C60-肌肽衍生物的制备及其抗氧化性研究

通过控制反应物C60以及肌肽的量,合成了三种水溶性C60-肌肽衍生物.采用红外、紫外、核磁共振、元素分析等手段对其结构进行了表征;同时考察了它们对超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力、还原能力及金属螯合能力.结果表明:随着反应物中肌肽含量的增多,制得C60-肌肽衍生物的抗氧化能力增强,这可能与-NH基的供电效应有关.     

C60-低聚壳聚糖衍生物抗氧化性的研究

在非均相碱性体系中,合成了C60-低聚壳聚糖衍生物.采用FT-IR和UV对产物进行表征,并测试了C60-低聚壳聚糖衍生物的超氧阴离子清除能力、羟基自由基清除能力、还原能力和金属螯合能力.结果表明,C60-低聚壳聚糖衍生物具有良好的抗氧化活性.     

C_(60)-D-氨基葡萄糖衍生物的制备及其抗氧化性的研究

在非均相碱性体系中,合成了C60-D-氨基葡萄糖衍生物,用FT-IR和1HNMR对产物的结构进行了表征。考察了C60-D-氨基葡萄糖衍生物的超氧阴离子清除能力、羟基自由基清除能力、还原能力以及金属螯合能力。结果表明:C60-氨基葡萄糖衍生物对超氧阴离子自由基O2-.和羟基自由基.OH的半抑制浓度分别是0.42mg/mL和0.26mg/mL;在还原能力体系中当吸光度达到0.5时,所需C60-D-氨基葡萄糖衍生物的浓度是2.44mg/mL;在金属螯合能力体系中,C60-D-氨基葡萄糖衍生物对亚铁离子的半螯合浓度是0.013mg/mL;即表明C60-D-氨基葡萄糖衍生物在4个抗氧化体系中都表现出明显的抗氧化性。并且D-氨基葡萄糖盐酸盐在4个体系中表现出的抗氧化能力都不强,说明C60-D-氨基葡萄糖衍生物的抗氧化能力可能主要来自于C60上保留下来的双键。     

C_(60)-D-氨基葡萄糖衍生物的制备及其抗氧化性的研究

在非均相碱性体系中,合成了C60-D-氨基葡萄糖衍生物,用FT-IR和1HNMR对产物的结构进行了表征。考察了C60-D-氨基葡萄糖衍生物的超氧阴离子清除能力、羟基自由基清除能力、还原能力以及金属螯合能力。结果表明:C60-氨基葡萄糖衍生物对超氧阴离子自由基O2-.和羟基自由基.OH的半抑制浓度分别是0.42mg/mL和0.26mg/mL;在还原能力体系中当吸光度达到0.5时,所需C60-D-氨基葡萄糖衍生物的浓度是2.44mg/mL;在金属螯合能力体系中,C60-D-氨基葡萄糖衍生物对亚铁离子的半螯合浓度是0.013mg/mL;即表明C60-D-氨基葡萄糖衍生物在4个抗氧化体系中都表现出明显的抗氧化性。并且D-氨基葡萄糖盐酸盐在4个体系中表现出的抗氧化能力都不强,说明C60-D-氨基葡萄糖衍生物的抗氧化能力可能主要来自于C60上保留下来的双键。     

Aβ1-42对神经干细胞的增殖和分化的影响

取新生1d的ICR小鼠的脑,经过机械分离和体外培养获取神经千细胞.利用免疫组化和RT-PCR对神经干细胞进行鉴定,发现原代的神经干细胞的纯度能达到95%以上.通过计数绘制第1代和第4代神经干细胞生长曲线图,发现二者生长曲线非常相似,说明第4代的神经干细胞仍具有较强的生长能力.在体外利用聚合后0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L、2.5μmol/L的Aβ1-42寡聚体分别作用于神经干细胞8h、24h和48h,通过MTT和克隆球计数法检测Aβ1-42对神经干细胞的增殖的影响,结果表明,随着Aβ1-42浓度增加和作用时间的延长,细胞的存活率逐渐降低.通过双盲法,免疫荧光下统计Aβ1-42寡聚体作用后神经干细胞的转分化率,检测Aβ1-42对神经干细胞的分化的影响,发现Aβ1-42对神经干细胞的分化没有明显影响,且对Aβ1-42浓度和作用时间也无依赖性.     

