蛋白酶高产菌株的选育

用严谨的分离纯化方法对土壤中产蛋白酶的菌株进行筛选,再用紫外诱变的方法对土壤中的蛋白酶高产菌株进行筛选,最后对得到菌株进行形态、生理生化的鉴定。已知土壤中产蛋白酶的菌株会使含有蛋白质的培养基产生透明圈,透明圈直径与菌落直径的比值与菌株产蛋白酶量成正比。一般紫外诱变会使菌株发生正诱变。     

高产脂肪酶菌株的筛选鉴定

通过变色圈法和透明圈法从泥土中筛选出脂肪酶产生菌,并根据菌株的菌落形态、革兰氏染色和16SrDNA序列分析确定筛选得到菌株的种属。采用罗丹明B(Rhodamine B)平板初筛出51株脂肪酶产生菌,以荧光圈直径或透明圈直径与菌落直径的比值(HC)为指标,选取HC1.60的9株脂肪酶产生菌,采用橄榄油乳化液平板进行复筛,对HC进行测量比较筛选出1株高产脂肪酶的菌株L-17,其HC为2.27。利用透明圈法对菌株L-17的粗酶液的酶活力进行测定,HC为3.07,表明菌株L-17具有较高的酶活力。菌株L-17经初步鉴定为洋葱伯克霍尔德菌(Burkholderia cepacia),为一株高产脂肪酶的菌株,具有潜在的研究和开发价值。     

产果胶酶黑曲霉的筛选及诱变育种

以黑曲霉(Aspergillus niger)HY为出发菌株,进行了紫外线诱变.初筛使用透明圈法,从果胶平板上的突变菌株中,挑取了120株透明圈与菌落直径比值显著大于出发菌株的突变株.将这些突变株进行三角瓶固体发酵复筛,最后筛选出1株高产果胶酶的突变株HY-D3.突变株HY-D3经斜面传代培养了5代,产酶遗传特性稳定,其果胶酶产量可达2000U/g干基以上,比出发菌株提高了1倍.     

庆阳地区自然发酵辣椒酱优势菌种筛选及鉴定

以甘肃庆阳地区自然发酵的辣椒酱为材料,采用平板透明圈、分解亚硝酸盐试验对发酵优势菌种进行初筛,通过产酸能力、产亚硝酸盐量进行复筛,并通过发酵菌株耐盐、耐温、耐酸、产酸等耐受性试验对自然发酵辣椒酱优势菌种进行了分离、筛选及鉴定.结果表明:初筛获得18株菌株中6株可产生透明圈,其中Q3菌株透明圈直径最大、产酸能力好,发酵液pH值、亚硝酸盐含量可降至4.63、0.54mg/kg;Q3菌落呈圆形,乳白色,表面光滑呈凸面,边缘整齐,黏滑,不透明;革兰氏染色、糖发酵、甲基红试验呈阳性,过氧化氢酶、运动性、明胶液化、硫化氢、吲哚反应呈阴性;16SrRNA鉴定属植物乳酸杆菌(Lactobacillus plantarum).     

水中产胞外蛋白酶细菌的筛选及其酶学性质

为蛋白酶制剂的工业化生产提供新的候选菌株及进一步研发奠定理论基础,从都匀市附近不同水域的20个样品中,采用酪蛋白平板透明圈法筛选产胞外蛋白酶菌株,采用形态学观察结合16SrDNA序列比对酶活性较高的菌株进行鉴定,福林酚法测定其粗蛋白酶液的最佳酶活条件。结果表明:共分离纯化到可形成透明圈的产胞外蛋白酶菌株1 000余株,其中透明圈/菌落直径比(HC)均≥6.0,即蛋白酶活性均较高的菌株5株(S1~S5);经形态学观察结合16SrDNA序列的比对分析鉴定,S1和S3为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii),S2为粉虱肠杆菌(Enterobacter tabaci),S4为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens),S5为福氏志贺氏菌(Shigella flexneri);粗蛋白酶液最佳酶活的最适温度,S1为50℃,S2、S3和S5为45℃,S4为40℃;最适pH,S2和S4为7.0,S3和S5为7.5,S1为8.0;最适温度和pH条件下S3酶活最高,达44.32U/mL,比市售产蛋白酶地衣芽孢杆菌酶活(37.26U/mL)高18.95%。     

