多种动物血清中生物活性LH/CG的放射受体测定法(RRA)

利用绵羊卵巢黄体细胞膜作为 LH / CG受体来源 ,以放射性12 5 I- h CG作为示踪标记配体 ,以高纯度的h CG为标准品建立标准曲线 ,建立了一种有效的 LH- RRA测定方法。它能够直接检测多种动物血清中与受体结合的具有生物活性的 LH的动态变化。该法测定程序简单 ,在 2 h内完成并获得可重复性结果。测定方法的灵敏度为 0 .3ng/管 ,批内和批间误差分别为 ( 3.4 1± 3.14 ) %和 ( 8.70± 7.93) %。动物 (牛、兔、猪 )垂体液中 LH含量反应曲线和 h CG标准曲线平行良好。牛、羊、猪、兔、鼠和仓鼠血清中 LH的剂量反应曲线和h CG标准曲线的平行性表明 ,该 LH- RRA可以用来检测不同动物血清中的具有生物活性的 LH变化。回收试验表明 ,在该测定方法中加入 3、10、30 ng h CG时的回收率分别为 ( 10 0 .59± 5.55) %、( 99.55± 9.86 ) %、( 10 4 .2 8± 7.4 5) %,说明测定结果的正确性。该 LH - RRA的测定结果反映了动物正常的生理状态。本试验垂体中有活性的 LH水平远远高于外周循环中的水平 ,雌、雄动物循环血液中的 LH含量不一致。     

cGnRH对鸡卵泡膜细胞增殖的作用

建立鸡卵泡膜细胞体外无血清贴壁培养模型，研究了鸡促性腺激素释放激素（cGnRH－Ⅱ）对鸡卵泡膜细胞增殖的作用。细胞在培养箱内预培养约24h后进行各项处理，继续培养72h后，分别用胰蛋白酶消化成单个细胞，然后计数。结果表明：cGbnRH－Ⅱ能促进膜细胞增殖，作用效果具有剂量依赖关系；该促进作用能被GnRH拮抗剂（G－Ant）所阻断。这提示cGnRH－Ⅱ对膜细胞增殖的刺激作用有可能通过与膜细胞上特异的GnRH受体结合而起作用的。     

次黄嘌呤对猪卵母细胞体外自发成熟抑制作用的研究

利用猪卵母细胞体外无血清培养技术,研究了次黄嘌呤（ＨＸ）对猪卵母细胞体外自发成熟的抑制作用。猪卵丘－卵组细胞复合体（ＣＯＣ）和裸卵母细胞（ＤＯ）取自初情期猪卵巢,培养在Ｍ－１９９培养液中,并施以各种自理培养不同时间后,观察卵母细胞核成熟（ＧＶＢＤ）情况。实验结果表明：⑴ＨＸ（１－４mmol/Ｌ）对猪ＣＯＣ的自发成熟具有抑制 作用,且具有剂量领事关系。４mmol/Ｌ的ＨＸ对ＣＯＣ和ＤＯ自发成熟的抑制作用,且具     

小鼠卵母细胞体外自发成熟与成熟抑制的研究

本实验建立了昆明白小鼠卵丘-卵母细胞复合体（CEO）、自然课卵（NO）和探卵（DO）3种细胞模型,并观察其在体外培养时卵母细胞的成熟情况。3种细胞模型在M199培养液中自发成熟时,其卵母细胞生发泡破裂（GVBD）主要发生在培养后1～5h。培养至24h,CEO、DO和NO的GVBD发生率分别为97．3％,87．3％和81．2％,CEO和NO间GVBD％差异显著（P＜0．05）。CEO中卵母细胞的第一极体（PB1）主要集中在8～14h排出（24h时,PBI％为86．6％）,DO主要在10～16h排出PBI（24h时,71．7％）,而NO在培养24h内很少有PB1排出（17．4％）。4mmol·L－1次黄嘌吟（HX）能显著抑制体外培养的CEO,NO和DO的GVBD发生和PBI的排出。当卵母细胞从有腔卵泡释放入不含HX的环境,然后再放入含HX的环境时,不可逆地启动了一部分卵母细胞减数分裂的恢复。说明：①印丘细胞对印母细胞GVBD的发生和PBI的排出有促进作用;②HX可以抑制卵母细胞体外成熟。     

Forskolin对昆明白小鼠卵母细胞体外成熟及卵丘扩展的影响

初步探讨了在体外培养条件下ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对昆明白小鼠卵母细胞成熟和卵丘扩展的影响,培养体系中存在ＨＸ时,ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ能显著促进卵丘－卵细胞复合体（ＣＥＯ）的卵丘扩展,但对其卵母细胞成熟（即ＧＶＢＤ）无明显影响。没有ＨＸ存在时ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ在培养期的１～６小时内可抑制ＧＶＢＤ发生,该作用一依赖性,１０μｍｏｌ ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ抑制ＧＶＢＤ,但培养至２４小时,ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ对卵母细     

组织切片法观察昆明白小鼠卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系

三实验应用组织切片法探讨了体内正常生理条件下昆明白小鼠卵巢内卵丘扩展与卵母细胞成熟的关系。初情期前小鼠注射孕马血清促性腺激素,４８ｈ后注射人绒毛膜促性腺激素,于注射ＨＣＧ后不同时间取出卵巢进行组织切片。注射ＨＣＧ后１ｈ,卵丘细胞开始扩展,此时卵母细胞核膜完整,即未发生生发泡破裂;注射ＨＣＧ后３ｈ,大部分大有腔卵泡中卵母细胞发生ＧＶＢＤ,此时卵丘处于２级扩展状态。卵丘完全扩展发生在注射ＨＣＧ后９ｈ,     

猪卵丘卵母细胞复合体和壁层颗粒细胞上LHR/hCGR的检测及性腺激素的分泌

用取自 ３～５ ｍ ｍ 卵泡的处于减数分裂阻抑状态的猪卵丘卵母细胞复合体（ｐ Ｃ Ｅ Ｏ），培养 ４８ ｈ，用 Ｆ Ｓ Ｈ（１００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）或 ｈ Ｃ Ｇ（０、５０、１００、２００、５００ Ｉ Ｕ／ Ｌ）刺激 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌甾体激素；用放射受体测定法（ Ｒ Ｒ Ａ）比较 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 的卵丘细胞及壁层颗粒细胞（ Ｍ Ｇ Ｃ）上促黄体激素受体／人绒毛膜促性腺激素受体（ Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ）的数量； Ａ Ｍ ｅ Ｘ 石蜡切片、免疫组织化学染色，检测 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在 ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 以及 Ｍ Ｇ Ｃ 的分布情况。在 Ｆ Ｓ Ｈ 作用下，ｐ Ｃ Ｅ Ｏ 分泌的孕酮明显高于 ｈ Ｃ Ｇ 作用组和对照组 （ Ｐ ＜ ００５）； 平均每个壁层颗粒细胞上的 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ是每个卵丘细胞的 １０５ 倍； Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 在基膜两侧分布较多，且卵母细胞上没有 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ，临近卵母细胞的卵丘细胞膜上较少被染色。以上结果表明，在体外试验中，可能由于 Ｃ Ｅ Ｏ 上 Ｌ Ｈ Ｒ／ｈ Ｃ Ｇ Ｒ 的数量不足或生理活性降低， Ｌ Ｈ／ｈ Ｃ Ｇ 不能促进卵母细胞恢复减数分裂。