四种二肽对奶牛乳腺上皮细胞增殖及β-酪蛋白分泌的影响

通过添加不同浓度的二肽:蛋氨酸-蛋氨酸、赖氨酸-赖氨酸、蛋氨酸-赖氨酸、赖氨酸-蛋氨酸二肽,用CASY细胞活力分析仪检测奶牛乳腺上皮细胞的增殖和活力,用荧光定量PCR、HPLC检测β-酪蛋白的基因表达情况,确定培养24 h时四种二肽的最佳添加浓度分别为80、100、50、80μg.mL-1。以最佳二肽浓度添加时细胞的增殖分别为1.28×105、1.66×105、1.79×105、.85×105cells.mL-1,活力分别为93.72%、95.59%、94.35%、95.65%,培养液中β-酪蛋白含量分别为1.34、1.38、1.44、1.63 mg.10-5cells。为进一步利用小肽提高乳蛋白产量、调控乳蛋白合成提供理论依据。     

沙棘叶水溶性多糖分级组分抗氧化活性的研究

为了研究沙棘叶水溶性多糖分级组分的体外抗氧化活性,采用热水浸提、乙醇分级沉淀,得到沙棘叶水溶性多糖分级组分：WPFH60、WPFH70、WPFH80,经Sevag法脱蛋白,透析,冷冻干燥后备用。通过还原力、清除超氧阴离子、清除羟基自由基和抑制H2O2诱导红细胞氧化溶血试验来评价3个组分的体外抗氧化能力,并与BTH进行比较。结果表明：WPFH60、WPFH70和WPFH80均具有一定的抗氧化活性,且呈显著的量效关系。其中,WPFH70对O2-和OH-具有较强的清除作用,IC50分别为：311.1和179.9μg.mL-1;对H2O2诱导红细胞氧化溶血及MDA生成有很强的抑制作用,IC50分别为：194.3和174.5μg.mL-1。WPFH60、WPFH70和WPFH80在一定浓度范围内都具有抗氧化性,是一种天然的抗氧化剂。     

Bacillus subtilis LC-9产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质与催化特性研究

[目的]系统研究Bacillus subtilis LC-9所产β-1,3-1,4-葡聚糖酶的酶学性质,探讨其在催化应用上的可行性。[方法]采用两步阴离子交换层析法对B.subtilis LC-9发酵液中的β-1,3-1,4-葡聚糖酶进行纯化,用SDS-PAGE检测其纯度,研究纯酶的酶学性质及该酶对β-葡聚糖和地衣多糖的降解特性,并采用TLC法检测其水解液中糖的成分。[结果]从自行筛选的糖苷酶产生菌B.subtilis LC-9的发酵液中经两步纯化,得到电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,其比活力达3 502 U/mg,表观分子量为28 kDa;酶的最适反应pH和温度分别为6.5和45℃,且在45℃下稳定;该酶催化地衣多糖的Km值和Vmax分别为4.13 mg/ml和1 238μmol/min/mg,催化大麦β-葡聚糖的Km值和Vmax分别为3.84 mg/ml和1 427μmol/min/mg;该酶降解大麦β-葡聚糖产生寡聚糖,最终产物主要为三糖和四糖,而降解地衣多糖终产物主要为三糖。[结论]从Bacillus subtilis LC-9发酵液中纯化获得了电泳纯的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,性质研究表明该酶是专一性的β-1,3-1,4-葡聚糖酶,有望用于啤酒、饲料等领域。     