西藏产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌分离及鉴定

[目的]为了从西藏林芝分离出产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌。[方法]根据西藏林芝的实际,从西藏林芝八一镇的屠宰场附近的土壤、污水中采样和30℃培养分离。以水解弹性蛋白形成透明圈直径与菌径之比最大的菌株作为研究对象,对弹性蛋白和酪蛋白平板水解的透明圈直径和菌径进行测量,对其个体形态、菌落特征、生理生化特征方面进行鉴定。[结果]据个体形态、菌落特征、生理生化特征,所分离出的菌株鉴定为枯草芽孢杆菌。在弹性蛋白和酪蛋白平板上,菌株的平均HC分别为1.64和2.57。该菌产弹性蛋白酶、淀粉酶、过氧化氢本酶,分解酪蛋白的酶。[结论]该研究为保藏西藏特有的产弹性蛋白酶的枯草芽孢杆菌奠定基础。     

僵蚕白僵菌生物学特性的基础研究

4椿家蚕白僵菌(Bb1、Bb2、Bb3和Bb4)在不同培养基上的菌落生长速率和产孢量有较显著差异,菌丝生长速率与产孢量呈负相关。Bb2生长速率最快,Bb3产孢量最多。在PDA培养基上产孢量最少,其培养物对蚕幼虫的毒力较弱;而在CPDA培养基上产孢量最多,其培养物的毒力最强。4种菌株最适生长温度在25—30℃之间。菌株Bb1和Bb2最适生长pH值为5.0,Bb3和Bb4的最适生长pH值均为6.0。     

番茄早疫病菌生物学特性及致病力研究

在ＰＳＡ上菌丝灰白色至灰褐色，部分菌株可产生黄色素渗入培养基。菌落生长５ｄ直径为５４～７０ｍｍ，最适生长温度为２３～２８℃，最适ｐＨ为６～８。菌株通常在ＰＳＡ上不产孢，但在玉米粉培养基上，经光照和变温处理，产孢较多。分生孢子在２５℃、湿润条件下萌发率较高。不同地区菌株间致病力有明显差异。     

金属离子对细菌源蛋白酶稳定性的影响

用透明圈法从六株产蛋白酶细菌菌株P1-P6中选出一株酶活较大的菌株P5,用紫外分光光度法对5个不同浓度、7种不同金属离子影响P5菌株的蛋白酶稳定性进行了初步研究。结果表明：菌株P5的最适生长温度40℃,最适pH 7.2;一定浓度的Fe^3＋、Mg^2＋、Ca^2＋、Zn^2＋4种离子具有增强酶热稳定性的作用,Mn^2＋...     

天山一号冰川产蛋白酶酵母菌的筛选及其系统发育分析

[目的]筛选天山一号冰川底部沉积层耐低温的产蛋白酶菌株,研究其生理生化特性并做系统发育分析.[方法]以天山一号冰川底部沉积层中耐低温产蛋白的酵母菌株为材料,用Yeast Extract Peptone Dextrose Medium(YPD)培养基活化60株酵母菌;再用选择性培养基筛选产蛋白酶的菌株,观察菌落形态;测定产酶菌株最适温度;最后基于26S r DNA基因D1/D2区序列进行系统发育分析.[结果]从60株酵母菌中共筛选出10株产蛋白酶菌株,其中产酶优势菌为BCY-8、BCY-20,产酶酵母细胞平均大小为2.60～5.00μm,最适生长温度为24℃.经系统发育分析可知,10株产酶酵母菌属于隐球菌(Cryptococcus)、红酵母属(Rhodotonla)、南极酵母(Antarcticyeast)、Uncultured fungus、Mazocraeoides gonialosae.[结论]研究可为低温蛋白酶生物技术的研发奠定基础.     

