ,卵母细胞从开始时的 5 3.2 μm生长到 6 8.0~ 70 .8μm,总存活率为 6 1.0 % ;卵母细胞的大小及存活率在不同的血清添加组间差异不显著 ;用 h CG可诱导体外排卵 ,发生卵泡破裂 ,卵母细胞排出 ,卵丘细胞扩展 ,卵母细胞生化泡破裂 ,放出第一极体 .总排卵率达 5 9.5 % .因此 ,采用多卵泡培养体系 ,小鼠腔前卵泡能够发育至成熟排卵 . 相似文献
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【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。 相似文献
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雌性生殖细胞印迹的获得发生于小鼠的卵子发生过程中,本研究以颗粒细胞分化前后的卵泡卵母细胞为研究对象,利用重亚硫酸盐测序法,对卵泡腔形成前后的卵母细胞中Igf2r和Peg3两个印迹基因的甲基化状况进行了分析。颗粒细胞分化前,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为80.67%和82.78%;颗粒细胞分化后的早期有腔卵泡卵母细胞中,卵母细胞Igf2r和Peg3两个印迹基因DMR区CpG位点的甲基化比率分别为82%和83.89%。可见,卵泡腔的形成对于直径相同的卵泡卵母细胞印迹基因甲基化的建立没有影响。 相似文献
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添加物对小鼠腔前卵泡体外培养的影响 总被引:1,自引:0,他引:1
为探讨培养添加物对小鼠腔前卵泡生长成熟的影响,在培养液中分别加入不同体积分数的犊牛血清(FCS),牛卵泡液或添加促性腺激素,对小鼠腔前卵泡进行了培养。结果表明,5%以上犊牛血清明显提高腔前卵泡存活率,而10%以上犊牛血清能明显促进卵泡的生长发育,20%以上牛卵泡液可抑制卵母细胞的体外自发成熟分裂,并能促进腔前卵泡的生长发育,在不含犊牛血清的培养液中加入促卵泡素(FSH),促黄体素(LH)或FSH+ 相似文献
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山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育的超微结构研究 总被引:5,自引:0,他引:5
电镜研究表明,山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养7d时,其超微结构基本与发育速度一致。在培养后期(16d),卵母细胞的超微结构表现了不同的发育阶段,试验中观察到GVBD期,核膜开始部分消失的现象,并记录到1枚成熟卵子老化后的结构特征。但大多数卵母细胞培养结束时,未观察到CGs质膜下的排列现象,有的卵母细胞线粒体仍为椭园形,板状嵴,细胞器迁移不完全正常。推测该时期有的卵母细胞部分代谢机能失调,从而导致某些合成(如CGs)障碍或某些细胞器的迁移发生障碍。因此,培养后期可能是影响卵母细胞成熟的关键时期。 相似文献
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卵泡大小及卵泡液对牛卵母细胞体外受精后发育的影响 总被引:6,自引:2,他引:6
以屠宰场牛卵巢为材料,研究了卵泡大小和卵泡液对牛卵母细胞体外成熟、受精和培养后发育潜力的影响。试验1:按照卵泡大小将卵丘卵母细胞复合体(COCs)分为4个试验组:>8 mm组、2~8 mm组、腔前卵泡(PF)卵母细胞组和混合(将前3种卵母细胞混合)组。结果表明,卵泡大小直接影响卵母细胞受精后的发育,同时,源自不同大小卵泡的卵母细胞混合培养,可以促进未成熟的腔前卵泡内卵母细胞的发育。试验2:将源自优势卵泡(>8 mm)、小卵泡(2~8 mm)和混合(所有卵泡液混合)的牛卵泡液(BFF),按照10%添加到成熟培养液中,3个试验组的卵裂率和囊胚率均高于没有添加BFF的对照组(P<0.05),但添加10%的优势卵泡液使卵母细胞和胚胎发生粘连,易于造成丢失。试验3:与未添加BFF的对照组相比,成熟培养液中分别加入10%、20%和40%的混合BFF,均可明显促进卵母细胞受精后的发育(P<0.05),但20%组和40%组出现卵母细胞及胚胎粘连。因此,成熟培养液中添加10%的混合BFF较为适宜。 相似文献
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Φ60~150μm牛腔前卵泡在有、无促性腺激素存在下,分别添加0、10%、15%、20%牛卵泡液(BFF)的McCoy′s 5 a无血清系统体外培养15 d,测定其雌二醇(E2)分泌量。结果显示:各添加卵泡液组在培养3、6、9、12 d的E2分泌量均显著高于对照组(0组)(P<0.01)。当培养液中有促性腺激素(FSH、LH)存在下,各添加卵泡液组的E2分泌量更高,其中添加10%牛卵泡液组中Φ>100μm腔前卵泡在培养6 d时E2分泌量达最高,为48.96±11.54 pg/mL。表明培养液中添加一定比例牛卵泡液(BFF)可显著刺激体外培养腔前卵泡E2的分泌,促性腺激素存在下更加强了卵泡液对E2分泌的刺激作用。 相似文献
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小鼠腔前卵泡的分离采集和体外成熟研究 总被引:3,自引:0,他引:3
采用机械法和酶法结合机械法分离采集小鼠卵巢 ,每只小鼠可获腔前卵泡 5 3 2 5和 5 7 2 9枚 (P <0 0 5 )。成年小鼠腔前卵泡在体外培养 9d ,换用成熟培养液继续培养 2 4~ 2 8h后 ,3种不同培养系统中卵泡的成熟分裂率分别为 5 47%、3 85 %和 9 31%。表明EMEM +5 %FCS +0 2 3mmol/mL丙酮酸钠 +2 0 μg/mLFSH +0 0 5mmol/mL次黄嘌呤 +2 0 0IU/mL青 -链霉素培养系统可以使小鼠腔前卵泡卵母细胞在体外发育达到成熟 相似文献
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对哺乳动物包括啮齿类和家畜等卵巢腔前卵泡体内和体外发育,近几年的研究结果进行分析,认为哺乳动物卵巢腔前卵泡体内的发育模式基本相似,但不同动物又具有各自的特点。腔前卵泡在合适的培养条件下能在体外发育并成熟,促性腺激素和生长因子等在其体外发育过程中具有调节作用。发育过程中卵泡质量的鉴定和卵母细胞标准的确定及培养体系的建立是该领域需要解决的问题。 相似文献
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山羊腔前卵泡的分离 总被引:9,自引:0,他引:9
采用两种方法分离山羊卵巢腔前卵泡。方法1(M-1):将卵巢剪成碎块(<3mm),用01%胶原酶消化处理,吸管吹打,离心洗去胶原酶并置入网筛内过筛后检卵。方法2(M-2):用组织切碎机将卵巢切成碎块,经吸管吹打制成的组织悬液置入网筛内过筛后检卵。将不同年龄山羊对称分成两组,M-1和M-2分离的腔前卵泡头均数分别为1164和1383个,其中正常卵泡比例分别为296%和274%,差异不显著(p>005)。采用M-1分离初情期前山羊腔前卵泡效果最佳,平均每只羊可获得16082个腔前卵泡,其中正常卵泡数平均为4936个;而在成年山羊则分别为3500和667个(p<001)。采用M-2分离成年山羊腔前卵泡头,其效果明显优于M-1(p<005)。 相似文献