饲料中β-胡萝卜素和虾青素添加量对仿刺参幼参生长及抗氧化能力的影响

在水温11．0～20．0℃、盐度35、pH7．5的实验室条件下,将初始平均体质量为3．89g的仿刺参Apostichopusjaponicus幼参放养在60L的塑料水槽中,投喂添加30、60、90mg／kg β-胡萝卜素和虾青素的饲料,分别记为A、B、C、D、E、F组,以不添加此物质的基础饲料作为对照（G组）,每组设3个重复,饲养80d后测定幼参的生长和几种抗氧化酶的活性。结果表明：摄食添加β-胡萝卜素的饲料时,仿刺参的特定生长率随添加量的增加而升高,A、B、C组分别比对照组提高6．67％、73．33％和100．0％,但仅C组与对照组差异显著（P〈0．05）;摄食添加60mg／kg和90mg／kg虾青素的饲料时,仿刺参的特定生长率比对照组提高113．33％和66．67％,但仅E组与对照组差异显著（P〈0．05）;试验组仿刺参体腔液中的总抗氧化能力（T-AOC）随饲料中β-胡萝卜素和虾青素含量的增加而升高,除A、B组外其余各试验组均显著高于对照组（P〈0．05）,饲料中添加虾青素的各组仿刺参体腔液的平均总抗氧化能力（12．77U／mL）比添加β-胡萝卜素的各组平均值（8．77U／mL）高45．61％,表明虾青素的抗氧化能力高于β-胡萝卜素;C、E、F组仿刺参体腔液中的SOD和CAT活性均显著低于对照组（P〈0．05）,而A、B、D组与对照组差异不显著（P〉0．05）;试验组仿刺参肠道蛋白酶和淀粉酶活力及体壁成分较对照组均无显著差异（P〉0．05）。     

6-溴-1-异丙烯基-1H-咪唑［4,5b］吡啶-2-酮酰胺衍生物的合成及其抑菌活性研究

【目的】研究6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物抑制真菌活性的构效关系,为病原菌的防治提供参考依据。【方法】以5-溴-2,3-二氨基吡啶为原料,经乙酰乙酸乙酯环化制得中间体化合物6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮,再按照目标化合物合成路线设计合成6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物。通过核磁共振、质谱以及元素分析对目标化合物进行结构表征。以嘧菌酯为对照,采用菌丝生长速率法测定目标化合物对小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、玉米弯孢霉病菌(Curvularia lunata)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporumf.sp.vasinfectum)、茄子黄萎病菌(Verticillium dahlia)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)和苹果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)的抑菌活性。【结果】合成了17个6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮酰胺衍生物,其中脂肪羧酸酰胺衍生物10个(B01-B10),芳香羧酸酰胺衍生物6个(B11-B16),杂环羧酸酰胺衍生物1个(B17)。抑菌活性测定结果表明,17个目标化合物对供试病原真菌均有一定的抑菌活性,其中化合物B01,B03-B06和B13在100μg/mL质量浓度下对部分供试病原真菌菌丝生长有明显的抑制作用,尤以化合物B06的抑菌活性最为突出,抑制率均可达到70%以上,其对6种供试植物病原真菌的EC50值分别为8.23,49.32,21.45,24.87,36.40和28.65μg/mL,均高于对照药剂嘧菌酯。【结论】6-溴-1-异丙烯基-1 H-咪唑[4,5b]吡啶-2-酮衍生物对6种供试病原真菌均具有一定的抑制活性,该类化合物的结构具有进一步改造研究的价值。     

β淀粉样肽25-35对PC细胞p53和bcl-2基因表达的影响

目的：观察β淀粉样肽25-35（β-amyloidpeptide25-35,Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡和对p53及bcl-2基因表达的影响。方法：采用终浓度分别为0、5、10、20μmol／L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率,Hoechst33258-PI荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变,DNA电泳观察梯状条带(DNA-Ladder),RT-PCR和Western blot检测p53和bcl-基因表达变化。结果：随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低,凋亡明显增加,p53基因表达增加,bcl-2基因表达降低。结论：Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡可能与上调p53基因,下调bcl-2基因有关。     

甘氨酸-β-环糊精对土壤中铅的增溶解、吸行为研究

为改善β-环糊精(β-CD)的水溶性及对重金属的配位能力,将β-环糊精和甘氨酸在碱性条件下用环氧氯丙烷连接起来,合成水溶性极好并能跟重金属形成配位作用的甘氨酸-β-环糊精(GCD),研究了GCD对铅的增溶、解吸行为,考察了pH、离子强度、有机质和甘氨酸-β-环糊精初始浓度对铅的解吸影响.结果表明,GCD对碳酸铅的增溶效果显著,当其浓度为30 g·L-1时,水溶液中铅离子浓度可接近7 000 mg·L-1.GCD对铅解吸能力随着土壤中有机质含量的增加而降低,pH值的升高、离子强度的增加和GCD初始浓度增加有利于铅的解吸.GCD对铅污染土壤的解吸符合准二级动力学模式,该静态解吸研究可以为铅污染土壤的修复提供基础信息.     