金枪鱼肉降解用高产蛋白酶菌株的筛选及鉴定

采用透明圈法从舟山普陀白山土壤中筛选出3株能分泌胞外蛋白酶的菌株,并对蛋白酶活力最高的菌株进行分子鉴定及最适宜生长条件分析。选择福林酚试剂法测定其蛋白酶活力,对蛋白酶活力最高的菌株进行16S r RNA基因测序,用MEGA软件构建系统发育树,并考察其接种量、温度、时间对该菌株产酶活力的影响。结果表明,zjoub-1菌为高产蛋白酶菌属,并确定为枯草芽孢杆菌。该菌株用于金枪鱼暗色肉发酵时的最适宜条件为接种量2%、pH 7.4、温度37℃、时间48 h。在此生长条件下,菌株产蛋白酶活力最高,为49.21 U/m L,能够有效地降解金枪鱼暗色肉。     

耐有机溶剂蛋白酶生产菌的筛选

由南京紫光精细化工厂污水中筛得一株耐苯微生物,且能大量分泌蛋白酶,经菌种鉴定,确认其为盐芽孢杆菌。该菌所产生的蛋白酶对脱脂奶粉蛋白质有较强的水解能力,产生的菌落透明圈与菌落直径比（R）为2．3,该茵能耐受苯、甲苯等多种有机溶剂。该菌所产蛋白酶粗酶的最适反应温度为50℃,最适pH值10．0,亚铁离子能有效提高其活性,且对含有50％（V／V）的苯、甲苯等多种有机溶剂具有良好的耐受性,可望将该酶应用于有机溶剂介质酶催化反应的生产工艺中.     

桃采后褐腐病生防酵母菌的筛选及鉴定

为筛选对由美澳型核果褐腐病菌(Monilinia fructicola)引起的桃褐腐病具有抑制作用的酵母菌株,采用平板对峙的试验方法,从新疆北部12个地区分离的102株酵母菌中筛选出7株对桃褐腐病菌具有显著抑制作用的酵母菌株,其中菌株EEQS-7D拮抗活性最强,该菌株对桃褐腐病菌的抑菌率达78.90%。人为打孔接种活体试验结果表明,该菌株可显著降低桃褐腐病发病程度,抑制率达51.83%。生防相关性状检测结果显示,该菌株能够产生蛋白酶,透明圈直径达到34.5 mm,说明EEQS-7D主要通过分泌蛋白酶达到抑制桃褐腐病的效果。通过对菌株EEQS-7D的形态特征观察、生理生化测试以及26S r DNA序列分析,鉴定该菌株为出芽短梗霉(Aureobasidium pullulans)。     

纤维素降解菌的分离、鉴定及其产酶特性研究

从纤维素富集的环境中分离到3株能以羧甲基纤维素钠(CMC-Na)为唯一碳源的纤维素降解菌,采用纤维素-刚果红染色法进一步筛选,获得透明圈较大的菌株1株,命名为为B1。经菌落、菌体形态观察、生理生化实验及分子生物学鉴定,初步确定为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),该菌株表现出了较高的滤纸崩解能力和较高的纤维素酶活力。通过培养条件的优化,发现该菌株在起始p H值为5.0的培养基中,37℃培养36 h,其纤维素酶活力可达64.22 U/m L。     

一株氨氮降解菌的筛选及其降解特性的初步研究

从上海崇明警备区富民养猪场污水处理池的污泥中分离得到1株去除氨氮效果较好的菌株（代号CM3）,对其氨氮降解特性进行了研究。初步研究表明,CM3菌株降解氨氮的最适温度和pH值分别为30℃和8．0,在氨氮初始浓度为300mg／L时,4d内其氨氮降解率可达40％以上,并可利用多种含碳化合物作为碳源生长。因此,CM3菌株具有一定的降解氨氮能力和潜在的应用价值。     

棉花黄萎病拮抗细菌胞外酶检测及其酶活测定

【目的】研究Bacillus vanillea SMT-24、Bacillus velezensis BHZ-29、Bacillus subtilis SHT-15、Bacillus atrophaeus SHZ-24菌株产真菌细胞壁降解酶能力,为4株拮抗菌的机理研究及开发利用提供依据。【方法】通过平板透明圈法初步测定4株拮抗菌产胶体几丁质酶、蛋白酶、葡聚糖酶、纤维素酶种类;采用DNS法定量几丁质酶活、纤维素酶活、葡聚糖酶活,采用福林-酚法定量蛋白酶活。【结果】平板透明圈法显示:SMT-24菌株产蛋白酶、葡聚糖酶、纤维素酶,BHZ-29菌株产蛋白酶、纤维素酶、葡聚糖酶,SHT-15菌株产蛋白酶、葡聚糖酶、纤维素酶,SHZ-24菌株产几丁质酶、蛋白酶、葡聚糖酶;DNS法、福林酚法定量结果显示:在发酵期间酶活总体呈现先增加后减小的趋势,与细菌生长对数期增长趋势相同(酶活低于3.00 IU除外);4株拮抗菌酶活比较中,SHZ-24菌株产几丁质酶活最高,酶活最高为(12.37±0.15) IU;SHZ-24菌株产蛋白酶活最高,最高值达(24.22±0.45) IU,SMT-24、SHT-15菌株产葡聚糖酶活较高,最高酶活分别(12.29±0.23) IU、(12.07±0.59) IU,SMT-24菌株产纤维素酶活最高,酶活最高达(6.43±0.24) IU。【结论】4株拮抗菌均产几丁质酶、葡聚糖酶、纤维素酶、蛋白酶,酶活随发酵时间呈现先增大后减小的趋势,在细菌对数期,酶活与细菌数量呈正相关关系(酶活低于3.00 IU除外)。     

一株海洋贝类肠道琼胶降解菌的筛选与鉴定

以琼胶为唯一碳源,从海洋贝类肠道微生物共筛选出44株降解琼胶的海洋细菌,通过初筛和DNS法测定酶活得到一株产酶最高的菌株A-001,酶活力可达到13.01 U·m L-1.菌落形态为乳白色,革兰氏阴性菌,呈弯曲短杆状,通过微生物动力学实验,细菌A-001具有运动性.据生理生化特征和16Sr DNA序列可鉴定A-001为溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus).     

固氮菌分离纯化后菌株的初步鉴别

从河南省不同土类中利用Ashby培养基分离纯化出发菌 1 3株 ,分别接种于无机磷培养基、硅酸盐培养基和牛肉膏蛋白胨培养基上 ,通过观察菌株在不同培养基上的菌落色泽、形状、是否产气导致培养基开裂、在无机磷培养基上有无透明圈等现象 ,找出每个菌株不同于其他菌株的典型特征 ,从而确认供试菌株为不同的菌株 ,这是对菌株进行深入研究前必须进行的基础性工作 ,目的是为了避免在后续研究中出现针对相同菌株的重复性工作。     

一种筛选染料脱色真菌的新方法——脱色圈法

以孟加拉红为指示染料,利用脱色透明圈法从土壤微生物中筛选得到一株脱色菌,经初步鉴定为黑曲霉（Aspergillusniger）,并对该菌株的脱色能力进行了初步检测。结果表明：该黑曲霉菌株适应能力较强,具有较强的染料脱色能力;以孟加拉红为指示染料的脱色透明圈法分离染料脱色菌的效果好,是一种简单、方便有效的方法。