β-胡萝卜素发酵促进因子筛选及均匀试验设计优化

[目的]提高三孢布拉霉发酵产β-胡萝卜素的能力。[方法]对6种发酵促进剂的添加浓度及其交互作用进行系统的研究。通过单因素试验考察确定了各发酵促进剂的最适添加浓度范围,在此基础上,运用均匀设计对组合配方优化。[结果]当发酵过程中添加0.4 mmol/L MgCl_2、20.0μmol/L H_2O_2、0.1%Span 20、1.8%正癸烷、0.2 mmol/L甲酸钠以及1.1 g/L柠檬酸三钠时,β-胡萝卜素产量可达到2.27 g/L,较对照组提高了77.30%。[结论]经过优化后的发酵促进剂组合配方能够显著提高三孢布拉霉产β-胡萝卜素的能力。     

星点设计-效应面法优化连翘颗粒剂的制备工艺研究

试验以药用糊精含量、乙醇浓度、干燥温度为主要影响因素,以最低抑菌浓度(MIC)为评价指标,用星点设计-效应面法选择制备工艺的最佳条件。结果表明,连翘颗粒剂的最佳制备工艺条件为:药用糊精含量67.03%,乙醇含量72.91%,干燥温度35.94℃,3个参数为自变量的二次回归模型方程为R1=0.010-1.914.10-3×A+2.288.10-4×B+2.288.10-4×C-1.172.10-3×A×B+1.953.10-3×A×C-3.906.10-4×B×C-4.374.10-4×A2+6.675.10-4×B2-1.542.10-3×C2,利用以上最优工艺,生产三批产品并测定MIC值,均为0.00625μg.mL-1。以上结果显示,用星点设计-效应面法优选连翘颗粒剂的制备工艺方法简便,预测性好。     

4种珍稀食用菌粗多糖的抗氧化活性研究

用DPPH自由基清除法、羟基自由基清除法、铁离子鳌合能力和还原能力等方法对4种野生珍稀食用菌美味牛肝菌、羊肚菌、松茸和印度块菌的粗多糖进行了抗氧化活性评价。结果显示,4种真菌粗多糖均不同程度地具有抗氧化活性。印度块菌对DPPH自由基的清除活性和铁离子螯合能力最高,其EC50值分别为0.86 mg.mL-1和0.63 mg.mL-1;羊肚菌对羟基自由基的清除活性最高,其EC50值为0.38 mg.mL-1;美味牛肝菌的还原力最高,其EC50值为0.85 mg.mL-1;松茸清除DPPH及羟基自由基的能力最低,铁离子螯合能力也较低。     

EGF和β-巯基乙醇对羔羊卵母细胞体外受精和体外发育的影响

[目的]为优化幼畜卵母细胞体外培养体系提供理论基础。[方法]研究在成熟液中添加EGF和β-巯基乙醇对绵羔羊卵母细胞受精和卵裂、囊胚情况的影响,并与成年绵羊卵母细胞进行比较。[结果]在成熟液中添加不同浓度的EGF对羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率无显著影响(P0.05)。添加不同浓度的β-巯基乙醇可以提高羔羊卵母细胞囊胚率,其中添加100μmol/Lβ-巯基乙醇有显著影响(P0.05),但对卵裂率影响不显著(P0.05)。羔羊卵母细胞卵裂率和囊胚率均显著低于成年羊(P0.05)。添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞正常受精率(P0.05),且与成年羊卵母细胞受精率差异不显著(P0.05)。未添加β-巯基乙醇多精入卵率显著高于成年羊(P0.05),而添加100μmol/L的β-巯基乙醇多精入卵率与成年羊差异不显著(P0.05)。成熟液中不添加β-巯基乙醇时未受精率(20.0%)高于成年羊组(12.3%)和β-巯基乙醇(13.5%),但差异不显著(P0.05)。[结论]添加100μmol/L的β-巯基乙醇能显著提高羔羊卵母细胞发育能力,提高正常受精的比例并减少多精子受精的发生,但羔羊卵母细胞发育能力仍显著低于成年羊。     

高效液相色谱-二极管阵列检测器法测定水蜜桃中水溶性有机酸和维生素的含量

采用高效液相色谱-二极管阵列检测器法(HPLC-DAD) 同时检测水蜜桃中水溶性有机酸和维生素含量.样品经纯水超声波提取、离心和膜过滤,ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm) 液相色谱柱分离,以0.5 mmol·L-1磷酸-乙腈梯度洗脱,流速0.8 mL·min-1;二极管阵列检测器(DAD) 同时以210 nm波长检测苹果酸、柠檬酸、琥珀酸,254 nm波长检测烟酸、维生素C、维生素B1,270 nm波长检测维生索B2.结果显示:待测成分在8 min内达到良好的基线分离,线性范围广,苹果酸、柠檬酸、琥珀酸的检出限为0.5μg·mL-1,烟酸、维生素C、维生素B.的检出限为0.1μg·mL-1,维牛素B2的检出限为0.05 μg·mL-1.方法的加标同收率为97.0%～102.3%,线性相关系数为0.999 3～0.999 9,精确度平均偏差0.33%～1.97%.该方法适用于水蜜桃样品中多种水溶性有机酸和维生素的同时测定.     

牛旁检测诊断产后初期奶牛亚临床酮病研究

 酮病是奶牛的一种重要的营养代谢病。采用酮粉法、尿液分析试纸条、乳汁分析试纸条、试剂盒法分别对乳酮、尿酮和血酮含量进行检测,以血清β-羟丁酸含量1200μmol/L作为健康奶牛和亚临床酮病奶牛的诊断标准。乳汁检测试纸条和尿液分析试纸条的诊断标准分别为200μmol/L和15mg/dl（1470μmol/L）。酮病牛血清β-羟丁酸和葡萄糖的浓度分别为726±43μmol/L、3.42±0.05mmol/L,健康牛血清β-羟丁酸和葡萄糖的浓度分别为2563±238μmol/L、2.78±0.07mmol/L,差异显著（P<0.05）。乳汁分析试纸条的敏感性和特异性分别为67%和92%,尿液分析试纸条的敏感性和特异性分别为57%和85%,酮粉的敏感性和特异性的敏感性和特异性分别为60%和94%。使用乳汁分析试纸条牛旁检测是一种有效的奶牛亚临床酮病诊断方法。     

对苯二酚在希夫碱铜配合物修饰电极上的电化学行为及其测定

合成席夫碱过渡金属配合物[Cu(Sal-β-Ala)(3,5-DMPz)2].2H2O(Sal为水杨醛,β-Ala为β-丙氨酸,3,5-DMPz为3,5-二甲基吡唑),并采用电沉积方法制备[Cu(Sal-β-Ala)(3,5-DMPz)2]/GC修饰电极,考察对苯二酚在该修饰电极表面的电化学行为,确定氧化电流与对苯二酚浓度之间的线性关系,并优化检测条件。结果表明:[Cu(Sal-β-Ala)(3,5-DMPz)2]/GC修饰电极对对苯二酚有良好的催化作用,且对苯二酚在修饰电极表面的电化学过程为扩散控制。在对苯二酚浓度为4～120μmol/L范围内,氧化峰电流与对苯二酚浓度之间存在良好的线性关系,检出限为0.28μmol/L。     

QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法测定动物源性产品中9种β-受体激动剂残留

建立了一种测定牛肉中9种β-受体激动剂残留的HPLC-MS/MS方法。样品中加乙酸铵缓冲溶液,经β-葡萄糖醛苷酶/芳基硫酸酯酶酶解,2%甲酸-乙腈溶液提取,硫酸镁和乙酸钠盐析,采用N-丙基乙二胺(primary secondary amine,PSA)和十八烷基硅烷C18净化,正离子多反应监测模式测定,基质匹配标准溶液内标法定量。在优化条件下,9种β-受体激动剂在0.25～4.00μg/kg浓度范围内线性良好,定量限均为0.25μg/kg;0.25、0.50、2.50μg/kg共3个浓度添加水平平均回收率在67.73%～114.13%之间,变异系数在1.45%～9.14%之间。该方法灵敏度高、重现性好、操作简单、效率高,可用于畜产品中常见β-受体激动剂残留的检测确证。